Фосфоглицераткиназа

Выделение и очистка 3-фосфоглицераткиназы из скелетных мышц кролика [c.261]

Молекулярная масса 3-фосфоглицераткиназы равна 47 000 Да фермент представляет собой одну полипептидную цепь, состоящую из 420 аминокислотных остатков. 3-Фосфоглицераткиназа из мышц кролика содержит семь SH-rpynn. Она ингибируется ионами тяжелых металлов и SH-реагентами, тогда как фермент из дрожжей имеет лишь одну SH-rpynny, модификация которой не влияет на активность. Ионы Mg2+ и Мп2+ являются активаторами. Константы Михаэлиса для 3-фосфоглицерата — 0,2 мМ, для 1,3-дифосфоглицерата — 1,8 мкМ, для АТФ — 0,1 мМ для АДФ — 0,2 мМ для Mg2+ — 0,2 мМ. [c.260]

Лактатдегидрогеназу, используемую для регенерации кофактора, и фосфоглицераткиназу иммобилизуют при степени активации 50 и 30 мг Br N на 1 г геля сефарозы. [c.298]

Иммобилизацию фосфоглицераткиназы проводят, как описано выше, используя препараты сефарозы, активированные 30 мг Br N на 1 г геля. Препараты иммобилизованной фосфоглицераткиназы могут быть использованы для синтеза 1,3-дифосфоглицерата и для определения активности глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы в реакции восстановительного дефосфорилирования 1,3-дифосфоглицерата. [c.303]

Раствор фосфоглицераткиназы в буфере А — концентрация [c.297]

Определение активности фосфоглицераткиназы [c.299]

Активность фосфоглицераткиназы определяют в сопряженной системе в присутствии избытка глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы по уменьшению концентрации НАДН. [c.299]

Суспензия иммобилизованной фосфоглицераткиназы в буфере А (1 1). [c.303]

Выделение 3-фосфоглицераткиназы из мышц кролика и изучение образования комплекса с глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой. [c.503]

Фосфоглицераткиназа катализирует реакцию переноса фосфатной группы, находящейся в первом положении в молекуле 1,3-дифос-фоглицериповой кислоты, на АДФ с образованием АТФ и 3-фосфогли-цериновой кислоты. [c.260]

Активность 3-фосфоглицераткиназы определяют в сопряженной системе, используя в качестве вспомогательного фермента 1)-глицераль-дегид-З-фосфатдегидрогеназу, катализирующую реакцию восстановительного дефосфорилирования 1,3-дифосфоглицериновой кислоты [c.261]

Реакционная смесь должна содержать следующие компоненты (указаны конечные концентрации) 80 мМ триэтаноламиновый буфер (pH 7,5), 10 мМ Мд304, 0,2 мМ НАДН, 4 мМ АТФ, 10 мМ 3-фосфо-глицериновую кислоту и 10 ед. акт/мл глицеральд ид-3-фосфатдеги-дрогеназы. Реакцию начинают добавлением 30—50 мкл раствора 3-фосфоглицераткиназы. [c.261]

G-50 для обессоливания (размер колбнки 4X40 см). Предварительно колонку уравновешивают 0,2 М ЭДТА, доведенным 1 М раствором триса до pH 7,5—7,8. В обессоленных фракциях определяют активность 3-фосфоглицераткиназы. Выход соли с колонки регистрируют пробой с ацетатом бария. Необходимо следить, чтобы белковые фракции были тщательно обессолены, так как примесь сульфата в растворе не позволит посадить белок на ионообменник (с. 108). [c.264]

Фракции, содержащие 3-фосфоглицераткиназу, объединяют и добавляют сухой сульфат аммония, доводя раствор до помутнения. Фермент кристаллизуется в течение нескольких дней. Кристаллы отделяют центрифугированием и растворяют их в небольшом объеме буфера 30 мМ имидазол, содержащий 5 мМ ЭДТА и 2 мМ дитиотреитол, pH 7,0. Медленным добавлением сухого сульфата аммония доводят раствор до помутнения. Кристаллы хранят в виде суспензии в насыщенном растворе сульфата аммония, содержащем 30 мМ имидазол, 5 мМ ЭДТА и 2 мМ дитиотреитол, pH 7,0. [c.264]

Реакционная смесь общим объемом 3 мл содержит 0,1—0,2 мл суспензии иммобилизованной фосфоглицераткиназы и следующие компоненты (даны конечные концентрации) НАДН — 2 мМ, АТФ — 3 мМ, З-фосфоглицериновая кислота — 16 мМ, MgS04 — 16 мМ, гли-церальдегид-З-фосфатдегидрогеназа — 10 ед. на пробу. Реакцию начинают добавлением 3-фосфоглицериновой кислоты и при непрерывном перемешивании определяют убыль НАДН по уменьшению оптической плотности (с. 388). [c.300]

Активность глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы определяют, используя сопряженную систему, в которой синтез 1,3-дифосфоглицера та осуществляют с помощью иммобилизованной фосфоглицераткиназы В пробу объемом 3 мл вносят 0,1—0,3 мл суспензии иммобилизован ной глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы и 0,1 мл суспензии нммо билизованной фосфоглицераткиназы (10—20 единиц активности) Концентрации остальных компонентов следующие НАДН — 2 м.М, [c.303]

ФОСФОГЛИЦЕРАТКИНАЗА (АТФ З-фос В-глице-рат 1-фосфотрансфераза), фермент класса трансфераз, катализирующий в р-циях гликолиза перенос остатка фосфорной к-ты от 1,3-дифосфоглицериновой к-ты на аденозицдифосфат с образованием АТФ и З-фосфоглицериновой к-ты. 1 али-зирует также, но с меньшей скоростью, перенос остатка фосфорной к-ты от этого же субстрата на др. нуклеотвды. [c.138]

Недавно описаны трехмерные структуры дрожжевой гексокиназы. (рис. 7-5,Л) [76], фосфоглицераткиназы, состоящей из 355 аминокислотных остатков (рис. 7-5,5) [77] и аденилаткиназы (дополнение 3-А) [78]. Последний фермент, мол. вес которого составляет 22ООО, имеет среди всех известных киназ наименьший размер молекулы. Во всех трех случаях молекула белка состоит из двух долей (или, иначе, доме- [c.126]

РИС. 7-5. А. Схематическое изображение полипептидной цепи субъединицы дрожжевой гексокиназы В. Место связывания глюкозы обозначено буквой G, а место связывания АМР — буквой А. Места связывания АТР в области между двумя субъединицами в ) азличиых типах кристаллов обозначены буквами lu и Id (по Флеттерику и др. [76]). -5. Изображение молекулы фосфоглицераткиназы. Цилиндры, представляющие а-спи-ральные отрезки цепи, пронумерованы римскими цифрами, начиная с К-конца . Стрелками представлены индивидуальные цепи в р-структуре и их направление. Стрелки обозначены буквами в алфавитном порядке, начиная с N-конца. Домен, связывающий АТР, находится в нижней части рисунка (по Блейку и Эвансу [77]). [c.127]

Глицеральдегид-3 -фосфат-дегидрогеназа лактатдегидрогеназа 8 -малатдегидрогеназа алкогольдегидрогеиаза фосфоглицераткиназа фосфорилаза Свертывание по Россману из трех параллельных -структурных цепей и двух соединительных фрагментов 2 2 [c.112]

Слиянию генов могла принадлежать важная роль в процессе эволюции основных метаболических путей. Энергетический путь метаболизма каждого из перечисленных ниже ферментов определился, вероятно, в результате объединения копии изначального (ди)нук-леотидсвязывающего домена с одним или большим числом других доменов, отличных от первого фосфоглицераткиназа [235, 310, 311], дегидрогеназы, специфичные соответственно к глицеральдегид-3-фосфату, лактату, малату и алкоголю [91], и гликоген-фосфорилаза [236]. Как обсуждалось в разд. 5.4, (ди)нуклеотидсвязывающий домен представляет N-концевую часть первых четырех ферментов, тогда как в алкогольдегидрогеназе он расположен в С-концевой части, а в фосфорилазе — в середине цепи. Это указывает на то, что ограничения в пространственном расположении доменов не вызывали затруднений при их использовании в качестве составных блоков для построения самых сложных белков в процессе эволюции. [c.229]

Фосфорильные группы фиксированы относительно остова петли водородными связями, вS-малатдегидрогеназе [6911, о-глицераль-дегид-З-фосфатдегидрогеназе [230] и лактатдегидрогеназе [230] пи-рофосфатный фрагмент NAD связан с основной цепью соответствующей петли водородными связя.ми. В случае алкогольдегидрогеназы [692] исследование связывания на примере аналога NAD показало, что пирофосфат находится в том же положении (в пределах 3 А) относительно этой петли. Во флаводоксине петля обернута вокруг фосфорильного фрагмента FMN [145, 237, 238]. Как следует из исследований связывания субстрата, в аденилаткиназе основная цепь петли обернута вокруг фосфата АМР, в кристаллической аденилаткиназе эта петля фиксирует сульфат из маточного раствора [665]. В аналогичном положении связывается АТР в фосфоглицераткиназе [310, 311]. В глутатионредуктазе [124] пирофосфорил NADP присоединяется к остову соответствующей петли шпильки Россмана. То же самое относится и к пирофосфату FAD. В триозофосфатизомеразе [305] фосфат также расположен у петель, связывающих -листы и последующие а-спирали, но в С-концевой части полипептидной цепи (рис. 5.17, д). Во всех этих случаях используется петля между карбонильным концом -листа и следующей а-спиралью. Это можно объяснить выгодным электростатическим взаимодействием между отрицательным зарядом фосфорильной группы и диполем а-спирали [792], который возникает при наложении диполей водородных связей. [c.264]

В пределах 100—200 п. н. перед стартом транскрипции многих генов находятся по крайней мере еще два коротких нуклеотидных мотива , усредненные варианты которых можно представить как GGG GG ( G -мотив ) и ССААТ. Предполагается, что СС-мотив , который может встречаться несколько раз по длине промоторной зоны, включающей 200—300 п. н., характерен для промоторных районов генов, работающих конститутивно и обеспечивающих общеклеточные функции. Действительно, такие повторы обнаруживаются перед генами, кодирующими белки, необходимые для жизнедеятельности самых разных клеток организма. Перед геном дигидрофолат-редуктазы мыши вкраплены четыре таких мотива, перед генами глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и фосфоглицераткиназы человека соответственно девять и два. Нельзя исключить, что G -мотивы принимают непосредственное участие и в индукции генной активности, поскольку они обнаружены и в промоторах ряда индуцируемых генов. [c.198]

Седьмая реакция катализируется фосфоглицераткиназой, ири этом происходит передача богатого энергией фосфатного остатка (фосфатной груииы в положении 1) на АДФ с образованием АТФ и 3-фосфогли-цериновой кислоты (3-фосфоглицерат) [c.331]

Таким образом, благодаря действию двух ферментов (глицеральде-гидфосфатдегидрогеназы и фосфоглицераткиназы) энергия, высвобождающаяся ири окислении альдегидной груииы глицеральдегид-З-фосфата до карбоксильной груииы, запасается в форме энергии АТФ. В отличие от окислительного фосфорилирования образование АТФ из высокоэнергетических соединений называется субстратным фосфорилированием. [c.331]

Молекулярная биология. Структура и биосинтез нуклеиновых кислот (1990) -- [ c.198 ]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.101 ]

Молекулярная биология (1990) -- [ c.198 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.331 ]

Биологическая химия (2002) -- [ c.84 , c.140 ]

Биохимия (2004) -- [ c.246 ]

Теоретические основы биотехнологии (2003) -- [ c.167 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.163 ]

Биохимия растений (1966) -- [ c.125 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.420 , c.450 , c.452 ]

Общая микробиология (1987) -- [ c.223 , c.225 , c.226 , c.264 , c.361 ]

Метаболические пути (1973) -- [ c.41 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.280 , c.289 , c.328 ]

Стратегия биохимической адаптации (1977) -- [ c.48 , c.53 , c.54 , c.85 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.137 , c.138 ]

Неорганическая биохимия Т 1 _2 (1978) -- [ c.672 , c.682 ]

Химия биологически активных природных соединений (1976) -- [ c.68 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.2 , c.2 , c.3 , c.7 , c.43 , c.85 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.183 , c.184 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.183 , c.184 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.287 ]

Биофизическая химия Т.1 (1984) -- [ c.120 ]

Молекулярная биология клетки Сборник задач (1994) -- [ c.110 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.347 ]

Структура и механизм действия ферментов (1980) -- [ c.24 , c.35 , c.308 ]

Биологическая химия (2004) -- [ c.33 , c.255 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.31 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология