Изозимы

Изучение свойств изозимов лактатдегидрогеназы [c.339]

Известно много ферментов, которые существуют не менее чем в двух молекулярных формах, встречающихся у одного и того же вида, в одной и той же ткани, и даже в одной и той же клетке. В таких случаях все эти формы фермента катализируют одну и ту же реакцию, но, так как они различаются по своим кинетическим свойствам, а также по аминокислотному составу или последовательности аминокислотных остатков, их можно выделить и охарактеризовать с помощью соответствующих методов. Такие множественные формы ферментов называются изоферментами или изозимами. Одним из первых ферментов, у которого бьши обнаружены такие формы, была лактатдегидрогеназа, катализирующая обратимую окислительно-восстановительную реакцию [c.265]

Для разделения двух изозимов следует провести дополнительное фракционирование белка с использованием хроматографии на КМ-целлюлозе и повторно — на ДЭАЭ-целлюлозе. [c.218]

Фермент является тетрамером и в тканях млекопитающих представлен тремя изоформами, среди которых наиболее распространены L-пируваткиназа, или печеночный изозим, и М пируваткиназа, иначе мышечный изозим. Общепризнанным является представление о L-пи-руваткиназе печени как об одном из ключевых ферментов гликолиза. Проблема регуляторной роли jWi-пируваткиназы в контролировании гликолиза в скелетной мышце остается нерешенной. Отчасти это связано с тем, что к пируваткиназе мышечной ткани применимы не все критерии, согласно которым, по современным представлениям, фермент может выдвигаться на роль ключевого. В частности, является спорным вопрос об аллостерической природе фермента, а также о проявлении им кооперативных свойств при взаимодействии с субстратами. Возможная причина противоречий связана, по-видимому, с выраженной конформационной подвижностью [-изозима пируваткиназы, вследствие чего фермент утрачивает кооперативные свойства при изменении pH или ионного состава среды. [c.333]

Реакционную смесь готовят непосредственно перед определением активности Инкубацию гелей проводят в темноте при температуре 37° С или при комнатной температуре в течение различных промежутков времени (10—60 мин). Оптимальным считается временной интервал, в течение которого происходит максимально полное выявление всех изозимов фермента. При этом не должна иметь место диффузия восстановленного тетразолия из специфических зон в свободные от лактатдегидрогеназы области геля. После проявления гелей на специфическую активность их фиксируют в 7%-ной уксусной кислоте [c.339]

ИССЛЕДОВАНИЕ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ ИЗОЗИМОВ [c.351]

Как видно из этих примеров, взаимовлияние двух путей обмена может исключаться в результате образования изозимов, активность одного из которых обычно строго регулируется, тогда как другой не подвергается регуляции того же типа. [c.491]

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе рН-градиентная элюция. На колонку размером 1,2X27 см, заполненную ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером (реактив Л Ь 2), наносят раствор белка. Элюцию проводят в градиенте pH, используя 150 мл буфера (реактив № 2) в смешивающем сосуде, и 150 мл буфера (реактив № 4) во втором сосуде. На колонку можно нанести примерно 10 мг белка. Скорость элюции — 20 мл/ч. Собирают фракции по 4 мл. В процессе хроматографии pH изменяется от 7,0 до 5,0. Первым (после выхода из колонки примерно 100 мл раствора) выходит изозим I и вслед за ним — белок, соответствующий изозиму П. [c.219]

Реакция протекает с выделением энергии (ЛС = —7,5 ккал/моль). В тканях млекопитающих известны три изозима пируваткиназы, каждый состоит из четырех идентичных субъединиц. Изозимы имеют молекулярную массу от 200 000 до 250 000 Да молекулярная масса субъединицы — от 50000 до 61 000 Да. Фермент характеризуется высокой специфичностью по отнощению к фосфоенолпирувату, менее специфичен к нуклеотидному субстрату. Пируваткиназа относится к группе аллостерических ферментов. Изозимы пируваткиназы отличаются своими регуляторными свойствами. Ферментативная реакция, катализируемая высокоочищенной пируваткиназой из скелетных [c.269]

Цель работы — изучение структурных и функциональных свойств изозимов лактатдегидрогеназы в сердечной и скелетной мышцах крысы, являющихся критериями при установлении изозимного состава фермента в ткани. [c.337]

При изучении изозима М4 лактатдегидрогеназы (ЛДГ) из мышц свиньи связывание НАД, пирувата и других соединений в активном центре фермента можно наблюдать с помощью флуоресцентного катионного зонда аурамина О, структура которого приведена на рисунке [c.340]

Фермент широко распространен в тканях млекопитающих и представлен двумя изозимами, пространственно разобщенными в клетке. Один изозим локализован в цитозоле, другой связан с митохондриальной фракцией. Изозимы существенно различаются по аминокислотному составу, физико-химическим свойствам, зависимости активности от pH среды и, что особенно важно с физиологической точки зрения, по кинетическим свойствам. Различное сродство к субстратам реакции ставит изозимы фермента в разные условия в отношении доступности субстратов прямой и обратной реакций. Этим определяется бифункциональность поведения аспартатаминотрансферазы в печени реакция, катализируемая митохондриальным изозимом, может быть сдвинута от состояния равновесия в сторону образования а-кетоглутарата, и поэтому может быть связана с функционированием цикла Кребса и цикла мочевины. Наоборот, цитоплазматический изозим способствует образованию щавелевоуксусной кислоты, т. е. связан с функционированием глюконеогенеза. [c.351]

Для изозимов аспартатаминотрансферазы исследуют зависимость скорости реакции от концентрации -аспартата 1 — 10 мМ — для цитоплазматического и 0,1 — 1 мМ — для митохондриального изозима, а также от концентрации а-кетоглутарата 0,2—2 мМ — для цитоплазматического и 0,3—3 мМ — для митохондриального изозима. В каждом случае субстрат, содержание которого не меняется, берется в насыщающей концентрации. [c.354]

В задаче исследуется взаимодействие изозима I гексокиназы скелетных мышц крысы с искусственной фосфолипидной мембраной (леци-тиновые липосомы), имитирующее поведение фермента при иммобилизации на биологической мембране. [c.374]

Получение препарата II изозима гексокиназы. К растворимой клеточной фракции добавляют при помешивании суспензию ДЭАЭ-целлюлозы из расчета 1 мл фракции — 5—10 мг сухой ДЭАЭ-целлюлозы. После 10-минутной инкубации суспензию фильтруют с помощью водоструйного насоса на воронке Бюхнера. Осадок ДЭАЭ-целлюлозы с адсорбированной гексокиназой промывают К-фосфатным буфером, содержащим 40 мМ K I (объем равен половине исходного объема растворимой клеточной фракции). Затем гексокиназу элюируют 200 мМ КС1, приготовленным на К-фосфатном буфере. В целях концентрирования препарата гексокиназы объем элюирующего раствора уменьшен в 3 ра за по отношению к исходному объему растворимой клеточной фракции После 10-минутной инкубации элюат отделяют на воронке Бюхнера [c.375]

Получают препарат II изозима гексокиназы из растворимой клеточной фракции скелетных мышц крысы. После определения белка микробиуретовым методом оценивают удельную активность фермента, а также степень очистки. При этом учитывают, что на долю II изозима гексокиназы приходится 60% от общего содержания фермента в растворимой клеточной фракции скелетных мышц. [c.376]

Поскольку кроме II изозима гексокиназа скелетных мышц содержит в больших количествах I изозим фермента (до 40%), проводят идентификацию изозимного состава полученного препарата гексокиназы. В качестве критерия при этом используют значение Кт по глюкозе, соответственно равное для I и II изозимов 5-10-5 jj (13—2,4) Х ХЮ М. С этой целью исследуют зависимость скорости реакции от концентрации глюкозы в диапазоне 3-10 — 5-10 М, используя насыщающую (8-10 М) и полунасыщающую (У-Ю М) концентрацию АТФ. В работе используют препараты гексокиназы с высоким содержанием II изозима фермента, для которых характерно значение Кт по глюкозе не ниже 1,8-10 М. [c.377]

Это определение не касается ни генетического происхождения вариации, ни биохимической структуры этих множественных форм. Вот почему увеличилось число прилагательных с целью точнее охарактеризовать эти формы аллельные изоэнзимы, конформационные изозимы, изодинамические энзимы, или таких выражений, как молекулярные типы, молекулярные формы, молекулярные виды и т. п., смысл которых часто не уточнялся, а когда он раскрывался, то нередко варьировал у разных авторов. [c.38]

Многие ферменты могут находиться в разных формах. Эти изоферменты не являются изомерами, они имеют сходное, но химически различное строение белковых молекул. Эти множественные формы ферментов имеют генетически определенные различия в первичной структуре и различную электрофоретическую подвижность. Изозимы с различающимися кинетическими свойствами необходимы для выполнения функций, меняющихся со временем или в зависимости от условий. [c.463]

На рис. 15.9 показано, что фермент, катализирующий превращение А в В, имеет две изоформы. Активность различных изоформ -изозимов - может регулироваться по-разному. Например, одна форма регулируется по типу отрицательной обратной связи (верхняя стрелка), а другая - путем фосфорилирования (нижняя стрелка). [c.463]

В работе Олсона и др. [1] при разделении ферментов и антигенов аффинной хроматографией. применялись методы высокоэффективной жидкостной хроматографии, которую отличают использование небольших колонок, высоких скоростей разделения, связанных с этим высоких давлений в системе и, что наиболее существенно, относительно небольших количеств анализируемых веществ. Носителем для иммобилизации аффинных лигандов служил силикагель, поскольку получаемые аффинные сорбенты на этом носителе могут работать в условиях высокого давления. Наиболее ярким примером эффективности такого метода служит разделение в течение 5 мин Н4 и М4 изозимов лактатдегидрогеназы на колонке с №-(6-аминогексил)-АМР—силикагелем в градиенте NADH. [c.452]

Название белок до сих пор используют для обозначения группы родственных соединений, но определить индивидуальный белок очень трудно. Широко распространено представление, что для каждого гена имеется отдельный фермент, и можно полагать, что индивидуальный белок или фермент является продуктом отдельного гена. Следовательно, каждый фермент, например малатдегидрогеназу, можно рассматривать как индивидуальный белок. В последние годы, однако, накопились данные о существовании в одном и том же организме различных молекулярных разновидностей малатдегидро-геназы. Такие части целого функционального комплекса, или фермента, предложено называть изозимами (изоэнзимами). Теоретически представляется возможным изолировать и охарактеризовать эти индивидуальные белки, но осуществить это практически часто очень трудно. [c.13]

Изозимы (изоферменты). Множественные формы фермента, отличающиеся друг от друга по сродству к субстрату, по максимальной активности или по регуляторным свойствам. [c.1011]

Алкогольдегидрогеназа печени быка 84 ООО 42 ООО 2 С, D/M. S, X Имеется два типа полипептидных цепей цепь Е после димеризации активна по отношению к этанолу и аналогам, неактивна со стероидами цепь 8 полностью активна со стероидами и мало активна с этанолом. Образуются изозимы 4, 38, 39 [c.392]

Обычно каждый вид животных содержит два основных типа субъединиц Н — сердечный и М — мышечный тип. Разные комбинации Н и М дают до 5 изозимов. Можно выполнить гибридизацию между ферментами из разных источников. Есть экспериментальные доказательства, что Н- и М-субъ-единицы состоят из двух или более полипептидных цепей [c.393]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.0 ]

Химия Краткий словарь (2002) -- [ c.117 ]

Биохимия и физиология иммунитета растений (1968) -- [ c.235 , c.257 , c.258 ]

Генетика с основами селекции (1989) -- [ c.461 ]

Гены и геномы Т 2 (1998) -- [ c.170 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.100 , c.101 , c.124 , c.140 , c.341 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.0 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология