Аспартатаминотрансфераза

Аспартатаминотрансфераза (1-аспартат 2-оксоглутарат-амино-трансфераза, КФ 2.6.1.1) катализирует обратимую в физиологических условиях реакцию трансаминирования между -аспарагиновой и а-ке-тоглутаровой кислотами с образованием щавелевоуксусной и -глутаминовой кислот [c.351]

Аспартатаминотрансфераза катализирует обратимую реакцию переноса аминогруппы между аспарагиновой и кетоглутаровой кислотами с образованием щавелевоуксусной и глутаминовой кислот [c.212]

Использование релаксационного подхода к изучению механизмов ферментативных реакций привело к выяснению детального постадийно-го механизма катализа ряда ферментов. В качестве примера рассмотрим проведенное Г. Хаммесом исследование механизма катализа аспартатаминотрансферазой. [c.212]

Таким образом, бимолекулярные стадии ферментативных реакций, для которых величины констант скоростей лежат в диапазоне 10 — 10 М -с , должны быть отнесены к реакциям, контролируемым диффузией реагентов в растворе. Как видно из табл. 34, в большинстве случаев константы скорости образования фермент-субстратных комплексов (к ) ниже этого предела. Это связано, как правило, со стерическими затруднениями, которые накладывает структура активного центра на скорость процесса комплексообразования (см. 7 гл. I). На это указывает, в частности, высокая чувствительность этой константы скорости к структуре органического лиганда. Например, введение в аспарагиновую кислоту а-метильной группы почтив 10 раз уменьшает константу скорости комплексообразования этого субстрата с активным центром аспартатаминотрансферазы (см. табл. 34). [c.271]

Исключительно важные исследования в этой области, связывающие химию белка с химией нуклеиновых кислот, осуществлены в СССР Ю. А. Овчинниковым с сотр. В частности, из Е. СоИ выделены полинуклеотидфосфорилаза, ДНК-полимераза-1, полинуклео-тидлигаза. Определена полная последовательность аминокислот цитоплазматической аспартатаминотрансферазы, состоящей из 824 аминокислотных остатков. [c.180]

Перед облучением и до 45-х суток после него мы исследовали у выживающих собак картину периферической крови и ряд биохимических показателей сыворотки. Ра диозащита не предотвратила развития пострадиационной панцитопении [Кипа, в печати]. Simsa и соавт. (1983) проанализировали часть биохимических показателей, исследованных у описанных выше облученных собак. У летально облученных животных мы не наблюдали повышения активности аспартатаминотрансферазы (ААТ), хотя в более ранней литературе имеются ссылки на ее рост [c.147]

Фермент широко распространен в тканях млекопитающих и представлен двумя изозимами, пространственно разобщенными в клетке. Один изозим локализован в цитозоле, другой связан с митохондриальной фракцией. Изозимы существенно различаются по аминокислотному составу, физико-химическим свойствам, зависимости активности от pH среды и, что особенно важно с физиологической точки зрения, по кинетическим свойствам. Различное сродство к субстратам реакции ставит изозимы фермента в разные условия в отношении доступности субстратов прямой и обратной реакций. Этим определяется бифункциональность поведения аспартатаминотрансферазы в печени реакция, катализируемая митохондриальным изозимом, может быть сдвинута от состояния равновесия в сторону образования а-кетоглутарата, и поэтому может быть связана с функционированием цикла Кребса и цикла мочевины. Наоборот, цитоплазматический изозим способствует образованию щавелевоуксусной кислоты, т. е. связан с функционированием глюконеогенеза. [c.351]

Целью работы является изучение рН-зависимости активности и кинетических свойств аспартатаминотрансферазы, локализованной в цитоплазме и митохондриях печени крысы. Кроме того, в работе исследуется внутримитохондриальная локализация фермента. [c.351]

Навеску (5 г) тканевой кашицы (приготовление см. на с. 65) взвешивают и переносят в стеклянный стакан гомогенизатора Поттера. Добавляют среду выделения из расчета 9 мл среды на 1 г ткани и гомогенизируют в течение 30 с с помощью тефлонового пестика без нарезки. Полученный гомогенат центрифугируют при 20 ООО в течение 15 мин. Супернатант после центрифугирования представляет собой 10%-ную растворимую клеточную фракцию. Препарат фильтруют через 4 слоя марли и хранят порциями при —5°С в течение 2 нед. Размораживание растворимой клеточной фракции проводят при комнатной температуре. Перед определением активности аспартатаминотрансферазы препарат фермента разводят средой выделения до конечного разведения 1 100. [c.352]

Определение активности аспартатаминотрансферазы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшейся щавелевоуксусной кислоты в процессе прямой аминотранс-феразной реакции. Метод основан на использовании сопряженной малатдегидрогеназной реакции согласно схеме [c.352]

За ходом реакции следят на спектрофотометре по уменьшению оптической плотности при 340 нм в результате окисления НАДН. Состав реакционной среды объемом 3 мл 100 мМ К-фосфатный буфер, pH 7,5 -аспартат 30 мМ а-кетоглутарат 5 мМ НАДН 0,1 мМ малатдегидрогеназа 1 инт. ед. препарат аспартатаминотрансферазы 25— 100 мкл. Контрольная проба не содержит L-аспартат. [c.352]

Определяют активность аспартатаминотрансферазы в растворимой клеточной фракции печени в день выделения и после хранения. [c.353]

Определяют активность аспартатаминотрансферазы во фракции нативных митохондрий (в 0,25 М сахарозе) в день выделения. [c.353]

Определяют активность аспартатаминотрансферазы во фракции митохондрий после разрушения мембран действием детергента дигитонина. С этой целью к суспензии нативных митохондрий, содержащей 4 мг белка в 1 мл добавляют 2%-ный раствор дигитонина из расчета 1 мг детергента к 1 мг белка. Суспензию инкубируют при 0°С в течение 10 мин. Действие детергента прекращают 5-кратным разведением 0,25 М сахарозой. [c.353]

Рис. 12.3. Механизм действия пиридоксальфосфата в аспартатаминотрансферазе. 436

Эффективность действия детергента в отношении максимально полного выявления активности аспартатаминотрансферазы митохондрий сопоставляют с деструктивным действием на мембраны процедуры замораживания-оттаивания. С этой целью суспензию нативных митохондрий замораживают при температуре —20°С с последующим размораживанием при комнатной температуре. [c.353]

Исследуют возможную локализацию аспартатаминотрансферазы в митохондриях печени [c.353]

Наряду с активностью аспартатаминотрансферазы в каждом случае определяют активность малатдегидрогеназы — маркерного фермента матрикса митохондрий. [c.353]

При дозах детергента 0,3 и 0,5 мг на 1 мг белка митохондрий действие дигитонина исследуют также в присутствии 1 М КС1. В случае адсорбции фермента на внутренней мембране митохондрий под действием КС1 возможна эффективная солюбилизация аспартатаминотрансферазы. Это можно установить, определив активность фермента в супернатанте после центрифугирования обработанной суспензии при 20 000g в течение 20 мин. [c.353]

Для изозимов аспартатаминотрансферазы исследуют зависимость скорости реакции от концентрации -аспартата 1 — 10 мМ — для цитоплазматического и 0,1 — 1 мМ — для митохондриального изозима, а также от концентрации а-кетоглутарата 0,2—2 мМ — для цитоплазматического и 0,3—3 мМ — для митохондриального изозима. В каждом случае субстрат, содержание которого не меняется, берется в насыщающей концентрации. [c.354]

Трансаминазы играют в метаболизме аминокислот чрезвычайно важную роль в настоящее время известно более 50 различных ферментов этого класса [33]. Наиболее изученный из них — это цитоплазматическая аспартатаминотрансфераза из сердечной мышцы свиньи — димерный фермент, состоящий из субъединиц с мол. весом 46 344 (рис. 2-1). [c.217]

Изучение безопасности готовой лекарственной формы абергина - таблеток по 0,004 г, при 30-недельном введении собакам ( самцы и самки) в желудок в дозе 3 мг/кг (8-кратная суточная терапевтическая доза), не выявило каких-либо нарушений, свидетельствующих о токсическом действии абергина препарат не влиял на общее состояние, поведение и динамику массы тела, гематологические и биохимические показатели животных, за исключением более низкого уровня триглицеридов у собак-самцов и активности аспартатаминотрансферазы на протяжении всего эксперимента у собак обоего пола. [c.224]

ЛИ в определении стереохимии протонирования. По имеющимся данным, в состав активного центра аспартатаминотрансферазы входит остаток гистидина. [c.206]

Для понима1 ИЯ оптической активности нуклеиновых кислог необходимо рассмотреть явление индуцированной оптической активности (ИОА). Симметричные, т. е. лишенные хиральности, молекулы красителей, будучи присоединены к а-спиральным полипептидам, обнаруживают АДОВ и КД в областях собственного поглощения. Этот эффект исчезает при денатурации комплекса а-спирали с красителем. Эффект объясняется взаимодействием молекулы красителя с пептидным остатком вблизи асимметричного центра. О том же свидетельствует ИОА просте-тических групп и коферментов. АДОВ и КД в области поглощения пиридоксальфосфата — кофермента аспартатаминотрансферазы-i( . 184) послужили источником информации о структуре активного центра этого фермента. На рис. 5.19 показаны кривые АДОВ дезоксигемоглобина, оксигемоглобина и карбоксигемоглобина в областях поглощения простетической группы гема, которая сама по себе симметрична (см. с. 50). Под влиянием хиральности биополимера возникает оптическая асимметрия электронной оболочки хромофора. В строгой теории ИОА необходимо рассмотрение колебаний атомных ядер, решение электронно-колебательной задачи. [c.157]

Лихтенштейн и сотрудники применяли метки различной длины и гибкости к исследованию структуры и конформационной подвижности ряда белков — лизоцима, миоглобина, миозина, альбуминов и т. д. [255—258]. В работе [259] были установлены изменения в спектрах ЭПР аспартатаминотрансферазы, меченной иминоксильными радикалами, при образовании комплексов фермента с субстратом и родственными соединениями. Эти изменения указывают на возрастание подвижности радикала в комплексе — время корреляции в исходном белке составляет (8,0 0,4) 10" се/с, в комплексе белка с лигандом — (5,1 0,4)-10- > сек. [c.345]

Остановимся еще на одном примере — на структуре и функции аспартатаминотрансферазы (ААТ), детально изученной БраунщтейнЬм и его сотрудниками. Аминотрансферазы содержат кофермент — пиридоксальфосфат (ПАЛФ). Общая теория действия таких ферментов была построена Браунщтейном и [c.378]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.217 , c.229 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.351 , c.439 , c.579 , c.644 , c.660 ]

Аффинная хроматография (1980) -- [ c.330 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.2 , c.6 , c.72 ]

Аффинная хроматография Методы (1988) -- [ c.141 ]

Биосенсоры основы и приложения (1991) -- [ c.0 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.127 , c.128 , c.140 , c.355 , c.356 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология