Приготовление срезов

Наиболее часто необходимость в автоматизации ощущается в области биомедицины [20—22]. Современную клиническую лабораторию можно оборудовать автоматическими приборами для анализа ферментов [23—26], для приготовления срезов для микроскопии и даже для проведения сложных анализов крови [27]. Имеется много примеров применения автоматических методов в области фармацевтики [28—29]. Несмотря на то что ни один из упомянутых выше элегантных приборов не применяли для анализа функциональных групп, многие реализованные в них идеи можно использовать для этой цели. [c.377]

Срезы. Для приготовления срезов сухие плоды и семена предварительно размягчают, поместив их на сутки во влажную камеру (влажной камерой служит эксикатор с водой, в которую добавлено несколько капель хлороформа) или водяным паром в течение 15—30 мин или более в зависимости от твердости объекта. [c.279]

При необходимости приготовления среза лист предварительно размягчают во влажной камере и с помощью бритвы делают толстый срез (2—3 мм), который закрепляют на предметном стекле пластилином. Более тонкие срезы помещают во включающую жидкость и накрывают покровным стеклом. [c.283]

Рис. 26. Изображение рис. 13, перенесенное на прозрачную кальку. Заштрихованные зоны соответствуют темной спирали, возникающей из-за сжатия и утолщения в процессе приготовления среза на микротоме. На рисунке показаны направления фибрилл, образующих двойную спираль из арок,

Некоторые участки мозга, например гранулярный слой ретины или слой пирамидных клеток в гиппокампе, имеют сравнительно однородный клеточный состав. Образцы из этих участков мозга можно получать по методике, описанной в предыдущем параграфе. Для приготовления срезов, состоящих из 100— [c.280]

Микроскопическое исследование срезов полезно для идентификации полимеров, особенно если они имеют форму волокон или находятся в многофазных системах. Хотя литература и изобилует описаниями методов приготовления срезов и их модификаций, не все они пригодны для получения хороших срезов полимерных материалов. Парафин, общепринятый материал для матриц, обычно не прилипает к срезам или разрушается в процессе приготовления срезов многих полимеров. [c.250]

В сущности методы с корковой пробкой являются упрощенными вариантами метода приготовления срезов при помощи пластинки и дают по существу те же самые результаты. Сообщения о более высоком качестве срезов, получаемых при помощи пластинки, следует принимать с осторожностью. Срезы, получаемые с пластинкой, не рекомендуется применять в ответственных исследованиях, так как они редко получаются тоньше 200 мк, а иногда могут быть в несколько раз толще. Контур среза все же будет хорошо различаться, если обеспечить достаточно однородное поле зрения подходящей [c.252]

При получении срезов полимерных образцов, устойчивых к используемым растворителям, целлоидин дает лучшие результаты, хотя его применение и требует много времени. При получении срезов тканей и волокон использовали матрицу из полиметилметакрилата, содержаш,его около 20% пластификатора. В некоторых случаях это приводит к более высоким результатам, но пластифицированный акрилат чрезвычайно тверд и получаемые срезы очень хрупки, что затрудняет их выпрямление. Спустя некоторое время было найдено, что можно использовать поли-н-бутилметакрилат при приготовлении срезов кожи [179], а при небольших добавках полиметилметакрилата (до 20%) получается матрица сополимера, пригодная для получения срезов многих синтетических полимерных веществ. [c.256]

Описай способ приготовления срезов при быстром охлаждении (сухим льдо.м) во избежание дезактивации антигенов. [c.48]

Метод позволяет измерять площадь поперечного сечения и линейные поперечные размеры нити и пряжи без приготовления срезов и нарушения их формы и строения. Измерение производится на приборе, схема которого приведена на рис. 32. [c.35]

Усовершенствован микроскоп, а также методы фиксации, окрашивания препаратов и приготовления срезов. Цитология начала приобретать экспериментальный характер. Одной из отраслей цитологии становится цитогенетика , занимающаяся изучением роли ядра в передаче наследственных признаков [c.169]

Приготовление срезов Стальной нож [c.215]

Изучение структуры и функции тканей основывается главным образом на световой микроскопии с использованием различных приемов фиксации материала, его окрашивания и приготовления срезов (см. соответствующие методики в разд. 5.И и 5.12). [c.218]

Приготовление срезов обычно излишне, но при необходимости срез готовят из листьев и стеблей, прокипяченных в растворе хлоралгидрата, зажав их в пробку (кипяченые в щелочи объекты не режутся). [c.860]

Срезы. Слишком сухие плоды и семена предварительно увлажняют, поместив их на сутки во влажную камеру (влажной камерой служит эксикатор, куда налита вода и несколько капель хлороформа), или размягчают в водяных парах. В последнем случае в конической колбе кипятят небольшое количество воды, семена или плоды помещают в марлю и подвешивают на стеклянной палочке так, чтобы они находились в парах, но не погружались в воду. Размягчение продолжают /4— /2 часа или более, смотря по твердости объекта. После этого приступают к приготовлению срезов. [c.860]

Рис. 4-5. Приготовление среза на микротоме после заливки ткани. Срез предназначен для исследования с помощью светового микроскопа девают при охлаждении или за счет полимеризации, образуя твердый блок, который удобно резать на микротоме.

Существует серьезная опасность того, что процедуры фиксации или заключения могут повредить структуру клеток или клеточных макромолекул. Вот почему предложен другой метод приготовления срезов, уменьшающий эту опасность, - быстрое замораживание. Здесь можно обойтись без фиксации и заливки. Замороженную ткань просто режут на криостате - специальном микротоме, установленном в холодной камере. Полученные таким образом срезы позволяют избежать некоторых артефактов, и в то же время обладают определенными недостатками отдельные структуры индивидуальных макромолекул, таких, например, как белки, при замораживании сохраняются хорошо, но структура самой клетки может оказаться поврежденной. Следующий этап после приготовления срезов (любым из методов) - их окраска. [c.176]

В содержимом большинства клеток, состоящих, как правило, на 70% из воды, практически отсутствуют компоненты, способные помешать прохождению световых лучей. Поэтому в естественном состоянии большинство клеток даже после фиксации и приготовления срезов практически невидимы в обычном световом микроскопе. Одна из возможностей их увидеть состоит в окраске клеток красителями. [c.176]

Принцип использования флуоресцирующих антител был приспособлен и для электронной микроскопии антитела или гаптены соединяются с электроноплотными веществами (например, с железосодержащим белком ферритином) или такими, которые могут быть сделаны электроноплотными уже после реакции антиген — антитело (например, с антителом связывается пероксидаза из хрена, которой после связывания дают возможность реагировать с диаминобензидином). На практике используется множество комбинаций, включающих антисыворотки с различными специфичностями, фрагменты антител, гаптены, а также такие маркеры для визуализации, как небольшие вирусы и т. п. Эти методы, применимые к целым бактериям, позволяют локализовать поверхностные антигены точнее, чем это делают с помощью оптического микроскопа. Преимущества электронной микроскопии становятся еще более очевидными, когда меченые антитела применяют еще до фиксации, заливки и приготовления срезов, так что метка видна в тонких срезах. В некоторых случаях аналогичным образом метят не антитела, а другие вещества с известной специфичностью чаще всего применяются лектины растений, такие, как конканавалин А, которые специфично связываются с сахарными остатками [88]. [c.125]

Материалы для фиксации, заливки, приготовления срезов и окраски срезов [c.128]

Препараты в виде срезов (фиксация, обезвоживание, заливка, приготовление срезов, окрашивание) [c.134]

Изучение ультратон к их срезов. Метод реплик, передавая строение только видимой, геометрической поверхности частицы, не дает представления о ее внутренней структуре, которая может заметно отличаться от строения видимой поверхности вследствие прошедших реакций гидратации и гидролиза. Метод получения ультратонких срезов с поверхности твердого тела (толщиной около 0,1 мкм) позволяет восполнить этот пробел и изучить и внутреннюю, и внешнюю истинную физическую структуру частиц. Для приготовления срезов применяют специальные приборы — микротомы и ультрамикротомы, в которых режущим инструментом является равномерно и точно движущийся нож из алмаза или зеркального стекла. [c.142]

По мере приготовления срезы помещают для хранения в металлические ба1вки с плотными крышка ми. [c.43]

Если слои панциря краба нарушены образованием бугорка (рис. 22), то сечение 5, перпендикулярное оси бугорка, дает картину спиральной структуры, которую мы видели на рис. 13. Чтобы представить в этом случае винтовую структуру, рассмотрим серию поверхностей в виде куполов, врашаюшпхся вокруг вертикальной оси. В микротомальном срезе 5 толщиной е наши поверхности образуют концентрические наклонные пояса (рис. 23). Центральная поверхность оказывается касательной к верхней плоскости сечения и вместо пояса имеет форму опрокинутой чаши. Проведем теперь на этих поясах эквидистантные линии (рис. 23), показывающие направление фибрилл в каждом поясе. Направление нормальных проекций фибрилл на горизонтальную плоскость оказывается постоянным для каждого пояса. При переходе от каждого пояса к соседнему направление фибрилл поворачивается на один и тот же угол. Если посмотреть сверху, то проекции фибрилл дают картину, представленную на рис. 24. (Число концентрических поясов здесь нарисовано больше, чем на рис. 23, чтобы иметь более наглядную картину всей структуры.) На рис. 25 проведены жирные сплошные линии, направление которых в каждом поясе совпадает с направлением фибрилл, и мы видим, что получилась двойная спираль. Такая же двойная спираль получается в действительности и в сечении бугорка панциря краба (рис. 13). Здесь, однако, двойная спираль маскируется единичной спиралью, искусственно получающейся вследствие трудности приготовления срезов. [c.297]

По п. 1. Приготовление среза. Толщина срезов должна быть 50—100—200 р., потому что спектр слишком тонких срезов слишком слаб и существенно важные линии не получаются. Это вполне согласуется и с нашим опытом. Мы пользуемся еще более толстыми срезами, а именно слоями ткани в 2—3 мм толщиной, так как мы убедились в том, что при действии искры на тонкие срезы получаются только те вещества, которые содержатся в ткани в больших количествах. Так, например, в микроскопических срезах в 20 [J. толщиной при общем аргирозе нам удалось совершенно ясно распознать в спектрограмме линии серебра. Если же брали срез в 10 [I толщиной, то в микроскопической картине ясно можно было еще распознать тонкую черную пигментировку гломерул, но в спектрограмме установить наличие серебра можно было только с некоторой вероятностью. И то же самое приходилось, например, наблюдать у очень богатой медью печени в случае вильсоновской болезни. И здесь удавалось с полной [c.79]

Для приготовления срезов применяют стеклянные ножи, которые изготовляют из листового стекла. При выборе стекла придерживаются следующих правил толщина стекла должна быть в пределах 5—6 мм, стекло не должно содержать боль щого числа внутренних дефектов (различных включений и пузырьков воздуха) и не должно иметь больших поверхностных напряжений. Этим требованиям обычно удовлетворяет зеркальное стекло. [c.67]

Метод замораживания образца для приготовления срезов вулканизатов на микротоме ротационного типа был описан Чепиусом и Робблсом в 1957 г. Они поддерживали образец в замороженном состоянии при микротомировании при помощи смеси сухого льда и спирта. Замораживание образца жидким азотом с использованием ротационного микротома типа Портера — Блюма, также позволяет изготовлять срезы высокого качества, достаточно тонкие для исследования в электронном микроскопе. Держатель образца в микротоме типа Портера — Блюма (рис. 6.9) такой же, как и в микротоме салазочного типа, по имеет более совершенную тефлоновую [c.178]

Последующая работа, проведенная в Национальном бюро стандартов, показала, что полиакрилаты лучше заменять другими полимерами. Примерно равные части гибких и жестких полиэфиров, таких, как вибрин 121 и 117 или иараплекс Р-43 и Р-13, и некоторые смолы типа ламинак, пласкон и селектрон дают матрицы, которые хорошо срезаются и обладают превосходной адгезией к образцам. Из эпоксидных смол, модифицированных синтетическими эластомерами, например тиоколом LP или полиамидами, также можно получить хорошие пропитки, используемые при приготовлении срезов полимерных материалов. Для улучшения свойств полиэфиры можно сополимеризовать с полиакрилатами, однако они несовместимы с эпоксидными смолами. С их помощью легко получить срезы толщиной до 1 мк, обладающие отличными механическими свойствами. К сожалению, их поверхность покрывается тонкой оранжевой пленкой или сморщивается. Это не имеет большого значения при исследовании в оптическом микроскопе, когда препарат можно залить той же самой смолой, но делает их непригодными для электронной микроскопии. [c.256]

Для получения срезов различных материалов были разработаны специальные методики. Например, древесину перед приготовлением среза можно распарить или размягчить обработкой либо плавиковой кислотой под давлением или при обычном давлении, либо ледяной уксусной кислотой и перекисью водорода. Можно также подготовить его к исследованию размачиванием. Рендл и Франклин [199] установили, что вымачивание обычной фанеры в холодной воде в течение 24 час или в кипящей воде в течение 0,5 час, как правило, размягчает ее в достаточной степени для приготовления среза. Если образцы слишком толсты или изготовлены из необычно твердой древесины, то можно увеличить продолжительность обработки горячей водой и провести дополнительную обработку смесью равных частей глицерина и спирта. Срезы толщиной 10—20 мк получают на специальном микротоме, приспособленном для срезания древесины. Часто вполне удовлетворительными оказываются и срезы, полученные вручную. В составленном [c.257]

Образцы бумаги часто неожиданно оказываются неподатливым материалом при приготовлении срезов. Для получения наилучших результатов требуются хорошая адгезия к матрице и хорошее пропитывание. Этим требованиям удовлетворяют жидкие смолы, например акрилаты, полиэфиры и эпоксидные смолы. Келш [126[ описал технику получения срезов бумаги [c.258]

Чтобы сделать выбор между этими возможностями, нужно исследовать поперечное сечение волокон, срезанных микротомом 12]. Если азимутальная ориентация молекул в волокне случайна, поперечное сечение, рассматриваемое между скрещенными поляризаторами, будет казаться темным и оставаться погашенным при враще1ши предметного столика или скрещенных поляризаторов вдлокна имеют оптические свойства одноосного кристалла при рассмотрении вдоль оптической оси [22, 24]. Но если молекулы ориентированы по отношению к поверхности, то сечение кажется темным только в местах, где радиусы параллельны направлению поляризации, но освещенным в других местах темные и освещенные участки вращаются при вращении скрещенных поляризаторов. Двулучепреломление можно измерить описанными выше способами и данные использовать в качестве критерия степени плоскостной ориентации молекул, если известны показатели преломления, обусловленные азимутальрюй ориентацией молекул. (Это явление может быть скрыто за общей ориентацией, вызванной движением ножа микротома в результате будет наблюдаться полное освещение, которое при вращении скрещенных поляризаторов исчезнет не местами, а полностью. Связь такой ориентации с процессом приготовления среза можно показать сравнением направления погасания с полосками, оставшимися от ножа [251 во всяком случае, погасание всего поперечного сечения может быть следствием влияния микротомного ножа.) [c.249]

Для приготовления ультратонких срезов применяются как стеклянные, так и алмазные ножи. Стеклянные ножи, которые, безусловно, дешевле, готовятся вручную или (с большей точностью и в больших количествах) при помощи аппарата, делающего ножи, такого, например, как LKB 7800 Knife Maker. Производство стеклянных ножей описано в литературе [34—40, 42] и в сопроводительных руководствах к соответствующим аппаратам. Стеклянные ножи используются лишь для подготовки верхней и боковых поверхностей блоков. Выбор ножа для приготовления срезов зависит от финансовых возможностей, вкусов и опыта исследователя, а также [c.113]

Ультраструктура ситовидных трубок с трудом поддается изучению, так как в процессе приготовления срезов давление, существующее в трубках, вызывает смещение их содержимого к одному концу, что приводит к блокированию пор. По этой причине создалось представление, что поры в нормальном состоянии блокированы. Исходя из такого представления, очень трудно было понять, каким образом поры осуществляют свою транспортную функцию. Однако применение более тонких методов, в которых флоэму перед разрезанием можно фиксировать для микроскопирования in situ, показало, что содержимое ситовидных трубок обычно не блокирует ситовидную пластинку, хотя в ее порах изредка обнаруживаются наплывы каллозы — аморфного полимера глюкозы. Было установлено, что у большинства быстрорастущих растений такие отложения происходят либо в )езультате повреждения тканей, либо в нормальных условиях [c.247]

Приготавливают вручную бритвой тонкие срезы нефиксированных стеблей и черешков листьев растений,, выращенных in vitro. Некоторые детали приготовления срезов растителы- [c.375]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология