Фосфолипиды фракционирование

Л. 6 выделяют из микросом путем центрифугирования клеточного гомогената при ускорении 105 000 g с послед, осаждением белков сульфатом аммония. Индивидуальные белки получают фракционированием с помощью хроматографии (в т. ч на гелях агарозы, содержащих ковалентно иммобилизованные фосфолипиды, и гель-фильтрацией на сефадексе), а также изоэлектрич. фокусированием в градиенте pH. Активность Л. б. определяют по перераспределению метки (изотопной, спиновой или флуоресцентной см. Липидные зонды) между донорными мембранами, содержащими меченые липиды, и немечеными акцепторными мембранами. [c.598]

В последние годы разработаны многочисленные методы фракционирования смесей липидов. Особенно пригодными оказались фракционная кристаллизация при низких температурах и фракционирование с помощью соединений включения мочевины, например для разделения насыщенных и ненасыщенных жирных кислот и их эфиров. Для выделения метиловых эфиров жирных кислот с одинаковой длиной цепи была использована вакуумная дистилляция, а молекулярную дистилляцию применяли для разделения моно-, ди- и триглицеридов. Противоточное распределение между двумя жидкими растворителями использовалось для фракционирования жирных кислот в соответствии с длиной цепи или в соответствии со степенью нена-сыщенности, а также для разделения моно-, ди- и триглицеридов и фосфолипидов. Разделение нейтральных и кислых липидов осуществляли диализом через каучуковые мембраны. [c.144]

Фракционирование нейтральных липидов и фосфолипидов на отдельные типы соединений является значительно более сложной задачей в связи с близостью их физико-химических свойств. [c.187]

Фракционированное осаждение фосфолипидов вследствие ряда недостатков (неполнота осаждения фосфолипидов, многократное повторение процесса, получение недостаточно чистых фосфолипидов) постепенно вытесняется методами хроматографии. [c.189]

Фракционирование фосфолипидов проводят с помощью тонкослойной хроматографии, используя множество различных систем растворителей и камер [19, 20, 31]. [c.313]

Миелиновая ткань имеет консистенцию жира и для невооруженного глаза белую окраску (как в белом веществе головного мозга). Б световом микроскопе такие волокна при обработке их обычными липидными красителями имеют вид черных структур. С миелином, извлеченным различными приемами фракционирования клетки (рис. 4.6), проведены биохимические исследования. Они показали, что миелин состоит приблизительно на 80% из липидов и на 20% из белка один из основных липидов —холестерол, а такие вещества, как цереброзиды и фосфолипиды, содержатся также в разных тканях и у разных видов животных в разных количествах. Рентгеноструктурный анализ показывает, что миелин состоит из единиц, повторяющихся с периодом около 18 нм. В электронном микроскопе его легко узнать по чередованию светлых и темных слоев с периодом около 18 нм, который, если сделать поправку на сморщивание ткани при обработке, соответствует двойной толщине сжатой плазматической мембраны. [c.101]

Экстракция липидов плазмы крови соответствующим растворителем и последующее фракционирование полученного экстракта показали, что в плазме крови содержатся триацилглицеролы, фосфолипиды, холестерол и эфиры холестерола, а также небольшое количество неэстерифицированных длинноцепочечных жирных кислот (свободных жирных кислот), которые составляют менее 5% от общего количества жирных кислот, находящихся в плазме. Свободные жирные кислоты (СЖК) являются метаболически наиболее активными липидами плазмы. Основные классы липидов, обнаруженные в плазме крови, приведены в табл. 26.1. [c.256]

Ход фракционирования кратко заключается в следующем. Осадок трижды отмывают 5% раствором ТХУ от кислоторастворимых соединений, а затем, для удаления фосфолипидов, 80% этанолом, горячей смесью этанола и хлороформа (3 1), а затем этанолом и эфиром. Высушенный материал тщательно размешивают в 2 мл [c.323]

Убихинон цитохром с-оксидоредуктаза катализирует окисление добавленных гомологов убихинола цитохромом с с образованием окисленного гомолога и восстановленного цитохрома с. Комплекс представляет собой липопротеидный ансамбль, содержащий цитохромы Ь, си железо-серный белок, прочносвязанный убихинон и фосфолипиды. В литературе описаны два основных способа получения комплекса. Первый основан на фракционировании НАДН цитохром с-оксидоре-дуктазы солями в присутствии детергентов. Второй — на специфическом расщеплении сукцинат цитохром с-оксидоредуктазы при щелочных значениях pH на сукцинатдегидрогеназу и убихинон цитохром с-оксидоредуктазу. Препараты, получаемые обоими методами, практически не различаются ни по полипептидному составу, ни по каталитической активности. Оба препарата могут быть включены в состав протеолипо-сом, так что катализируемая ими реакция оказывается сопряженной с векторным перемещением протонов через осмотически активный барьер (второй пункт электрохимического сопряжения). [c.429]

Поскольку мембранные белки легко денатурируют, их довольно. долго не удавалось выделить и изучить. Преодолеть эти трудности помогло использование принципиально новых подходов. Оказалось, что )яд белков можно солюбилизировать с помощью детергентов. Например, родопсин — светочувствительный пигмент и основной белковый а<омпонент наружных члеников палочек сетчатки — может быть полу- чен в солюбилизированном виде, в котором он нормально обесцвечивается на свету (гл. 13, разд. Е). Несколько ферментов удалось выделить из мембран и очистить фракционированием в органических растворителях, например в метаболе. Мембранные белки обычно нерастворимы в воде. Однако мембраны эритроцитов удалось практически полностью солюбилизировать в воде, используя хелатобразующий агент ЭДТА в концентрации 5-10 М (табл. 4-2) или 0,1 М тетраме-тиламмонийбромид [27]. Результаты этих опытов указывают, что в поддержании стабильности мембран важную роль играют ионные взаимодействия между белками (или между белками и фосфолипидами). [c.352]

С помощью разнообразных методов фракционирования мембранные белки в солюбилизированной форме могут быть разделены и очи-шены до инднандуального состояния. Последующее удаление детергента в присутствии подходящих фосфолипидов позволяет реконструировать в искусственной мембране ту илн иную функцию изучаемого белка. В таблице 23 приведены структурные формулы н названия детергентов, наиболее часто используемых для солюбилизации и реконструкции мембран. [c.560]

Лецитины яйца были достаточно хорошо отделены от нейтральных липидов. Киселев [86] фракционировал липиды, содержащиеся в тканях мозга, на сефадексе LH-20. В смеси хлороформ—метанол (2 1) сефадекс вел себя как слабоосновный анионит, так что фосфолипиды разделялись в соответствии с их основными свойствами. Однако в смеси хлороформ—метанол— вода (65 35 8) сефадекс выступает в роли молекулярного сита, и поэтому вещества разделялись согласно их молекулярным массам. Использование метилированного сефадекса рассмотрено в обзоре [87] сефадекс G-25 был метилирован так, чтобы содержать 40% метоксигрупп липиды элюировали смесью хлороформ—метанол—вода (85 85 30). При этих условиях фосфолипиды элюировались в первой фракции наряду с липопептидами и глиголипидами. DEAE-целлюлоза оказалась полезна для фракционирования кислых липидов, содержащихся в Es heri hia соИ [88]. Фосфолипиды успешно были выведены также с помощью гель-хроматографии на сефадексе LH-20 [77, 89]. [c.208]

Определение жирнокислотного состава с целью его последующего количественного выражения в расчете на массу продукта возможно при наличии данных о-фракционном составе липидов, так как жирные кислоты входят в состав ряда соединений (глицери-ды, свободные жирные кислоты, эфиры стеринов, фосфолипиды и др.). В каждой фракции соотношения жирных кислот и других компонентов (глицерин, стерины, аминоспирты, глицерин в фосфолипидах) различны. Отражая состав жирных кислот в суммарных липидах, в целях последующего количественного выражения этих данных в пересчете на продукт, необходимо знать парциальные доли каждой фракции. Задача фракционирования липидов на основные классы соединений в настоящее время, как правило, решается с помощью адсорбционной хроматографии на силикагеле [2, 22]. [c.213]

При фракционировании сыворотки крови человека этиловым спиртом (см. гл. У1П) получаются главным образом два липо-протеина -липопротеин из фракции П1—О и йрлипопротеин из фракции IV—1 их количество составляет соответственно 5 и 3% общего количества белков плазмы [10—12]. В состав [Рглипо-протеина входит около 70% всех липидов плазмы. Он содержит 25% белка, 30% фосфолипидов и 45% холестерина и эфиров холестерина. Молекулярный вес его 1 300000. ЛрЛипопротеин содержит 65% белка и 35% липидов [10—12]. Молекулярный вес его 200 ООО. [c.228]

Один из методов разделения фосфолипидов на классы основан на фракционированном осаждении из различных растворителей. Так, выделение кефалиновой и лецитиновой фракций проводится следующим образом [c.188]

Позднее многие исследователи модифицировали систему, заменяя петролейный эфир на н-пентан, м-гексан или н-гептан, а уксусную кислоту — на муравьиную, однако существенно улучшить разрешение им не удавалось. В таких системах, используемых для фракционирования нейтральных липидов, мо-ноацилглицерины и фосфолипиды остаются на старте, в то время как наименее полярные углеводороды мигрируют вблизи фронта растворителя, а более или менее полностью разделяются липиды с промежуточной полярностью. В рассмотренной выше системе наблюдается следующая очередность элюирования нейтральных липидов углеводороды, сложные эфиры холестерина, метиловые эфиры жирных кислот, триацилглицерины, свободные жирные кислоты, диацилглицерины и свободный холестерин, [145]. Шараф и др. [146] успешно разделяли сложные смеси нейтральных липидов методом ТСХ по такой схеме сначала элюирование проводили гексаном до продвижения фронта растворителя до отметки 19 см от стартовой линии, после чего гексан заменяли на бензол. Когда фронт растворителя перемешался еще на 19 см. пластинку из бензола переносили в систему гексан — диэтиловый эфир — уксусная кислота <70 30 1), где после прохождения фронтом растворителя 9 см заканчивали элюирование. На полученной в результате хроматограмме наблюдались разделенные зоны сквалена, сложных эфиров холестерина, восков, диоловых эфиров и метиловых эфиров, ацетонидов простых эфиров глицерина, жирных кислот, холестерина и диацилглицеринов. [c.141]

Остаток растворяют в 0,1 мл дистиллированной воды. На хроматографическую бумагу Whatman № 1 наносят отдельно каждую пробу в виде пятна диаметром 10 мм и проводят фракционирование методом нисходящей хроматографии, используя систему растворителей фенол—этанол—уксусная кислота (50 5 6 по объему). В качестве стандартов для хроматографирования и идентификации свободных оснований используют аналогично обработанные известные фосфолипиды или холин, этаноламин, серии и N,N-димeтилэтaнoлaмин [19]. [c.319]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология