Аминокислоты дейтерирование

Данный подход оказывается успешным и при синтезе аминокислот, специфически дейтерированных по р-положению. [c.100]

Наряду с методами двумерной спектроскопии ЯМР существуют еще два распространенных биохимических метода селективное дейтерирование аминокислот определенного типа и сравнение с широким классом гомологов протеинов, в котором замещается лишь небольшое число аминокислот в последовательности. Несмотря на то что оба эти метода были известны задолго до того, как двумерная спектроскопия стала бурно развиваться и нашла широкое применение, только сейчас эти методы стали применяться действительно эффективно благодаря развитию современных методов молекулярной биологии. Селективное дейтерирование в основном проводится исходя из того, что наибольшее сродство к клеткам в питательной среде обнаруживают аминокислоты именно в дейтерированном состоянии, так как это непосредственно обеспечивает встраивание соответствующих аминокислот в молекулу протеина. Однако так как при этом изотопозамещенные аминокислоты не только непосредственно встраиваются в молекулу протеина, но и участвуют в превращениях, а также могут быть использованы при образовании других аминокислот, селективность дейтерирования существенно пони- [c.130]

Эта проблема может быть решена также при выделении исследуемых протеинов на культуре ткани и на клонах бактерий. К этому следует также добавить, что можно было бы подобрать условия, при которых бактерии будут продуцировать именно тот протеин, который необходим. Это, конечно, существенно повышает эффективность использования дорогостоящей дейтерированной аминокислоты. [c.131]

Применение циркуляционных схем, типа изображенной на рис. 8.5, дает возможность имитировать большую длину сорбционного слоя. Так, на циркуляционной установке [301], состоящей из двух препаративных колонок и работающей в изотермических условиях, разделяли достаточно большие пробы (приблизительно И г на 1 см сечения) при диаметре колонок до 30 мм. Разработаны высокоэффективные циркуляционные системы [291], позволяющие разделять смеси веществ при низких значениях коэффициентов селективности (ая= 1,006—1,01), в частности выделять дейтерированные циклоалканы и арены, стереоизомерные замещенные 1,3-диоксоланы, энантиомерные формы а-аминокислот и др. При этом на колонках длиной 2— 4 м реализовывалась эффективность порядка 50—70 тыс. теоретических тарелок. [c.258]

Из различных колебательных частот аминокислот, приведенных в табл. 63, полосы валентных колебаний СОО можно без затруднений отнести эмпирически. Кроме того, они наиболее чувствительны к влиянию координации и межмолекулярного взаимодействия. В общем, частота антисимметричного валентного колебания СОО значительно более чувствительна к этим влияниям, чем частота симметричного колебания. Таким образом, лишь одна первая из этих полос часто может служить удовлетворительной мерой этих влияний. Следует отметить, что в спектрах некоторых комплексов металлов частичное перекрывание полосы деформационного колебания ННз или ЫНг с полосой антисимметричного валентного колебания СОО создает трудности при идентификации последней. Это затруднение можно устранить измерением спектров дейтерированных соединений. При отнесении полосы симметричного валентного колебания СОО следует также быть осторожным, так как она расположена вблизи полосы вырожденного деформационного колебания СНз. [c.276]

К 50 мкг белка добавляли 16 дейтерированных аминокислот (по 50— 100 мкг каждой) и 100—200 мкл 6 М НС, содержащей 0,5% фенола (по объему) смесь выдерживали 20 ч в вакууме при 110°С, упаривали и остаток [c.87]

Рис. 2.14. Хроматограмм гидролизата инсулина, к которому добавлены дейтерированные аминокислоты [324] (с разрешения авторов).

Еще одно преимущество такого подхода — возможность сте-реоспецифического синтеза серии (по желанию изменяя группу Н в кетокислоте-предшественнике) а-дейтерированных аминокислот, просто восстанавливая соединение в тяжелой воде. [c.96]

Лабильная связь всегда перпендикулярна плоскости пиридинового кольца, и совокупность ионных, полярных и гидрофобных взаимодействий в ферменте определяет, какой из конформеров будет преобладать. Это легко показать, например, с помощью пью-меновской проекции процесса ферментативного декарбоксилирова-ния. В конформации, необходимой для декарбоксилирования, карбоксильная группа в значительной степени выходит из плоскости конъюгированной системы. Следовательно, специфичность реакции определяется главным образом этой стадией. Так, ферментативное декарбоксилирование аминокислот идет с сохранением конфигурации и обеспечивает, таким образом, синтез оптически чистых а-дейтерированных аминов, если реакцию проводят в тяжелой воде [304]. [c.439]

В 1971 г. Штернлихт сообщил об измерении времен релаксации атомов углерода обычных и дейтерирован-ных аминокислот, связанных с катионообменными смолами [14]. Обнаружно, что проведение исследования в гетерогенных условиях благоприятствует наблюдению четвертичных атомов углерода с больщими временами релаксации Ту. [c.234]

Методами масс-спектрометрии и ГЖХ было исследовано поведение обогаш енных С-атомами и дейтерированных аминокислот в виде их ТМСнроизводных [76]. Установлено, что дейтеросоеди-нения имеют меньшие времена удерживания, чем протиевые соединения, причем разница увеличивается приблизительно пропорционально числу D-атомов в молекуле аминокислоты. Что касается аминокислот, содержащих атомы С и С, то их времена удерживания различались столь незначительно, что разделить их не удалось. [c.30]

Гербст и Риттенберг [125] исследовали изотопным методом эту реакцию между а-аминофенилуксусной кислотой (Н = СеН5) и пировиноградной кислотой (К = СНз) (когда процесс идет почти исключительно по направлению Б) в растворе, содержащем окись дейтерия, и нашли, что выделяющийся бензальдегид не содержит дейтерия, тогда как аланин оказывается дейтерированным в группе С—И. В согласии с этим, при реакции а-дейтеро-а-аминофенилуксусной кислоты СдНдСО(ЫНг)СООН с пировиноградной кислотой в среде обычной воды был выделен бензальдегид СбНзСОО и легкий аланин. Эти наблюдения, подтверждая приведенный выше. механизм реакции, показывают, что атом водорода связи С — И образующейся аминокислоты имеет своим источником растворитель и что атом водорода карбоксильной группы, отщепляющей- [c.619]

Дейтерированные аналоги аминокислот были выбраны в качестве внутренних стандартов в недавно опубликованном Рафтером и др. [324] методе аминокислотного анализа белка на хроматомасс-спектрометре, снабженном компьютером. Подробная методика этого анализа приведена ниже. [c.87]

Как мы уже видели на примере дейтерирования специфического остатка Гис в рибонуклеазе (см. разд. 14.2.3), при обмене с ОгО происходит замещение одного протона и исчезновение его сигнала в спектре. Этот метод дейтерирования не всегда пригоден, но замещение протонов дейтерием можно осуществить другими способами. Это позволяет наблюдать некоторые отдельные остатки аминокислот [90—92]. Креспи и сотр. вводили нормальный -лейцин 90, 92], -метионин [92], -фенилаланин [92], -аланин [92] и. .-валин [92] в полностью дейтерированный фикоцианин с, фико-эретрин с и цитохром с путем выращивания сине-зеленых морских водорослей в среде 99,8% ОгО, в которую добавлялись эти немеченые аминокислоты. На дейтерий замещались только а-СН-про-тоны. Широкие резонансные сигналы в характеристических областях протонов боковых цепей каждого типа указывают на то, что в молекуле белка эти аминокислотные остатки могут иметь различное окружение. Маркли и сотр. [91] получили почти полностью дейтерированную нуклеазу стафилококка (за исключением положений 2 и 6 в кольцах остатков Три, Мет и Тир положений С-2 [c.386]

Исследовались три варианта избирательного мечения тритием. Исходная методика [59] включает две стадии образование оксазолинона при нагревании пептида с карбодиимидом (дициклогексилкарбодиимидом, ДЦК) или уксусным ангидридом в безводном диоксане с последующим добавлением одной капли пиридина и 0,5 мл ОгО для проведения катализируемой основанием рацемизации с гидролитическим раскрытием кольца. Было найдено, что в указанных условиях аминокислоты подвергались полному дейтерированию исключительно по а-угле-родному атому. [c.489]

Смотреть страницы где упоминается термин Аминокислоты дейтерирование: [c.132] [c.132] [c.305] [c.386] [c.663] [c.57] [c.58] [c.57] [c.58] [c.256] [c.260] [c.320] [c.269] [c.441] [c.118] [c.87] [c.87] [c.620] [c.663] [c.305] [c.161]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология