Аспарагиновая кислота ферментативное определени

Анализ белков.— Белки обычно гидролизуют кипячением с 20%-ной соляной кислотой или 35%-иой серной кислотой. Щелочной гидролиз сопровождается глубокой рацемизацией и применяется только при определении триптофана и тирозина, чувствительных к минеральным кислотам. Ферментативный гидролиз протекает медленно и, вероятно, не полностью, однако он не осложняется деструкцией лабильных продуктов, образующихся при гидролизе. Если аспарагиновая и глутаминовая кислоты присутствуют в белке в виде амидов, то кислотный гидролиз превращает амидный азот в соответствующие аммонийные соли. Методом Кьельдаля определяют количество общего азота содержание амидного азота устанавливают подщелачиванием аликвотной порции и отгонкой аммиака в отмеренный объем титрованной кислоты. В этом случае количество аммиака соответствует количеству присутствующих в белке амидов дикарбоновых аминокислот. [c.640]

Так, А. Хьюм в исследованиях на яблоках показал, что щавелевоуксусная кислота, образующаяся в цикле Кребса, тормозит скорость окисления яблочной и янтарной кислот. Как только плоды достигают определенной степени зрелости, появляются новые ферментативные системы, не связанные с циклом Кребса, превращающие щавелевоуксусную кислоту в аспарагиновую кислоту. При этом возрастает окисление яблочной кислоты как в процессе дыхания, так и в результате декарбоксилирования, при котором происходит ее распад до уг- [c.86]

Анализ белков. — Белки обычно гидролизуют кипячением с 20,%-ной соляной кислотой или 35%-ной серной кислотой. Щелочной гидролиз сопровождается глубокой рацемизацией и применяется толыко лри определении триптофана и тирозина, чувствительных к минеральным кислотам. Ферментативный гидролиз протекает медленно и, вероятно, не полностью, однако он не осложняется деструкцией лабильных продуктов, образующихся ири гидролизе. Если аспарагиновая и глутаминовая кислоты присутствуют в белке в виде амидов,, то кислотный гидролиз превра1цает амидный азот в соответствующие аммонийные соли. Методом Кьельдаля определяют количество общего- [c.654]

Выяснение деталей механизма любой ферментативной реакции — чрезвычайно трудная задача. Даже определение функциональных групп для такого небольшого фермента, как а-химо-трипсин (мол. вес 25 000) [9,67], которые тем или ииым способо% участвуют в каталитическом процессе, является испытанием для исследователя. На сегодняшний день известны следующие функциональные группы ос-химотрипсина, выполияюьцие те или иные функции в каталитическом действии фермента 1) имидазольная группа остатка гистидина 2) метилольная группа остатка серина 3) карбоксильная группа остатка аспарагиновой кислоты [c.256]

Спрашивается, какая из аминокислот З-пептида участвует своей боковой группой в каталитическом центре С полной определенностью это еш,е не установлено. Известно лишь, что отщепление амидного азота от аспарагина, находящегося в положении 15, т. е. превращение аспарагина в аспарагиновую кислоту полностью инактивирует фермент, хотя п не влияет на присоединение З-пептида к 3-белку. Возможно, что 0NH2-гpyппa наряду с группой СООН и имидазолом нужна для акта ферментативного катализа. [c.146]

Специфичность пиридоксалевых ферментов по отношению к определенным субстратам и характер реакции обусловлены белковой частью-молекулы фермента, с которой кофактор обычно прочно связан в нескольких точках. Примером может служить фермент -аспартат 2-оксоглутарат—аминотрансфераза, катализирующий процесс переаминирования аспарагиновой кислоты .Одна из связей пиридоксальфосфата с белком в этом случае является ковалентной и образована формильной группой кофактора и е-аминогрупной остатка лизина протеиновой части фермента. Другой точкой связи служит фосфатная группа пиридоксальфосфата. Атом азота пиридинового кольца и гидроксил тирозинового остатка белка соединены водородной связью. Кроме того, для тонкой регулировки пространственного расположения реагентов в ходе ферментативной реакции служит метильная группа пиридоксальфосфата. 3-Окси-группа кофактора образует связь с некоторой катионной группой апофермента. [c.275]

На следующей ступени биосинтеза формильное производное IV ами-нируется глутамином в присутствии АТФ и определенной ферментной системы в формилглицинамидинрибонуклеотид V, который подвергается ферментативной циклизации с участием АТФ в 5 -фосфорибозил-1 -(5-аминоимидазол) VI. Соединение VI последовательно карбоксилируется двуокисью углерода с помощью фосфорибозил-аминоимидазолкарбокси-лазы и аминируется аспарагиновой кислотой. Полученный продукт VII претерпевает ферментативный распад на фумаровую кислоту и продукт VIII, который формилируется в соответствующий формамид IX, далее циклизующийся в инозин-5 -фосфат X. Последний является предшественником аденозин-5 -фосфата, ксантозин-5 -фосфата и гуанозин-5 -фосфата. [c.439]

Гидролиз белков ЗМ /г-толуолсульфокислотой или АМ метан-сульфокислотой [7,8], содержащей 0,2% триптамина, в вакууме при 110°С, в течение 3 суток с хорощим выходом приводит к аминокислотам, включая триптофан, однако углеводы могут мешать. Триптофан можно определять также после щелочного гидролиза, но при этом разрушаются полностью аргинин, цист(е)ин, серин и треонин. Общее содержание амидов, обусловленное наличием аспарагина и глутамина, можно определить после гидролиза 10 М НС1 при 37°С в течение 10 суток и последующего анализа на аммиак с помощью микродиффузионной техники. Раздельное определение аспарагина и глутамина можно провести с помощью предварительной этерификации (метанол-уксусный ангидрид) свободных карбоксильных групп, последующего восстановления (борогидрид лития) образовавшихся сложноэфирных групп и определения аспарагиновой и глутаминовой кислоты после кислотного гидролиза соответственно в виде v-гидрокси-а-аминомасляной кислоты и б-гидрокси-а-аминовалериановой кислоты. Содержание аспарагина и глутамина получают путем вычитания этих величин из содержания аспарагиновой и глутаминовой кислот после полного гидролиза немодифицированного белка. Полный ферментативный гидролиз белков без деструкции аминокислот можно осуществить, используя смешанные конъюгаты Сефарозы с трипсином, химотрипсином, пролидазой и аминопептидазой М [9] [c.260]