Электронная микроскопия радиоавтография

Какие способы позволяют наблюдать и изучать in situ клеточные белки Мы увидим далее, что сохранение белков и их макромолекулярной архитектоники вследствие участия белков во всех клеточных структурах составляет первостепенную проблему для цитологов. Последовательно рассмотрим цитологические и цитохимические приемы, используемые при световой микроскопии, а затем при электронной микроскопии классическую фиксацию, ультракриотомию, криовытравливание (низкотемпературное травление). Мы увидим также, что может дать для изучения белков применение новейших цитологических методов, таких, как иммуноцитохимия и радиоавтография. Далее мы попытаемся подвести итоги современных знаний о структуре и ультраструктуре запасных белков, об их генезисе и эволюции в клетках, будь то кристаллические протеины или белковые тельца. [c.126]

Позднее аналогичные эксперименты, осуществленные на клеточном уровне с применением радиоавтографии и электронной микроскопии, подтвердили полуконсервативный путь редупликации ДНК у высших организмов и бактерий [c.421]

Чтобы изучить образование белков в динамике и установить, например, изменения белковых структур в процессе их хранения, можно ввести в органы или ткани предшественник белка, меченный тритием или углеродом " С, и с помощью радиоавтографии выявлять радиоактивные соединения. При световой и электронной микроскопии биологический материал обрабатывают с таким расчетом, чтобы получить тонкие или сверхтонкие срезы, которые затем покрывают подвижной ядерной эмульсией, как, например, эмульсия Ильфорсд Г5 или Л4 (1Иог5с1 Оз или Ь4) по методу Ларра и Дроза [52]. После удаления эмульсии местонахождение радиоактивных участков определяется по присутствию зерен восстановленного серебра, которые задерживают фотоны или электроны. - [c.128]

Из меристематических клеток стеблей бобов выделен макро-молекулярный комплекс, состоящий из ксилоглюкана и целлюлозы [26]. Препарат был выделен путем последовательной экстракции образца этанолом, буферным раствором с pH 7,0 и 4%-ным раствором КОН в присутствии 0,1 7о МаВН4. Остаток представлял собой комплекс целлюлоза—ксилоглюкан и не содержал протеина и ароматических соединений, но сохранял как бы начальную форму этой полимерной композиции, характерной для клеточной стенки. В этой работе [26] был использован широкий арсенал современных методов исследования электронная микроскопия на оттененной поверхности образца световая микроскопия, сопряженная с радиоавтографией, выявляющей фукозу с меченым атомом водорода, и флюоресцентная микроскопия, которая обнаруживает соединение фукозы или галактозы с флюоресцирующим [c.150]

Пригодна для радиоавтографии при световой и электронной микроскопии, особенно для Р-частиц. Эту эмульсию следует перед употреблением разводить водой [c.282]

Радиоавтография при электронной микроскопии, особенно для выявления бедных энергией Р-частиц (Ш>, но, кроме того, и для КЗ и 35S [c.282]

Локализация ферментов гистохимически устанавливается либо с иомои(Ью цветных реакций на продукты ферментативных реакций, либо путем 11сиользования т. н. хромогенных субстратов — веществ, в результате ферментативного превращения к-рых образуются окрашенные плохо растворимые соединения. Наряду с применением обычной микроскопии в Г. широко используются электронная, ультрафиолетовая и флуоресцентная микроскопия, радиоавтография (при использовании радиоактивных изотопов для изучения обмена веществ) и др. методы исследования. [c.475]

В работах с мечением белков флуоресцеином для их обнаружения показана однородность распределения белков в геле. Однако Дэвид и др. [15], которые исследовали распределение белка методом радиоавтографии Ч-меченой перокспдазы, связанной с сефарозой, не обнаружили связывания фермента внутри гранул сефарозы. Лаш и др. [46] нашли, что расхождения объясняются не методами обнаружения белка, а разными методами его иммобилизации. Используя электронную микроскопию ферритииа, связанного с сефарозой, они продемонстрировали, что использование очень эффективного метода связывания, а именно большого избытка ферритина в ходе связывания (>50 мг/мл), с эффективностью связывания >90% приводит к вогнутой кривой распределения ковалентно связанного ферритина, в то время как при эффективности связывания >50% наблюдается снова однородное распределение связанного ферритина. [c.256]

Как полагают, при генетической рекомбинации в области каждого кроссинговера происходит синтез некоторого количества ДНК. Метод радиоавтографии в сочетании с электронной микроскопией позволяет показать, что радиоактивные предшественники включаются в пахитенную ДНК главным образом в области рекомбинационных узелков или поблизости от них. [c.25]

Be bAia ценным методом является также радиоавтография. Этот метод существует в двух вариантах. Первый из них напоминает методику, которой пользуются также и для исследования ряда других объектов меткой служит при этом Н (источник мягкого р-излучения), обычно в форме тритиированно-го тимидина, включающегося в ДНК, что дает возможность получать изображения молекулы с помощью достаточно чувствительной фотографической эмульсии. В руках Кэрнса этот метод оказался превосходным орудием для оценки молекулярных размеров ДНК вирусного и да ке бактериального происхождения. Полученные им результаты хорошо дополняют данные электронной микроскопии и полностью согласуются с моделью Уотсона — Крика. [c.143]

Одна из наиболее важных областей применения радиоактивных изотопов в биологии клетки - )то определение локализации радиоактивных соединений в срезах клеток или живых тканей методом радиоавтографии. При использовании этого метода живые клетки подвергают кратковременному (импульсному) мечению с последующей инкубацией в течение различных промежутков времени в нерадиоактивной среде. Затем клетки фиксируют и обрабатывают для проведения световой или электронной микроскопии. Каждый приготовленный препарат покрывают тонким слоем фотоэмульсии и оставляют на несколько дней в темноте - время, в течение которого происходит распад радиоактивного изотопа. Затем фотоэмульсию проявляют. Местоположение радиоактивных молекул в каждой клетке можно определтгть по расположению темных зерен серебра. Если инкубировать клетки с радиоактивным предшественником ДНК С Н-тимидином), то можно увидеть, что ДНК синтезируется в ядре и там же остается. И наоборот, мечение клеток радиоактивным предшественником РНК СН-уридииом) показывает, что РНК исходно синтезируется в ядре и затем быстро накапливается в цтгтонлазме клеток. [c.223]

Во многих лабораториях при решении различных цитологических проблем используют свойства меченых радиоактивных изотопов, например фосфора ( Р), железа ( Ре), серы углерода ( С) и др. Сочетание цитофотометрии с методом ра диоавтографии дает возможность определить локализацию веществ не только в самих клетках, но и в отдельных ее органел-л ах. С применением комплексных методов — радиоавтографии, цитофотс метрии и электронной микроскопии — были получены весьма ценные данные о метаболической активности, месте синтеза и перемещении пластических веществ клетки. [c.9]

ЦИИ И разрешение зависят от размера кристаллов, диаметр которых составляет 0,04 и 0,3 мкм. Чем меньше кристаллы, тем, как правило, точнее локализация и выше разрешение. В световой микроскопии разрешение на радиоавтографах составляет 1 мкм это означает возможность различения двух радиоактивных частиц, удаленных друг от друга на расстоянии 1 мкм. В электронной микроскопии разрешение выше в 5 — 10 раз. В мелкозернистых эмульсиях, используемьк при микроскопической радиоавтографии, для дальнейшего повышения чувствительности увеличивают содержание бромида серебра. Чувствительность эмульсии характеризуется также числом зерен серебра, образуюпщхся при прохождении одной частицы. Эффективность радиоавтографического метода характеризуется величиной отношения числа зерен серебра на радиоавтографе к числу актов распада в препарате. [c.281]

Радиоавтография при световой и электронной микроскопии. Эмуль-сшо всегда перед употоебленнем следует разбавлять (Осторожно Взрывоопасна ) [c.282]

Проблема верификации клеток соединительной ткани до настоящего времени не может считаться полностью решенной. На уровне световой микроскопии надежно идентифицировать клетки можно лишь в случае их типичного строения. Каждый следующий методический уровень (гистохимия, трансмиссионная и сканирующая электронная микроскопия, иммуноморфология, радиоавтография) увеличивают надежность идентификации, однако абсолютных критериев принадлежности к той или другой популяции пока не выявлено. Это относится даже к специфическим поверхностным антигенам фибробластов и макрофагов, которые могут отсутствовать на определенных стадиях развития. Особенно затруднительна вследствие отсутствия маркеров идентификация клеток-предшественников, что и является причиной противоречивых представлений о происхождении клеток (см. раздел 1.1.2 и 1.4.2). В остальных случаях сочетание относительных критериев позволяет идентифицировать большинство клеток соединительной ткани. Трудности встречаются только в крайних ситуациях малодифференцированные и деградирующие клетки, выраженная функциональная односторонность, например в фиброкластах. [c.287]

Благодаря тому, что группа белков, синтезируемых в ацинарных клетках поджелудочной железы, предназначена для секреции, мы можем судить о пути их передвижения от места синтеза к месту высвобождения Этот путь можно проследить, сочетая радиоавтографию с электронной микроскопией Схет соответствующего эксперимента представлена на рис 8-5 Если клетки кратковременно проинкубировать с [ Н]-амин ОКИ слотами (импульсное мечение), а затем различное время выращивать в нерадиоактивной среде, то новосинтезированные белки в первую [c.10]

Изображения ДНК во время репликации были получены с помощью рациоавтогра-фии и электронной микроскопии. При радиоавтографии изображение образуется в результате распада подходящего изотопа, например трития. Испускаемые электроны взаимодействуют с гранулами серефа фотографической эмульсии. После проявления пленки возникают черные точки. Метод ра-диоавтофафии имеет довольно низкую разрешающую способность - порядка нескольких сотен ангстрем. Однако у этого метода есть определенное преимущество он позволяет видеть лишь те молекулы, которые содержат метку. Для того чтобы сделать ДНК видимой при рациоавтографии, в нее включают ТИМИН или тимидин, меченный тритием. [c.28]

Рис. 8-5. Схема, объясняющая, как с помощью электроппомикроскопической радиоавтографии можно проследить путь секреторных белков, в состав которых входят [ Н]-меченные аминокислоты. Важно, чтобы все свободные радиоактивные аминокислоты были отмыты до заключения и единственным радиоактивным источником в ткани оставались белки. Затем гкань покрывают топким слоем фотоэмульсии. Электроны, испускаемые тритием, засвечивают зериа серебра в положениях, несколько смещенных по отпошепию к источнику излучения, поэтому локализация радиоактивной молекулы определяется мепее точно, чем позволяет разрешепие электроппого микроскопа

Справочник химика 21

Химия и химическая технология