Применение радиоавтографии

Очень важной областью применения радиоавтографии является обнаружение радиоактивного ДНК-зонда после его гибридизации с препаратом ДНК, подвергнутым электрофоретическому разделению. К сожалению, провести гибридизацию в самом геле невозможно, поскольку зонд не может в него проникнуть. Поэтому ДНК после электрофореза переносят на нитроцеллюлозный или найлоновый фильтр по методу Саузерна (Саузерн-блоттинг) или с помощью элюции. Расположение молекул ДНК на фильтре в точности соответствует таковому в геле. Перенесенную на фильтр ДНК подвергают [c.65]

Позднее аналогичные эксперименты, осуществленные на клеточном уровне с применением радиоавтографии и электронной микроскопии, подтвердили полуконсервативный путь редупликации ДНК у высших организмов и бактерий [c.421]

Применение радиоактивных изотопов, т. е. хроматографирование смеси, один или несколько компонентов которой являются радиоактивными, облегчает задачу качественного анализа. Пятно на хроматограмме, содержащее радиоактивный компонент, можно обнаружить счетчиком Гейгера— Мюллера, либо методом радиоавтографии. Этот метод заключается в том, что бумажная хроматограмма, содержащая радиоактивный изотоп, контактирует некоторое время со светочувствительной пленкой или бумагой, после проявления которых наличие радиоизотопа легко обнаруживается по почернению того места, которое соответствует положению пятна радиоизотопа на первичной хроматограмме. Методом радиоавтографии можно обнаруживать любое неорганическое или органическое вещество, молекула которого содержит радиоизотоп. [c.124]

В течение нескольких лет авторы, изучая теорию фотографического про цесса с применением изотопных р-индикаторов, для оценки получаемых результатов использовали количественную радиоавтографию совместно с измерениями прн помощи счетчика Гейгера — Мюллера. Например, установлено, что погружение проявленной пленки в раствор меченого тиосульфата ступенями по 12,7 мм усиливает адсорбцию тиосульфата проявленным серебром. При оценке с помощью счетчика требовалось из каждой зоны пленки [c.242]

В данной работе описаны два подобных опыта с применением количест венной радиоавтографии. Метод был использован для сравнения только средних количеств радиоактивного материала на единицу площади образцов. Однако при проведении этой работы стало очевидным, что радиоавтография обладает такими возможностями, которые заслуживают более широкого внимания. [c.243]

Если необходимо проследить передвижение и поступление в те или иные органы растущего растения меченого элемента, то это можно сделать с помощью специального счетчика. Кроме того, применение радиоактивных изотопов позволяет использовать метод радиоавтографии отдельных органов растения, а также на срезах, для наглядного представления о распределении в растении поступившего радиоактивного вещества. [c.560]

Задачей описанных опытов было качественное определение переноса металла при трении и изнашивании методом радиоавтографии. Для этого ролик, работавший в паре с радиоактивным образцом, после окончания каждого опыта выдерживали несколько суток в контакте с рентгеновской пленкой. На рис. 45 показаны фотоотпечатки с этих пленок. На фото, соответствующем ролику, работавшему на свежем масле (см. рис. 45), ясно видна темная полоса, свидетельствующая о переносе металла на контртело. При применении работавшего масла подобной полосы не обнаруживается. Как известно, перенос металла характеризует наиболее разрушительный характер износа, сопровождающийся явлениями схватывания. [c.162]

Если на поверхность твердого препарата, в котором каким-то неравномерным образом распределено радиоактивное вещество, наложить фотопленку, выдержать определенное время и затем проявить ее, то получаются отпечатки, в которых плотность почернения отвечает распределению активности в препарате. Такие отпечатки называются радиоавтографами. Примером применения [c.140]

Применение С и П в качестве меченых атомов особенно важно, так как эти элементы почти всегда содержатся в тех веществах, с которыми химику-органику и биохимику приходится иметь дело. К счастью, с точки зрения получения очень точных радиоавтографов, оба эти элемента дают р-излучение небольшой проникающей силы в этих целях наиболее подходящим является П с максимальной энергией р-частиц 0,015 Мэе. [c.142]

К сожалению, любое увеличение разрешающей способности требует для получения радиоавтографа соответственного увеличения количества радиоактивного вещества. При попытках добиться более высокой разрешающей способности оказалось, что применение более удовлетворительных методов в биохимии, весьма вероятно, будет ограниченным, так как требующиеся для этого значительные количества радиоактивных веществ будут оказывать существенное влияние на нормальный обмен веществ. Применение [c.142]

В клетке можно пометить любые молекулы для этого е них вводят один или несколько радиоактивных атомов. Нестабильные радиоактивные атомы распадаются, испуская излучение, что позволяет прослеживать судьбу исследуемых молекул. Применение радиоизотопов в клеточной биологии ограничено двумя видами экспериментов анализ метаболических путей по методу вытеснения метки и локализацией меченых молекул в клетке с помощью радиоавтографии. Антитела представляют собой очень удобный и чувствительный инструмент для локализации специфических биологических макромолекул В организме позвоночных животных продуцируются миллионы различных антител, в каждом из которых имеются участки связывания, опознающие специфические группы молекул. Метод гибридом позволяет получать моноклональные антитела с одинаковой специфичностью практически в неограниченных количествах. В принципе можно получать моноклональные антитела против любых макромолекул в клетке и затем использовать эти антитела для локализации или очистки определенных макромолекул, а в некоторых случаях и для анализа внутриклеточных свойств этих молекул. [c.228]

Во-вторых, даже в условиях нормальной граничной смазки при малых контакты типа металл — металл все еще имеют место. Это ясно показывают результаты исследований с применением радиоавтографии [39]. В работах такого рода перенос металла с радиоактивного ползуна на неподвижную поверхность регистрируется по участкам засвечивания фотоэмульсии, помещенной перед исследуемой поверхностью. Оказалось, что, хотя граничная смазка сильно уменьшает общее количество перенесенного металла, это уменьшение в основном относится к размеру, а не к числу перенесенных частиц. ] ными словами, радиоавтографы смазанных и несмазанных поверхностей больше отличаются друг от друга интенсивностью пятен, чем их числом. Боуден и Тэйбор [c.355]

Рве. 16-22. Схема строения обонятельного эпителия, специализированного для восприятия запахов. Можно различить три типа клеток опорные клетки, базальные клетки и обонятельные нейроны. Как показывают эксперименты с применением радиоавтографии, базальные клетки являются стволовыми. Из них образуются обонятельные нейроны. Это редкое исключение из правила, согласно которому нейроны представляют собой перманентные клетки. Каждый обонятельный нейрон служит около месяца (у млекопитающих), а затем заменяется новым. От округлой головки обонятельного нейрона отходят 6-8 видоизмененных ресиичек как полагают, они содержат рецепторы для пахучих веществ. Аксон, идущий от другого конца нейрона, передает информацию в мозг. Всякий раз, когда базальная клетка дифференцируется в обонятельный нейрон, от него отрастает новый аксон, который образует надлежащие связи в мозгу. [c.153]

Фргачиц и Книвальд [238] нашли, что аскорбиновая кислота, введенная в слой силикагеля, предохраняет кортикостероиды от окисления при длительной экспозиции, необходимой при применении радиоавтографии. С этой целью пластинки опрыскивают насыщенным раствором аскорбиновой кислоты в абсолютном этаноле. Аскорбиновая кислота гасит флуоресценцию обычно флуоресцирующих слоев, так что для обнаружения разделенных соединений уже нельзя использовать УФ-облучение. [c.332]

Спустя несколько лет Кернс исследовал процесс репликации непосредственно, использовав метод радиоавтографии ДНК с применением тимидина, меченного радиоактивным изотопом водорода — тритием ( Н) [25]. Клетки Е.соИ выращивали на среде, содержащей Н-тимидин, в течение разных промежутков времени, но в типичном опыте — около [c.196]

Какие способы позволяют наблюдать и изучать in situ клеточные белки Мы увидим далее, что сохранение белков и их макромолекулярной архитектоники вследствие участия белков во всех клеточных структурах составляет первостепенную проблему для цитологов. Последовательно рассмотрим цитологические и цитохимические приемы, используемые при световой микроскопии, а затем при электронной микроскопии классическую фиксацию, ультракриотомию, криовытравливание (низкотемпературное травление). Мы увидим также, что может дать для изучения белков применение новейших цитологических методов, таких, как иммуноцитохимия и радиоавтография. Далее мы попытаемся подвести итоги современных знаний о структуре и ультраструктуре запасных белков, об их генезисе и эволюции в клетках, будь то кристаллические протеины или белковые тельца. [c.126]

Рис. 4.13. Скрининг библиотеки геномной ДНК с применением меченого зонда. Клетки после трансформации высевают на твердую питательную среду, обеспечивающую рост только трансформированных клеток. 1. Переносят клетки из каждой выросшей колонии на твердую подложку (например, нитроцеллюлозный или найлоновый фильр) так, чтобы их расположение соответствовало таковому на чащке. 2. Клетки лизируют, высвободившуюся ДНК подвергают денатурации и депротеинизации и фиксируют на фильтре. 3. На фильтр наносят меченый ДНК-зонд и проводят гибридизацию. Смывают с фильтра негибридизовавшийся зонд и проводят радиоавтографию с тем чтобы определить, какие клетки содержат меченый ДНК-зонд. 4. Идентифицируют на чашке колонии, содержащие искомую ДНК (положительный гибридизационный сигнал), отбирают из них материал и культивируют.

Махадеван и Лундберг [35] использовали радиоавтографию хроматограмм в тонких слоях для установления чистоты синтетически полученных холе-стерилолеатов-С . Другие примеры применения ХТС в синтетических работах с радиоизотопами уже упоминались [39, 51]. [c.78]

Вещество, оказавшееся однородным после применения различных методов хроматографического разделения, можно рассматривать как хроматографически чистое . На рис. 44 приведен радиоавтограф тонкослойной хроматограммы меченых жирных кислот. Фирма-изготовитель указала, что чистота каждой такой кислоты была подтверждена методом газовой хроматографии. Рис. 44 показывает, однако, что ати продажные препараты, все без исключения, представляют собой смеси. Почти все загрязнения — промежуточные продукты синтеза этих кислот — более полярны, чем сами жирные кислоты. Они, по-видимому, застревают в газохроматографической колонке и не регистрируются в элюате. [c.181]

С целью повышения пользы количественной радиоавтографчи образцов, полученных с применением метода меченых атомоь, необходимо уделить внимание некоторым деталям при изготовлении этих образцов. В настоящем сообщении будут рассмотрены только сухие образцы. Как уже отмечалось, особенность радиоавтографии заключается в необходимости одновременной экспошгции многих образцов. Для использования только нескольких образцов радиоавтография является громоздким и неудобным методом, и ее использование в таких случаях может быть оправдано только исключительными обстоятельствами. Для осуществления одновременной экспозиции многих образцов они должны иметь такую форму, чтобы их можно было расположить рядом друг с другом. При сравнении образцов с помощью одной пленки было бы желательно использовать маленькие планшетки определенного размера, которые можно было бы наложить па пленку и удерживать вместе специаль- [c.246]

Оценка результатов. В опытах с применением изотопных индикаторов количественная радиоавтография может найти широкое использование. Ее-используют при постановке различных исследований для оценки работьв в целом и облегчения выбора техники эксперимента. [c.248]

После испытания на скольжение снимали радиоавтограф для определения переноса металла. Этот метод определения переноса особенно пригоден, когда более мягкий полусферический образец скользит по более твердому плоскому образцу. Количество и распределение частиц продуктов износа на плоской новерхности определяли с достаточной точностью по вьоывавшим-ся ими потемнениям пленки, поскольку отсутствие царапин на поверхности плоского образца повышало точность радиоавтографа. При опытах выяснилось, что применение мягкого металла нри длительном контакте, сопровождающемся износом, устраняет значительное выкрашивание металла из твердой поверхности. В тех случаях, когда наблюдался значительны неренос металла, отличные четкие радиоавтографы снимали ири краткой экспозиции с помощью мелкозернистых пленок. При малол переносе металла применяли более чувствительную пленку. П.1генки проявляли обычным способом, после чего сравнивали результаты различных опытов. [c.265]

Индивидуальные фенолоаминокислоты обычно выделяются методами бумажной хроматографии [156, 158]. Только два вида растворителей получили широкое применение смеси бутанол — уксусная кислота — вода и алифатические спирты, насыщенные разбавленным аммиаком. Специальные растворы для опрыскивания с целью обнаружения этих кислот (в дополнение к нингид-рину и неэффективному диазотированному амину [159]) приведены в табл. 2. Очень чувствительна реакция со смесью сульфат церия — мышьяковистая кислота предел обнаружения составляет 0,005 мкг [ Ъ9, 160]. Иодированные соединения можно метить а затем обнаруживать методом радиоавтографии [155, 161]. Имеются данные по величинам Rf и окраске следующих веществ продуктов окисления триптофана (производных хинолина) [162, 163, 164], производных индола [165], продуктов окисления тиронина [166] и тирозина (см., например, [13]). [c.64]

Пути применения изотопных ппдиваторов. Имеются три основных напранлеиия использования И. и. Методом И. и. изучают характер распределе-н и я веществ и пути их перемещения. И. и. вводят в ту или иную систему и через онределен-пые промежутки времени устанавливают наличие И. и. в различных частях системы. Наиболее наглядные картины распределения получаются без разрушения образца нрн помощи радиоавтограмм (см. Радиоавтография). Используя, напр., радиоавтографы кристаллов, можно убедиться, распределяется ли иримесь равномерно по всему кристаллу или только по отдельным его ребрам и граням радиография растения показывает, что фосфор, введенный с удобрением, накапливается иреим. в растущих частях растения. Возможность следить за перемещением И. и. в самых различных процессах используется при проверке аналитич. и технологич. схем, при изучении путей и скорости обмена веществ в организме, при оценке эффективности удобрений, при исследовании свойств лекарств и т. д. [c.92]

Метод радиоавтографии впервые был применен еще в 1904 году Лондоном и Коптаревым на животных объектах при введении в организм радия. [c.57]

Радиоактивные изотопы элемептов, иначе, — радиоатомы, еще иначе, — меченые атомы (их меченость заключается в их радиоактивности), полученные путем ядерных реакций различных типов (см. 3) либо специально, либо при работе атомных реакторов (см. ниже), получили за последние 20 лет очень важное и разнообразное применение в различных областях науки (химия, биология, медицина, геология, сельское хозяйство), в промышленности и технике. Применение их [метод меченых атомов) основано на том, что заряженные частицы (электроны), а также 7-лучи, нспускао.мые даже ничтожно малыми концентрациями радиоизотопов, примешанных к обычным атомам, легко выявляют себя вызывают сцинтилляцию (искрение) особых экранов , оставляют на фотопластинке след — радиоавтограф , регистрируются при помощи специальных счетчиков (Гейгера, Гейгера — Мюллера и др.) . [c.174]

В результате ранее проведенных исследований по проникновению, разрушению и выведению из организма животных фосфорор-ган1 ческих инсектицидов было установлено, что наибольшие количества продуктов распада этих соединений накапливаются в моче и выводятся с ней. Поэтому для хроматографирования была взята м ча животных (морских свинок), которым за 1—1,5 часа до забоя вводился диметил-4-нитрофеннлтиофосфат, меченый Р" или Мочу без предварительной обработки наносили на полоску бумаги и после высыхания хроматографировали, как описано выш . Полученные хроматограммы экспонировали с рентгенопленкой для получения радиоавтографов. Во всех случаях продукты распада одновременно содержали серу и фосфор, чего не должно было быть при окислении. Однако, как уже отмечалось, независимо от того, произошло окисление или нет, сера на хроматограммах должна отделяться от фосфора, по крайней мере, на самом последнем этапе гидролиза. Очевидно, что смесь изоамиловый спирт—муравьиная кислота—вода не вызывает такого разделения. Для выяснения этого вопроса была взята другая смесь бутанол— уксусная кислота—вода. Известно, что в этой смеси ортофосфор-ная кислота несколько удаляется от точки нанесения. Радиоавтографы хроматограмм мочи, полученные с применением растворителя бутанол—уксусная кислота—вода, представлены на рис. 6. [c.91]

Износ прочих деталей машин. Было так ке проведено много других исследований с применением радиоактивн1)ГХ металлических деталей [30, 69— 77]. В одном раннем исследовании [69] использовали радиоактивный чугунный вкладыш, который был установлен в подшипнике масляного насоса с механическим приводом. Величина износа вкладыша определялась периодическим отбором проб масла, помещением их в светонепроницаемые контейнеры, в которые закладывалась рентгеновская пленка для получения радиоавтографов. [c.284]

Локализация ферментов гистохимически устанавливается либо с иомои(Ью цветных реакций на продукты ферментативных реакций, либо путем 11сиользования т. н. хромогенных субстратов — веществ, в результате ферментативного превращения к-рых образуются окрашенные плохо растворимые соединения. Наряду с применением обычной микроскопии в Г. широко используются электронная, ультрафиолетовая и флуоресцентная микроскопия, радиоавтография (при использовании радиоактивных изотопов для изучения обмена веществ) и др. методы исследования. [c.475]

Одно из основных применений техники клонирования-выделение индивидуальных генов непосредственно из генетического материала. Каждый индивидуальный ген представляет собой только очень небольшую часть эукариотического генома. Например, размер генома типичной клетки млекопитающих составляет около 10 п.н., так что один ген размером, скажем, 5000 п. н. составляет только 0,00005% всей ядерной ДНК. Для идентификации столь незначительного количества материала необходимо иметь высокоспецифичный зонд, взаимодействующий только с определенными, интересующими исследователя последовательностями, чтобы выделить их из огромного количества других последовательностей. Обычно применяемый метод состоит в использовании высокомеченых радиоактивных РНК- или ДНК-зондов, гибридизация которых с геном регистрируется с помощью радиоавтографии. [c.242]

Предел разрешающей способности метода радиоавтографии в применении к биологическим объектам ставится здесь также разрз шающнм действием излучений. Доза облучения, сообщаемая ядру клетки, проходящей через ядро а-частицей, составляет величину порядка 100 фдр. Чувствительные к излучению клетки часто получают аномальные изменения или погибают от действия одной а-частицы, проходящей через ядро. [c.143]

Применение фотографического метода ограничивается дозиметрическими измерениями,. для которых обычно не требуется точности выше 20%, а также такими задачами, в которых особенно ценным является его свойство передавать детали пространственного распределения интенсивности излучения, например как в радиоавтографии, описанной выше. Во всех других случаях этот метод трудно применить вследствие довольно сложной зависимости между интенсивностью и общим количеством излучения и степенью почернения пленки. В количественных исследованиях предпочтение обычно отдается другим методам, очень чувствительным и основанным на том, что при прохождении а-частиц или электронов через воздух и другие газы они становятся электропроводящими. В литературе можно найти довольно полные обзоры по вопросу аппаратуры для измерения ионизирующих излучений [22—24]. Для удобства описания измерительные приборы этого типа будут разбиты на три основных класса в зависимости от метода, применяемого для определения величины тока иони-запии. [c.144]

Нативные молекулы ДНК очень велики и при экстракции из клеток обычно разрываются в результате физических или ферментативных воздействий. Мезелсон и Сталь в своих экспериментах по репликации ДНК Е. соН имели дело со сравнительно небольшими фрагментами ДНК, и полученные ими результаты относятся только к состоянию ДНК, предшествовавшему репликации и после нее. Полная репликация хромосомы Е. соН впервые наблюдалась Джоном Кейрнсом. Он разработал метод очень мягкого разрушения клеток Е. соИ. В результате Кейрнсу удалось вьщелить интактные хромосомы Е. соН и пометить их радиоактивным Н-тимидином. Меченые хромосомы аккуратно переносили из раствора на твердую поверхность, которая затем покрывалась в темноте фотографической эмульсией и в течение нескольких недель экспонировалась. В это время электроны, испускаемые радиоактивной ДНК, вызывали образование зерен серебра в фотоэмульсии вдоль молекул ДНК. Последующая обработка эмульсии дает радиоавтограф хромосомы, на котором цепочка зерен серебра отслеживает конформацию молекулы ДНК. Применение метода радиоавтографии привело прежде всего к установлению того факта, что ДНК Е. соН имеет кольцевую форму (рис. 4.22). Впоследствии было показано, что такую же форму имеет ДНК всех прокариотических организмов, а также вирусов и органелл эукариотических организмов. [c.120]

Одна из наиболее важных областей применения радиоактивных изотопов в биологии клетки - )то определение локализации радиоактивных соединений в срезах клеток или живых тканей методом радиоавтографии. При использовании этого метода живые клетки подвергают кратковременному (импульсному) мечению с последующей инкубацией в течение различных промежутков времени в нерадиоактивной среде. Затем клетки фиксируют и обрабатывают для проведения световой или электронной микроскопии. Каждый приготовленный препарат покрывают тонким слоем фотоэмульсии и оставляют на несколько дней в темноте - время, в течение которого происходит распад радиоактивного изотопа. Затем фотоэмульсию проявляют. Местоположение радиоактивных молекул в каждой клетке можно определтгть по расположению темных зерен серебра. Если инкубировать клетки с радиоактивным предшественником ДНК С Н-тимидином), то можно увидеть, что ДНК синтезируется в ядре и там же остается. И наоборот, мечение клеток радиоактивным предшественником РНК СН-уридииом) показывает, что РНК исходно синтезируется в ядре и затем быстро накапливается в цтгтонлазме клеток. [c.223]

Под этим термином подразумевается совокупность подходов и методов, с помощью которых можно каждый ген отнести к определенной хромосоме, т.е. составить генетическую карту организма. Например, у человека благодаря применению двух основных методов—гибридизации соматических клеток и гибридизации in situ — установлена хромосомная локализация ряда генов, ответственных за некоторые заболевания. При гибридизации in situ препарат метафазных хромосом на поверхности стеклянной пластины инкубируют с радиоактивно меченным зондом. Точную область гибридизации определяют с помощью радиоавтографии (фотографическую эмульсию наносят, непосредственно на пластинку). Образование зерен над гистологически идентифицированной хромосомой позволяет сделать вывод о принадлежности данного гена к конкретной хромосоме, а часто и к определенному ее участку. Некоторые гены человека, локализованные методом гибридизации in situ, представлены в табл. 36.5. [c.46]

НОЙ системе. Например, обезьяне делали инъекцию спустя день после удаления одного глаза. Радиоавтографы зрительной коры выявили чередующиеся темные и светлые полосы, соответствующие колонкам глазодоминантности, существование которых было продемонстрировано ранее электрофизиологическими и анатомическими методами (см. гл. 17). Эти результаты показаны на рис. 9.16А. Так же успешно этот метод был применен на обонятельной системе, для которой относительно мало что известно о пространственных картинах активности. После инъекции крыса вдыхала некое пахучее вещество, что удивительным образом приводило к появлению небольших четко очерченных очагов активности в обонятельной луковице над слоем гломе- [c.233]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология