Замыкающий ион

Раствор образца перед нанесением либо сгущают, например добавляя сахарозу, либо вводят в слой геля при его полимеризации (рис. 12.9). За слоем, содержащим образец, следует слой фокусирующего геля с равномерной низкой концентрацией полиакриламидного геля. В этом слое компоненты образца после их миграции из геля с образцом концентрируются в зону, в которой они с различной степенью разделения следуют друг за другом. На этом этапе сфокусированные компоненты образца переходят в следующий слой более концентрированного разделяющего геля. Электрофоретическая подвижность макромоле-кулярных соединений уменьшается до такой степени, что низкомолекулярный замыкающий ион догоняет концентрирован- [c.301]

Как схематически показано на рис. 3.10, образец белка помещают между верхней и нижней буферными системами. Верхний буфер (фаза альфа) содержит замыкающий ион (компонент 1) противоион (компонент 6). Нижний буфер (фаза бета) содержит ведущий ион (компонент 2) и противоион (компо- [c.121]

Рис. 3.10. Расположение зон на различных стадиях изотахофореза ("Л+В+С — компоненты образца 1 — замыкающий ион. 2 — ведущий ион, 6 — противоион).

Разделяющий гель должен иметь такой pH, чтобы под-движ пость замыкающего иопа в нем была выше, чем подвижность любого другого компонента пробы. В этом случае замыкающий ион будет двигаться впереди белков. [c.86]

Значение pH концентрирующего и стартового гелей должно быть на 2—3 единицы pH ниже, чем р/Са замыкающего иона. [c.87]

Изотахофорез — метод разделения белков на ряд последовательных зон в соответствии с их электрофоретической подвижностью [58, 61, 62, 65]. Под действием постоянного тока зоны белков располагаются непосредственно друг за другом, как бы складываются в стопку . В присутствии противоионов такие стопки из зон белка, имеющих различные значения pH, образуются между ведущими и замыкающими ионами. Скорость, с которой перемещаются зоны белка, и распределение концентраций ионов между их границами определяются концентрацией ведущих ионов. Объясняется это следующим скорость, с которой мигрирует замыкающий ион, зависит от скорости миграции ведущего иона, т. е. ион с самой малой собственной подвижностью перемещается с такой же скоростью, как и ион с самой высокой подвижностью, вследствие увеличения градиента напряжения в направлении, обратном направлению миграции. Внутри стопки белки концентрируются в узких зо нах, так как концентрация ионов на каждой стороне движущейся границы фиксирована согласно принципу Кольрауша [65]. Разделение зон белка достигается при помощи разделителей ( спейсеров ), т. е. веществ, ионы которых обладают промежу- [c.120]

Замыкающим ионом должно служить слабое основание или аминокислота, у которых величина рХа примерно на одну единицу ниже, чем pH разделяющего геля. [c.88]

После нанесения образца включают ток ионы с самой высокой подвижностью движутся к соответствующему электроду первыми. На некотором расстоянии от них следуют самые малоподвижные ионы, а ионы образца, обладающие промежуточной подвижностью, располагаются между ними соответственно их относительным подвижностям. Если подвижности ионов образца очень близки, разрешение можно улучшить путем внесения в исходный образец синтетических амфолитов, называемых ионами-прокладками. Эти ионы по сравнению с ионами образца обладают промежуточной подвижностью и, располагаясь между ними, способствуют разделению последних. Ионы-прокладки сходны с теми, которые применяются при электрофокусировании. Они создают градиент pH между ведущими и замыкающими ионами, способствуя тем самым дополнительному разделению ионов образца по принципу электрофокусирования. Изотахофорез обладает очень высокой разрешающей способностью и применяется как для аналитического, так и для препаративного разделения самых разнообразных веществ. [c.136]

Как же практически равная скорость частиц достигается на практике В изсугахофорезе ддя разделения используется, например, тефлоновый капилляр и два иона электролита различной подвижности. Лидирующий ион, который имеет большую подвижность, вводится в капилляр с одного конца, а на другом помещается замыкающий ион с меньшей подвижностью. [c.304]

Четвертым основным методом разделения, который быстро развивается в настоящее время, является изотахофорез (ИТФ). В отличие от других методов ИТФ требует использования двух электролитов, а именно ведущего (leading) электролита, который содержит ион с максимальной электрофоретической подвижностью, и замыкающего (terminating) электролита, который содержит ион с минимальной подвижностью по сравнению с промежуточной подвижностью ионов, входящих в состав анализируемой смеси. Исходное расположение ведущий ион — (A+B + + D)—замыкающий ион постепенно изменяется до состояния, аналогичного получаемому по методу с подвижной границей. Когда ионы исследуемой смеси достигают состояния ведущий ион — А, В, С, D — замыкающий ион , разделение зон прекращается, так как электролит-носитель отсутствует. Перемещение зарядов осуществляется только в результате перемещения компонентов исследуемой смеси и любых ионов противО положного заряда. Установлено, что все компоненты движутся с одинаковой скоростью. Дискретное распределение электрического поля в зонах приводит к резко выраженным границам раздела зон. Возможность регулирования концентраций в ис- Следуемых зонах путем изменения свойств ведущего электролита и равномерность концентрации данного компонента внутри каждой изучаемой зоны делают этот метод особенно ценным для качественного и количественного анализа, а также для препаративного разделения. Практические возможности применения основных электромиграционных методов приведены в табл. 12.2. [c.281]

В ко]щентрирующем и стартовом гелях белки должны концентрироваться в результате изотахофореза [942]. При тех значениях pH, которые имеют эти гели, буферный (замыкающий) ион, находящийся в электродных сосудах, должен иметь наименьшую электрофоретическую подвижность. [c.86]

В качестве примера неоднородной системы приведем здесь-с.хему, описанную Орнштейном [942] и Дэвисом [281]. Поскольку подв ижности сывороточных белков при pH 8,0 лежат в пределах 0,6-10- —8 10- см -В- -с- , желательно, чтобы подвижность замыкающего иона была ниже 0,6-10 см -В - С . Подвижность иона глицината в свободном растворе равна — 15 единицам подвижности (1 единица подвижности соответствует 10 см2-В- -с- ). Чтобы в буфере подвижность этого иона составила —0,6 единицы, степень ионизации глицина не должна превышать /зо- Согласно уравнению Гендерсона — Гассельбаха, такая степень ионизации получается при pH 8,3. Хорошей буферной емкостью при этом pH обладает трис. Ведущим ионом является С1-. В процессе изотахофореза белки концентрируются и входят в разделяющий гель, где скорость их движения замедляется вследствие эффекта молекулярного-сита. С другой стороны, из-за зменения pH при входе в разделяющий гель (pH 9,5) подвижность глицината становится равной 5 единицам, в результате чего этот ион перегоняет вег-сывороточные белки. (Движение глицината не тормозится гелем, поэтому для того, чтобы он достиг более высокой скорости, чем любой компонент белковой смеси, даже и не требуется изменения pH.) [c.87]

Аллен и др. [21] использовали градиент напряжения и движущуюся границу для концентрирования пробы перед ее разделением. В этой системе pH везде одинаков и лишь в геле, содержащем пробу, снижена концентрация буферных ионов. Замыкающий ион, находящийся сначала в электродном сосуде, имеет более высокую лодвижность, чем любой белковый ком- [c.89]

При изотахофорезе разделение ионов происходит в соответствии с их подвижностями, а концентрация ионов в каждой зоне зависит от концентрации предшествующего иона. Это означает, что концентрация ионов в любой зоне определяется первым, или ведущим, ионом. Необходимо, чтобы исследуемый ион находился между ведущим и замыкающим ионами. Последний должен обладать самой низкой подвижностью по сравнению со всеми находящимися в системе ионами. В этом случае ионы располагаются в такой последовательности, что ион с более высокой подвижностью будет двигаться впереди иона с меньшей подвижностью. Поскольку в условиях изотахо- [c.168]

Подобного рода затруднения можно, по крайней мере в изученных нами случаях, преодолеть, используя изотахофорез (ИТФ) — один из методов электрофореза, основанный на принципе регулирующей функции Кольрауша (Kohlraus h, 1897). При ИТФ ионы разделяемого образца располагаются в порядке уменьшающейся электрофоретической подвижности между двумя соответственно подобранными видами ионов, один из которых ( ведущие ионы ) имеет более высокую подвижность, чем другой ( замыкающие ионы ). Так как принцип регулирующей функции действителен как для больших, так и для малых ионов, ИТФ при выполнении некоторых условий позволяет анализировать белки без особых затруднений. Эти условия следующие [c.143]

При изотахофорезе белков их концентрация соизмерима с концентрацией быстро мигрирующего иона, вначале заполняющего весь объем геля. Электрофоретическая подвижность замыкающего иона, находящегося первоначально в верхнем электродном резервуаре, остается все время меньше, чем подвижность самого медленного из белков смеси. При включении эле1ктрического тока быстро мигрирующий ион буфера опять отходит к нижнему электроду, но теперь вплотную за ним следуют сами белки, выступающие в роли переносящих ток ионов. [c.75]

ИОНЫ хлора и, следовательно, тянутся позади них. В среде верхнего геля, имеющей более низкое значение pH, подвижность гли-цинатных ионов становится еще меньше, так как в результате дополнительного протонирования увеличивается количество цвитте-рионов. Ионы хлора, напротив, продвигаются очень быстро, и между этими двумя разновидностями ионов возникает граница раздела. Так как и ионы хлора, и глицинатные ионы представляют собой часть одной и той же электрической системы, то в области локализации менее подвижных глицинатных ионов напряжение увеличивается, а в области более подвижных ионов хлора — уменьшается. Следовательно, замыкающие ионы будут стремиться догнать веду-щие, а белковые анионы, промежуточные по подвижности, будут располагаться между первыми и вторыми ионами. В итоге происходит концентрирование белковых анионов позади ведущих ионов. Образуется чрезвычайно узкая белковая полоса, которая подходит к рабочему гелю вслед за ионами хлора. [c.133]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология