Обратнофазовая ВЖХ ВЖХ

Обратнофазовая гидрофобная хроматография пептидов с элюцией ацетонитрилом дает хорошие результаты, однако, как уже упоминалось, этот растворитель дорог, трудно хранится и очень токсичен. Поэтому привлекают внимание работы, где в качестве органической составляющей элюента использовались спирты. [c.202]

ОБРАТНОФАЗОВАЯ ГИДРОФОБНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ПРИ НИЗКОМ ДАВЛЕНИИ [c.176]

Кизельгур (целит) нашел себе применение главным образом в качестве сорбента, фиксирующего неподвижную жидкую фазу в распределительной хроматографии, например в рассмотренной выше обратнофазовой хроматографии типа ХОФ-5. Кроме того, его использовали для прочной сорбции метилированного по карбоксильным остаткам белка при создании специфического сорбента для нуклеиновых кислот. В конце 60-х годов колонки с сорбентом такого рода (МАК-колонки) были весьма популярны, но сейчас нх вытеснили более совершенные варианты хроматографии НК. [c.224]

Для фракционирования пептидов используют различные методы колоночной хроматографии и ТСХ. Ранее мы уже знакомились с разделением пептидов гель-фильтрацией и обратнофазовой гидрофобной хроматографией. Нередко, если пептидов много, хроматографические методы следуют один за другим. Например, сначала пептиды разделяют на группы по размерам гель-фильтрацией, а затем следует ХОФ или ионообменная хроматография. [c.299]

Для фракционирования глиадинов использовали также хроматографию гидрофобного взаимодействия [36, 157]. Высокую степень разрешения при разделении глиадинов дает основанная на том же самом принципе высокопроизводительная обратнофазовая жидкостная хроматография [17]. [c.184]

Нанесите надосадочную фракцию, полученную на стадии 13 табл. 4.8, на колонку для проведения обратнофазовой хроматографии при скорости протекания 2 мл/мин. Измеряйте поглощение при 225 нм. [c.123]

ОФ-ВЖХ — обратнофазовая высокоэффективная жидкостная хроматография [c.13]

Отметим одно существенное преимущество обратнофазовой хроматографии для фракционирования белков, НК и их компонентов. При такой распределительной хроматографии эти вещества выходят из колопки растворенными в элюенте, основу которого составляет вода, что способствует сохранению их нативности и облегчает дальнейшие процедуры. Кроме того, использование перечисленных выше средств управления гидрофобностью или гидрофильностью вещества в случае водного элюента значительно упрощается. [c.169]

Некоторое недоумение на первый взгляд может вызвать другая работа, где гидрофобная обратнофазовая хроматография использовалась, как и выше, для фракционирования негистоновых белков хроматина. В этой работе предварительно отделенные от нуклеиновых кислот и гистонов (на оксиапатите) белки хроматина сначала диали-зовали против довольно концентрированного раствора сульфата ам- [c.182]

ОБРАТНОФАЗОВАЯ ГИДРОФОБНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ПРИ ВЫСОКОМ ДАВЛЕНИИ (ЖХВД) [c.188]

Из-за относительно малого размера пор болынинстиа продажных модифицированных силикагелей традиционной областью приложения обратнофазовой гидрофобной ЖХВД для интересующих нас объектов было фракционирование и очистка сравнительно низкомолекулярных компонентов белков и НК аминокислот, пептидов, нуклеозидов и коротких олигонуклеотидов. Мы начнем с анализа опыта, накопленного в этой области, чтобы далее обратиться к рассмотрению возможности использования такого типа ЖХВД для исследования самих белков и нуклеиновых кислот. Но сначала сделаем несколько практических замечаний общего характера, относящихся к планированию и подготовке хроматографического эксперимента. [c.192]

В другом варианте обратнофазовой гидрофобной хроматографии плазмы крови на колонке Li hrosorb RP-8 элюцию вели в среде, подкисленной до рП 3 монохлоруксусной кислотой, используя выпуклый градиент концентрации ацетонитрила (0—45%) в смеси с 0,05 М раствором ДДС-Na (1,4%о). Последний, по-видимому, блокирует заряды аминогрупп и обеспечивает гидрофобность аминокислот, т. е. играет роль ион-парного агента, как подробнее описано ниже для случая фракционирования пептидов. [c.194]

Большое число работ, опубликованных в 1980—1983 гг., посвящено отработке обратнофазовой гидрофобной хроматографии фенил-тиогидантоиновых производных аминокислот (ФТГ-АК). В виде таких производных аминокислоты одна за друго отщепляются при автоматическом определении последовательности аминокислот в полипептиде по методу Эдмана. Эта операция получила название секвенирования белков, а соответствующие автоматические приборы [c.196]

Обратнофазовую гидрофобную хроматографию исноль.зуют обычно для разделения относительно мелких пептидов, наиример трипсиновых гидролизатов белка. Ввиду наличия в составе пептидов как гидрофобных, так и гидрофильных аминокислотных остатков их взаимодействие с гидрофобизированной матрицей оказывается не слишком сильным, и в практике встречаются режимы хроматографической элюции, сходные с оппсапными для ФТГ-АК. [c.201]

Рассмотрению возможностей обратнофазовой гидрофобной хроматографии белков в основном посвящен сравнительно недавно опубликованный обзор [Rubinstein, 1979]. Основные его выводы совпадают с тем, что было сказано выше при рассмотрении обратнофазовой гидрофобной хроматографии пептидов. Для белков с молекулярной массой в интервале 12—30 тыс. Дальтон автор отдает предпочтение силикагелям, модифицированным октилсиланом (Са). В качестве органического компонента элюента, по его мнению, следует предпочесть градиент концентрации пропанола, вплоть до 40%-ной концентрации, если позволяет растворимость белка. Для получения узких пиков рекомендуется в качестве водного компонента использовать буфер высокой (примерно 1 М) концентрации, подавляющий ионное взаимодействие белка с силанольными группами матрицы. При pH 5—6 разрешение получается обычно хуже, чем при pH 4 (формиатно-пиридиновый буфер) или 7,5 (Na-ацетатный буфер). Существенно указание на то, что скорость элюции следует снизить до 60—90 мл/см Ч. Продолжительность фракционирования белков при этом остается относительно небольшой — 1—3 ч. Белки целесообразно разделить предварительно на группы [c.210]

Полиамиды, в том числе и гидрофильные, в меньшей степени гидрофильны, чем целлюлоза или силикагель. Этим обусловлено их применение для распределительной ТСХ ароматических производных аминокислот — ФТГ-АК и данзил-АК. С водными или полярными элюептами полиамидные пластинки ведут себя подобно обратнофазовым сорбентам — замедление миграции веществ вдоль них обусловлено явлением распределения между фазами. С неполярными растворителями сильнее проявляются сорбционные свойства полиамида особенно хорошо сорбируются вещества с делокализованными л-электронами. Подробнее различные механизмы фракционирования на полиамидных и иных носителях рассмотрены в обзорной статье [Zakaria et al., 1983], хотя приведенные в ней примеры несколько устарели. [c.462]

Рис. 4.9. Очистка расщепленного клострипаином САТ-кальцитонина с помощью обратнофазовой хроматографии ЖХВД. В и О указывают положение восстановленной (В) и окисленной (О) форм кальцитонина.

Контролируйте окисление кальцитонина с помощью аналитической обратнофазовой ЖХВД, как описано в п. 2 и 3 данной таблицы. [c.123]

Когда переход в окисленную форму кильцитонина завершится, снова проведите очистку окисленного кальцитонина обратнофазовой ЖХВД, как описано в п. 2 и 3 данной таблицы. [c.123]

Два Примера белков, состоящих из нескольких субъединиц образование которых удалось осуществить в клетках . соИ, — это инсулин [11] и IgG (антитела к раково-эмбриональному антигену, EA [34]). В обоих случаях гены, кодирующие разные субъединицы, клонировали и экспрессировали независимо друг от друга. А- и В-цепи инсулина синтезировали в виде гибридных белков и были выделены, очищены и S-сульфонированы, как описано в табл. 4.7 и 4.15. S-сульфонированные производные очищали ионообменной хроматографией и обратнофазовой ЖХВД перед восстановлением исходной конформации белков. [c.127]

Метод очистки -эндорфина, секретируемого в среду клетками Е. oli [43], приведен в табл. 4.25. Для подтверждения того факта, что -эндорфин действительно секретировался в культуральную среду, а не проникал туда из периплазматического пространства, определяли активность периплазматических фер-ментов-маркеров -лактамазы [47] (табл. 4.26) и щелочной фосфатазы [48] (табл. 4.27). После очистки рекомбинантных полипептидов, секретируемых в среду, гель-фильтрацией и обратнофазовой ЖХВД определяли их аминокислотный состав в целом и N-концевые аминокислотные последовательности. Результаты определения N-концевых аминокислотных последовательностей выявили гетерогенность N-концов, но во всех полипептидах отсутствовали сигнальные последовательности. Гетерогенность, по-видимому, обусловливается действием протеиназ [42]. [c.131]

Проанализируйте пробы, собранные с сефадекса G-25, с помощью обратнофазовой хроматографии ЖХВД, проводя элюцию линейным градиентом [c.132]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология