Гемагглютинация, определение вируса

Для постановки гемагглютинации определенное количество эритроцитов смешивают в лунках планшета с равным объемом исследуемой суспензии вируса в разных разведениях. Планшет затем инкубируют 30—45 мин при комнатной температуре без перемешивания. По результатам реакции можно определить, при каком разведении вирусного препарата утрачивается гемагглютинирующая активность. Количество вируса, агглютинирую- [c.170]

У многих вирусов имеются антигены, которые могут адсорбироваться на эритроцитах и вызывать их слипание. При взаимодействии большого количества вирусных частиц и эритроцитов образуется сеть клеток, и суспензия агглютинирует, т. е. эритроциты выпадают в осадок. Существует некоторая специфичность, заключающаяся в том, что определенные вирусы вызывают агглютинацию эритроцитов определенных животных, но если обнаружена активная комбинация, то гемагглютинация становится быстрым тестом, позволяющим определить титр вируса. [c.211]

Способность вируса гриппа связывать и агглютинировать эритроциты можно использовать и для определения концентрации противовирусных антител в образцах сыворотки. Для этого проводят реакцию между последовательными разведениями сыворотки и известным количеством вируса (достаточным для полной агглютинации эритроцитов в нормальных условиях), а затем добавляют суспензию эритроцитов концентрацию антител определяют, исходя из последнего разведения сыворотки, еще способного тормозить гемагглютинацию. [c.174]

Примечание. Следует включать в опыт соответствующие контроли, чтобы убедиться в правильности определения концентрации вируса, в том, что сыворотка сама по себе не вызывает гемагглютинации и что в отсутствие вируса эритроциты нормально оседают. [c.174]

В предыдущих разделах настоящей главы рассмотрены методы определения количества вируса, основанные на его биологических свойствах способности размножаться в культуре клеток и куриных эмбрионах, а также агглютинировать эритроциты. Очевидно, что эти методы не пригодны для определения числа физических частиц вируса. Соотношение между единицами гемагглютинации или инфекционности и числом вирусных частиц в очень большой степени зависит от штамма вируса, и поэтому часто возникает необходимость определения числа вирусных частиц с помощью электронной микроскопии. Наиболее распространенный метод подсчета вирусных частиц состоит в том, что образец исследуемого вируса смешивают с равным объемом суспензии шариков латекса с известной концентрацией эти шарики имеют примерно такой же диаметр (около 100 нм), что и вирионы вируса гриппа. Полученную смесь после негативного контрастирования (например, фосфорно-вольфрамовой кислотой) наносят на сеточки для электронной микроскопии и сравнивают число шариков латекса и вирусных частиц в одних и тех же полях (рис. 6.4). Зная концентрацию шариков латекса в исходной смеси, нетрудно подсчитать концентрацию вирусных частиц [15]. [c.181]

Вероятно, изучение диссоциации ГТХ под действием мочевины [14], рассмотренное выше, необходимо проводить параллельно с измерением отношения осей по вязкости. Такой подход позволил прийти к важному выводу о том, что угнетающее действие на гемагглютинацию, вызываемое вирусами, оказывают в равной степени основные молекулы ГТХ, половина и четверть молекулы (ГТХ 2 , ГТХ 2" и ГТХ 2" ). Более мелкие фрагменты не оказывают угнетающего действия на гемагглютинацию. Другими словами, существует определенный минимальный размер субъединиц ГТХ, необходимый для эффекта угнетения гемагглютинации под действием вирусов. Мягкая обработка, приводящая к диссоциации молекул ГТХ, не затрагивает углеводную часть молекулы и не оказывает влияния на активность той ее части, которая является субстратом для нейраминидазы. Действительно, все фрагменты ГТХ, обладающие ингибирующей активностью, дают положительную реакцию Шиффа (йодная кислота реактив Шиффа). Влияние размера молекулы гликопротеипа па его ингибирующие свойства было ранее подчеркнуто Готтшалком [32]. В дальнейшем этот вопрос специально изучали Фазекас де Санта Грос и Готтшалк [33]. [c.157]

Таким образом, эффекты ультрамалых доз отнюдь не являются парадоксальными в кооперативных системах. В традиционной фармакологии эти закономерности описываются функцией насыщения доза—отклик . Однако биохимическая интерпретация такой зависимости в области ультрамалых концентраций требует определенной осторожности, так как концентрация рецепторов, взаимодействующих с лигандом, не учитывается в уравнении, приведенном на с. 130. Традиционно предполагается, что концентрация рецепторов значительно меньше концентрации специфических лигандов и соответственно реакцию можно описать уравнением первого порядка. В тех системах, где концентрация или активность лигандов может быть измерена независимым биохимическим и одновременно биологическим методами, линейной корреляции между ними, как правило, не наблюдается. В частности, при сравнении активности нейраминидазы по гидролизу олигомерного субстрата с ее активностью по гидролизу рецепторов эритроцитов между ними наблюдается нелинейная зависимость. В этом случае, как и в реакции гемагглютинации эритроцитов вирусами гриппа и при многих других биологических взаимодействиях, измеряемых на определенном отрезке времени, титр реакции (отклик) связан с аналитической концентрацией реагента логарифмическим законом (Шатаева и др., 1978), Это свидетельствует о том, что реакции, возбуждаемые реагентом при воздействии на клетку, могут иметь не кооперативный, а каскадный (цепной) характер. [c.133]

Пуэ [20] и Перлманн с сотр. [19] показали, что после обработки препаратов ГТХ человека нейраминидазой их электрофоретическая подвижность изменяется приблизительно от —8,4-10" до —6,7-10 см сек в при pH 7. Это может происходить в результате уменьшения отрицательного или (по данным титрования) увеличения положительного заряда ГТХ. При pH 7 гидроксильная группа тирозина не заряжена и не может обусловливать такое изменение в подвижности. Пейп и Максфилд [45] нашли, что молярное количество аргинина в ГТХ, определенное по методу Сакагучи, увеличивается после действия нейраминидазы пропорционально количеству отщепленной NANA. Благодаря этому факту становится понятным обнаруженное увеличение положительного заряда, о котором было сказано ранее. В противоположность необычному поведению тирозина в ГТХ человека увеличение количества аргинина наблюдается в каждом из четырех исследованных гликопротеинов, оказывающих тормозящее действие на реакцию гемагглютинации под действием вирусов. В гликопротеипе, не оказывающем тормозящего действия (например, в фетуине), никаких изменений количества аргинина не обнаружено. [c.161]

Все тогавирусы агглютинируют эритроциты различного происхождения, хотя конкретные условия проведения гемагглютинации (ГА) неодинаковы для разных вирусов. Чаще всего используют эритроциты гусей или цыплят, поскольку с ними реакция наиболее чувствительна. Титрование неохарактеризован-ного вируса проводят при нескольких значениях pH. После того как оптимум pH определен, в дальнейшем гемагглютинацию проводят при этом значении. [c.91]

В этом разделе мы рассмотрим ряд методов определения концентрации вируса в различных препаратах. При необходимости определение инфекционного титра проводят методом бляшек (см. разд. 6.1), который позволяет наилучшим образом охарактеризовать вирусный препарат. Недостаток данного метода состоит в том, что он требует довольно много времени. Во многих случаях приблизительный титр определяют по проценту инфицированных клеток методом иммунофлуоресцентного окрашивания на Т-антиген (для этого сравнивают значения, полученные при инфицировании культур тестируемым препаратом и препаратом, титр которого известен). С помощью реакции гемагглютинации (см. разд. 6.2) так же, как и путем измерения оптической плотности или электронной микроскопии препаратов, можно определить общее количество вирусных частиц, в том числе пустых капсидов, псевдовирионов (содержащих вместо вирусной ДНК фрагментированную ДНК клетки-хозяина) и ДИЧ [12]. По соотношению между БОЕ и ГАЕ можно сделать вывод о наличии дефектных частиц в препаратах вируса. Для хороших заготовок вируса это соотношение составляет около 5-105—10 [13]. С большей точностью дефектные и другие нестандартные вирионы можно выявить, экстрагируя вирусную ДНК из небольшого объема заготовки (или лизата) и исследуя ее с помощью рестрикционного анализа или электрофореза (см. разд. 6.3). [c.235]

Бакли указывает, что при определении антител в сыворотках к вирусу киасанурской лесной лихорадки в опытах на мышах и с помощью реакции гемадсорбции получены одинаковые результаты. Интересно отметить, что при обследовании сывороток людей, вакцинированных против весенне-летнего клещевого эниефа-лита, в реакции задержки гемагглютинации она получила отрицательные результаты. Однако в этих же сыворотках с помощью предложенного Бакли метода удалось обнаружить антитела к вирусу весенне-летнего клещевого энцефалита. [c.167]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология