Центрифугирование примеры использования

Материал, полученный одним из описанных выше методов, обычно контаминирован клеточными компонентами. Однако в тех случаях, когда высокая степень очистки не обязательна (например, для постановки RIA или ELISA), его можно использовать уже на этой стадии. Тем не менее для большинства исследований необходима дальнейшая очистка вируса с помощью зонально-скоростного или изопикнического центрифугирования в градиенте. При скоростном центрифугировании положение вируса в градиенте определяется его коэффициентом седиментации, а при изопикническом — плавучей плотностью. Для достижения максимальной степени очистки вирусных частиц от примесей изменение концентрации образующего градиент вещества должно быть плавным в то же время на промежуточных стадиях очистки нередко используют ступенчатые градиенты. В некоторых случаях принципы скоростного и изопикнического центрифугирования совмещаются примером может служить использование градиентов глицерина — тартрата калия [14]. В таких градиентах концентрация тартрата калия возрастает в направлении дна пробирки, достигая плотности, соответствующей плавучей плотности вируса концентрация глицерина, наоборот, максимальна на мениске, что препятствует продвижению медленно седиментирующего материала в направлении дна. Все типы градиентов обычно центрифугируют в бакет-роторах, но в случае изопикнических градиентов такие же или даже лучшие результаты можно получить в угловых или вертикальных роторах с помощью приспособлений для медленного разгона и остановки, обеспечивающих переориентацию градиента без перемешивания. При очистке конкретного вируса часто приходится проводить целую серию последовательных стадий центрифугирования в разных типах градиентов, чтобы добиться нужной степени очистки. [c.100]

С помощью предложенных выше подходов проанализируем несколько описанных в литературе примеров использования зонально-скоростного центрифугирования в градиентах сахарозы с точки зрения выбора режима. Одновременно составим представление о порядках значений скорости и продолжительности центрифугирования в наиболее типичных случаях фракционирования белков и нуклеиновых кислот. Примем следующие приблизительные значения плавучей плотности (р, г/см ) для белков 1,3 для ДНИ 1,35 для ДНК и РНП 1,4 для РНК 1,5. [c.232]

Трение влияние формы 299 Молекулярная масса 300 Метод точного измерения коэффициента седиментации 301 Примеры использования скоростной седиментации 302 Зональное центрифугирование в предварительно подготовлен ном градиенте плотности 306 Определение коэффициента седиментации с помощью зонального центрифугирования в предварительно приготовленном градиенте плотности ЗП [c.578]

Интересно отметить, что во всех 24 патентных примерах, относящихся к полимеризации винилхлорида, предусмотрено использование комплексообразующих агентов, таких, как эфир, тетрагидрофуран, триэтиламин или этилацетат. Во всех случаях нерастворимый полимер отделяют центрифугированием, промывают тетрагидрофураном и спиртом, а затем высушивают в вакууме при комнатной температуре в течение 16 час. Поливинилхлорид, полученный таким способом, дает рентгенограммы, характерные для кристаллических полимеров. [c.157]

При гладкой металлической футеровке можно было значительно увеличить скорость мельницы. В качестве примера можно указать, что загрузка, приблизительно эквивалентная загрузке, использованной в предыдущем случае, не подвергалась центрифугированию даже при наивысшей полученной скорости, которая составляла 185% критической. Это иллюстрируется кривой [c.369]

Изложенный метод определения относительного уноса без проведения дисперсионного анализа твердой фазы является оригинальным. Использование его расширяет возможности выбора центрифуг для разделения конкретной суспензии в промышленности. Вместе с тем этот метод, как видно из рассмотренного примера, базируется на существующих представлениях о модели процесса осадительного центрифугирования и, в силу своих особенностей, не может сколь-нибудь существенно углубить эти представления. [c.103]

В случае смеси макромолекул с различными значениями 5 при относительно высокой концентрации возникает особая проблема. В этом случае молекулы мешают седиментации не только себе подобных, но и других типов молекул. К тому же молекула с большим S и большей концентрационной зависимостью, должна седиментировать через раствор более медленно движущихся молекул. При высокой концентрации более быстро осаждаемые молекулы будут так задерживаться, что они седиментируют почти с той же скоростью, что и более медленно осаждаемые молекулы при этом может происходить маскировка того факта, что в действительности имеется смесь, и можно получить ошибочную информацию о гомогенности материала. Этот процесс носит название эффекта Джонстона — Огстона. На деле для разделения больших молекул нуклеиновых кислот часто приходится работать с очень низкими концентрациями, поскольку только в этих условиях происходит разделение двух компонентов. Однако даже при этих концентрациях полученные данные показывают меньшее содержание более быстро осаждаемого компонента, чем имеется в действительности. Пример этого дан на рис. 11-14. Как будет показано ниже (см. разд. Зональное центрифугирование в предварительно подготовленном градиенте плотности ), эта трудность сводится к минимуму при использовании метода зонального центрифугирования. [c.294]

В этом разделе собраны далеко пе все примеры использования центрифугирования в градиепте плотности S2SO4 в основном мы ставили своей целью описать ряд свойств градиентов плотности S2SO4 в сравнении с градиентами плотности s l. [c.203]

Приведем несколько примеров использования равновесного центрифугирования в градиенте плотности растворов saSO. [c.264]

В качестве примера использования вставки типа В-29 и сбора фракций через периферический канал можно указать на работу, авторы которой очищали зональным центрифугированием в роторе Ti-15 гранулы зимогенов из поджелудочной железы крысы [S hneider, Smith, 1977]., [c.276]

Примеры использования зонального центрифугирования в препаративной ультрацентрифуге [c.313]

Примеры использования зонального центрифугирования в препаративной ультрацентрифуге 313 Зональная седиментация в самогенерирующемся градиенте плотности 317 Седиментация ДНК при щелочных значениях pH 319 Определение молекулярной массы методом седиментации — диффузии 320 [c.578]

В качестве примера применения адсорбционного метода [62] рассмотрим определение поверхности суспензии сульфата бария с использованием изотопа радия-224 (ТЬХ). К суспензии сульфата бария при энергичном перемешивании добавляется определенное количество насыщенного раствора Ва (ТЬХ) 804. Твердая фаза отделяется центрифугированием и в центрифугате определяется активность, создаваемая ТЬХ. Для исключения влияния адсорбции ТЬХ на стенках сосуда и определения исходной активности па раллельно с основным опытом проводится контрольный — с насыщенным раствором сульфата бария (без суспензии). Расчет величины поверхности сульфата бария производится по формуле (129). [c.194]

Итак, проблемы, связанные с размерами ДНК, молекулярной гомогенностью и отсутствием эффективных химических и биохимических методов, делают ДНК менее пригодным объектом для анализа последовательности, чем РНК. В этом отношении один из возможных подходов заключается в использовании вирусной ДНК, которую можно разделить на субъедийицы или которая встречается в таком виде в природе. Примером может служить ДНК бактериофага Т5, которая представляет собой линейную двойную спираль со специфической последовательностью, содержащую несколько разрывов в определенных точках обеих цепей. При центрифугировании этой ДНК в щелочном градиенте (для разделения комплементарных цепей) седиментограмма указывает на наличие по крайней мере шести субъединиц размером от 34 до 4 мкм. Одноцепочечная субъединица длиной 4 мкм содержит, по-видимому, около 12 ООО нуклеотидов, что все еще слишком много для выяснения первичной структуры. [c.36]

Вычисление константы свднментацин из данных, полученных методом шкалы. В качестве примера процесса вычисления констант седиментации веществ с высоким молекулярным весом по данным, полученным из диаграммы седиментации с использованием метода шкалы, приведем вычисления для раствора ацетилцеллюлозы в ацетоне. Основными данными, необходимыми для вычисления константы седиментации, являются положения подвижной границы в различные моменты времени после начала центрифугирования. Так как по методу шкалы положение максимума отклонения соответствует положению границы при отсутствии диффузии, то задача заключается в том, чтобы получить зависимость смещения Z от расстояния от оси вращения и найти положение биссектрисы полученного максимума на дифференциальной кривой. Второй задачей является преобразование отсчетов по компаратору в расстояния (в сантиметрах) от мениска раствора. [c.532]

Ниже рассмотрены особенности каждого из названных солевых градиентов. Различные технические аспекты их приготовления и использования подробно проанализируем на примере самого распространенного — градиента плотности растворов s l. Затем отметим особенности и принципиальные отличия других солевых градиентов. Отдельно остановимся на равновесном центрифугировании в градиентах плотности растворов метризамида. [c.250]

Пример 11-У. Выделение избранных участков ДНК фага %с помощью центрифугирования в S2SO4, содержащем Hg +. Если ДНК фага I Е. oli расщепить на мелкие фрагменты путем гидродинамического фрагментирования или действием ультразвука (гл. 18), фрагменты можно разделить на группы со сходными плотностями с помощью центрифугирования в S2SO4, содержащем Hg +. Это фракционирование происходит за счет различных соотношений пар АТ и G- в различных областях Л-ДНК. Необычное разделение, достигаемое с использованием этого метода, показано на рис. 11-45. [c.338]