Метод наращивания пептидной цепи

Метод наращивания пептидной цепи. Суть этой процедуры заключается в разделении пептидной цепи на малые фрагменты и их независимый конформационный анализ с использованием в качестве исходных приближений низкоэнергетических состояний свободных аминокислотных остатков. Чтобы избежать экспоненциального расширения возможных опти- [c.241]

После удаления Ы-защитной группы наращивание полипептидной цепи проводят стандартными методами пептидного синтеза в р-ре (см. Пептиды). В качестве конденсирующих агентов наиб, часто используют карбодиимиды или предварительно превращают аминокислоты в активир, эфиры. При синтезе олигонуклеотидов в качестве Н, используют макропористые стекла или силикагель. Якорной группой служит карбоксильная группа, отделенная от пов-стн Н. спец, ножкой , напр, [c.504]

Под стратегией понимают последовательность связывания аминокислотных компонентов в пептид, причем следует различать постепенное наращивание и фрагментную конденсацию. Получение полипептидов путем постепенного наращивания цепи трудноосуществимо при больших размерах целевой молекулы. В этих случаях большое значение приобретает разделение объекта синтеза на отдельные фрагменты с последующим соединением их в полипептид. Оптимальный выбор комбинации защитных групп и применение подходящего метода конденсации для каждого отрезка составляет предмет тактики пептидного синтеза. [c.98]

В тех случаях, когда образование гидразида не может быть достигнуто обычным путем, соответствующий азид получают реакцией хлорангидрида N-защищенной аминокислоты с азидом натрия или дициклогексиламмония [724, 2496]. Однако значительно большие преимущества дает использование замещенных гидразинов, содержащих в качестве заместителя N-защитную группировку. N -Замещенные гидразиды представляют собой специфическую защитную группу для карбоксильной функции, наличие которой позволяет осуществлять дальнейшее построение пептидной цепи с N-конца. С другой стороны, после селективного отщепления N -защитной группировки, блокирующей гидразидную функцию, последнюю можно использовать для наращивания пептидной цепи с С-конца с помощью азидного метода. Этот прием нашел применение в синтезе ряда природных пептидов [292, 890, 2038, 2236]. [c.123]

Другой подход к синтезу полипептидов, обладаюидий рядом преимуществ по сравнению с описанным выше, состоит в последовательном наращивании пептидной цепи, начиная с Сд<он-цевой аминокислоты, путем постепенного присоединения к иоследней Ы-защин еиных аминокислот. В этом случае наиболее широкое применение находит метод п-нитрофениловых эфиров, хотя хорошие результаты получаются и при использовании карбодиимидного метода, а в тех случаях, когда п-нитрофениловый эфир какой-либо Ы-защииденной аминокислоты не может быть получен, применяется азидный метод. Обычно карбоксильный компонент берется в избытке, поскольку его легче отделить от продукта реакции, чем разделить два пептида с практически одинаковой длиной цепи. Следует подчеркнуть, что до сих пор при таком методе построения пептидной цепи еще ни разу не наблюдалось рацемизации кроме того, в этом случае продукты реакции гораздо чаще могут быть получены в кристаллическом состоянии, чем при синтезе пептидов из отдельных блоков, т. е. по первому пути. В то же время некоторые исследователи считают, что существенным недостатком второго подхода к синтезу пептидов является большая затрата времени. [c.27]

Gltf-Брадикинин. Синтез Gly -брадикинина (рис. 30) опубликован Бодански и сотр. [281]. План синтеза состоял в наращивании пептидной цепи путем присоединения N-защищенных дипептидов к H-Gly-Phe-Arg(N02)-0Me НВг (С 7—9). Конденсацию С 7—9 bo-Phe-Ser-OH (С 5—6), приводящую к образованию bo-Phe-Ser-Gly-Phe-Arg(N02)-OMe (D 5—9), проводили с помощью З -сульфоната N-этил-5-фeнилизoк aзoлия. В ходе декарбобензоксилировання обработкой бромистым водородом в ледяной уксусной кислоте (2,5 час), применявшегося на следующей стадии синтеза, гидроксильная группа остатка серина подвергалась ацетилированию (Е 5—9). В других случаях создание пептидной связи осуществляли методом /г-нитрофениловых эфиров. Свободный нонапептид очищали с помощью хроматографии на карбоксиметилцеллюлозе. Активность Gly -брадикинина составляет 1/100 активности брадикинина при испытаниях на изолированной матке крысы. [c.136]

Фрагмент (I 6—13). синтезировали путем последовательного наращивания пептидной цепи. Присоединение дикарбобензокси-L-тирозина и карбобензокси-L-аланина к метиловому эфиру глицина осуществляли карбодиимидным методом, а дальнейшее построение цепи проводили с помощью а-трихлорфенилового Y-трег-бутилового эфира карбобензокси-ь-глутаминовой кислоты (пять последовательных реакций). Для удаления карбобензоксигруппы использовали каталитический гидрогенолиз. [c.224]

Эфир пентапептида (Н 14—18) получали ступенчатым наращиванием пептидной цепи карбобензоксиаминокислотами (карбодиимидным методом), иа-чиная с диметилового эфира аспарагиновой кислоты карбобензоксигруппу,удаляли гидрированием. Лишь в случае дипептида (А 17—18) декарбобензоксилирование осуществляли действием бромистого водорода в ледяной уксусной кислоте (2,5 час). Е 15—18 и G 14—18 очищали противоточным распределением (78 и 48 переносов соответственно). [c.245]

Тетрапептид (Е 11 —14) получали ступенчатым наращиванием пептидной цепи с N-конца карбодиимидным методом. Омыление его и дальнейшая конденсация кристаллической кислоты (F 11—14) с F 15—19 (карбодиимидным методом или методом смешанных ангидридов) привели к полностью защищенному нонапептиду (G 11—19), представляющему собой оранжевый порошок, который легко очищается хроматографией на колонке /г-фенилазокарбобензоксигруппа и обе нитрогруппы удаляли каталитическим гидрированием. Полученный продукт (Н 11 —19) был идентичен соединению, образовавшемуся в результате детритилирования и каталитического гидрирования эфира тритилнонапептида, соответствующего G П —19. После гидролиза Н 11 —19 и инкубации с L-аминооксидазой смесь не содержала лизина [1825]. [c.282]

Для всех описанных выше синтезов окситоцина характерно построение нонапептидной последовательности путем конденсации пептидных фрагментов. Бодански и дю Винье предложили новый путь синтеза, предусматривающий ступенчатое наращивание пептидной цепи карбобензоксиаминокислотами методом п-нитрофениловых эфиров (рис. 80). Индивидуальные пол- [c.372]

Бодански и сотр. [2776] получили ацетат Огп -вазопрессина, [а] —28° (с = 2 1 н. уксусная кислота). При этом они использовали избирательное дефталилирование bo- ys(Bzl)-Tyr-Phe-Glu (NH2)-Asp (NHa) - ys(Bzl)-Рго-Огп (Phth)-Gly-NHa, удаление оставшихся защитных групп натрием в жидком аммиаке и окисление кислородом воздуха защищенный нонапептид синтезировали последовательным наращиванием пептидной цепи методом п-нитрофениловых эфиров. Действие полученного аналога на изолированную матку крысы соответствует активности 14 М. Е./жг прессорная активность равна 360 М. Е./жг. [c.457]

При синтезе пептидов, содержащих более двух аминокислотных остатков, у полученного защищённого дипептида необходимо освободить только N-концевую аминогруппу, удалив защиту лишь с М-конца дипептида. Таким образом, подбор за-ищтных групп должен соответствовать возможности удаления одной (временной) защитной гр>т1пы при полном сохранении всех остальных (постоянных) защитных групп. Планирование пептидного синтеза, включающее в себя подбор защитных групп, выбор метода конденсации и способа деблокирования, называется тактикой пептидного синтеза. Тактические задачи могут быть решены только после того, как разработана стратегия пептидного синтеза, т.е. намечены основные подходы к построению пептидной цепи. На современном этапе развития пептидного синтеза существуют две стратегии поогедо-вательное наращивание цепи, начиная с С-концевой аминокислоты, и фрагментная конденсация - получение коротких отрез- [c.64]

Ступенчатое наращивание пептида с применением второй фазы впервые проведено Меррифилдом на примере твердофазного пептидного синтеза (разд. 2.2.7.1). При реакциях в гетерогенной фазе вероятность встречи реагирующих партнеров гораздо ниже, чем в гомогенном растворе. Для получения высокой степени превращения требуется значительный избыток ацилирующего средства. Преимуществом этой стратегии является простота технических операций и связанная с этим возможность автоматизации. Трудные операции очистки промежуточных веществ традиционного синтеза заменяются простыми процессами фильтрования и промывания. Однако на этом пути однородный продукт синтеза получается только в том случае, если каждая реакция в гетерогенной фазе протекает практически количественно. Несмотря на большие избытки карбоксикомпонента, использование которых чревато опасностью N-ацилирования пептидной связи, полное превращение на каждой стадии в настоящее время недостижимо. На практике средний выход на одну стадию 95—99%, что недостаточно для синтеза длинных пептидов или белков. Средние выходы на одну стадию и полные выходы (в зависимости от длины цепи) приведены в табл. 2-10. Как показывает практика, короткоцепочечные пептиды или их аналоги длиной до -15 аминокислотных остатков могут быть получены твердофазным методом. Трудности при синтезе небольших белков наглядно демонстрируются данными табл. 2-10. Еще хуже сказывается накопление не- [c.214]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология