Идентификация ДНФ-аминокислот тонкослойной хроматографией

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНФ-АМИНОКИСЛОТ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ [c.270]

Идентификация ДНС-аминокислот методом тонкослойной хроматографии на пластинках, покрытых силикагелем [c.151]

Идентификация Д[ С-аминокислот методом тонкослойной хроматографии на полиамидных пластинах [c.152]

Все ДНС-аминокислоты могут быть определены с большой степенью достоверности тонкослойной хроматографией на полиамидных пластинках. Идентификация обеспечивается тем, что полиамидные пластинки устроены по принципу сэндвича , т. е. обе стороны поддерживающей пластинки покрыты тонким слоем полиамида. На одной стороне пластинки хроматографируют изучаемую ДНС-аминокислоту, а на другую наносят контрольную смесь аминокислот. Пользуясь прозрачностью пластинки, после хроматографии можно определить неизвестную ДНС-аминокислоту. [c.279]

Для идентификации аминокислот очень удобны тонкослойная хроматография и хроматография на бумаге (см. литературу в гл. 10 и описание техники в гл. 7). [c.281]

Адсорбционная тонкослойная хроматография применима практически для всех органических соединений. Хроматография на бумаге широко используется для идентификации и разделения многих классов полярных природных соединений и в первую очередь аминокислот и углеводов. Пример хроматографического разделения аминокислот приведен в задании 20.2. [c.488]

Цель работы познакомиться с разделением аминокислот методом тонкослойной хроматографии с последующей идентификацией их с помощью проявителя. [c.141]

Хроматография производных аминокислот получила интенсивное развитие в связи с разработкой методов определения первичной структуры белков. Вероятно, трудно найти в органической химии и биохимии более удачный пример столь тесной взаимосвязи развития представлений о структуре и функциях большого класса веществ, каким являются белки, с хроматографическими методами анализа. Основное внимание было направлено на разработку методов определения N-концевых остатков аминокислот в белках, причем в идентификации соответствующих производных большое значение имели тонкослойная (ТСХ) и бумажная хроматография (БХ) (см. обзоры [1, 2]). Газожидкостная и жидкостная колоночная хроматографии находят в этой области ограниченное применение, однако интерес к последнему методу постепенно растет. Интерес к жидкостной хроматографий вызван вполне определенными причинами. Во-первых, постоянно появляются новые методы избирательной модификации остатков аминокислот в белках, а идентификация производных аминокислот требует развития хроматографических методов. Во-вторых, исследованию подвергают все более труднодоступные белки, что в свою очередь вызывает необходимость создания надежных методов количественного анализа. Интерес к колоночной хроматографии возрастает также в связи с выделением и получением необычных аминокислот, а также в связи с необходимостью предотвращения ошибок при определении аминокислотной последовательности. Понятия современный и классический метод используют здесь условно, поскольку новые методики обычно создают на базе стандартной аппаратуры примером может служить автоматический анализ ДНФ- и ДНС-аминокис-лот [3, 4]. Насколько известно, до сих пор не пытались использовать скоростную хроматографию высокого разрешения для разделения производных аминокислот, хотя некоторые соединения, например ДНС-аминокислоты, являются для этого метода довольно удобным объектом. Производные аминокислот использовали в структурном анализе белков крайне неравномерно. По-видимому, всеобщее увлечение ДНФ-аминокислотами проходит окончательно, уступая место повышенному интересу [c.360]

Для проведения последовательной деградации по Эдману часто используют автоматический прибор. При благоприятной ситуации с его помощью может быть пройдено от 40 до 50 шагов . После каждого шага отщепленный фенилтиогидантоин должен быть идентифицирован с использованием тонкослойной или газожидкостной хроматографии или подвергнут кислотному гидролизу с последующей идентификацией регенерированной аминокислоты. [c.175]

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНС-АМИНОКИСЛОТ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕИ НА ПОЛИАМИДНЫХ ПЛАСТИНКАХ [18] [c.279]

Тонкослойная хроматография на силикагеле оказалась весьма полезной для идентификации фенйлтиогидантоиновых производных аминокислот (ФТГ-аминокислот). Для предварительного определения этих соединений Бреннер и др. [4] рекомендовали двумерное разделение сначала в смеси хлороформ—метанол (9 1) и затем в смеси хлороформ — муравьиная кислота (100 5). Чтобы идентифицировать ФТГ-аминокислоты, на той же хроматографической пластинке фракционируют стандартные растворы известных аминокислот. [c.236]

Очень чувствительным методом идентификации аминокислот является тонкослойная хроматография их диметиламинонафталин-5-сульфонильных производных (гл. ХП1). Для фракционирования их на силикагеле можно, например, воспользоваться следующими системами растворителей хлороформ — бензиловый спирт — уксусная кислота (100 30 3) бензол — пиридин — уксусная кислота (80 20 2) 2-бутанон — пропионовая кислота — вода (15 5 6). [c.237]

Тонкослойная хроматография успешно применяется для идентификации ДНФ-аминокислот. По сравнению с хроматографией на бумаге этот метод более чувствителен и требует меньших затрат времени. Чаще всего смеси разделяют в силикагеле в следующих системах растворителей [2] а) толуол — пиридин — этиленхлор-гидрин—аммиак (0,8 М) (100 30 60 60) эта система гетероген-на, верхняя фаза используется для хроматографии, нижняя — для уравновешивания адсорбента б) хлороформ—бензиловый спирт— уксусная кислота (70 30 3) в) бензол — пиридин — уксусная кислота (80 20 2) г) хлороформ—метанол—уксусная кислота (95 5 1). Для идентификации достаточно примерно 0,2—0,5 мкг ДНФ-аминокислоты. Распределение ДНФ-аминокислот при двумерной хроматографии в различных системах растворителей показано на фиг. 61. [c.270]

Б последнее время получил широкое распространение метод идентификации К-концевых аминокислот в виде 1-деметилами-но-5-сульфонафтильных (ДНС) производных. Эти метки люминес-цируют под воздействием излучения X 365 ммк, что позволяет детектировать пятна ДНС-аминокислот с чувствительностью 10 моль. Имеется несколько работ, посвященных тонкослойной хроматографии ДНС-аминокислот. С наибольшими деталями метод описан в работе [28]. [c.312]

Открытие в 1944 г. метода бумажной хроматографии (БХ), чрезвычайно расширившего возможности обнаружения, идентификации и разделения малых количеств веществ, означало подлинную революцию в химии, особенно в биохимии. Этот метод был открыт Консденом, Гордоном, Мартином и Синджем, которые разработали и применили его для анализа белковых гидролизатов, т. е. смесей аминокислот. Последние два из перечисленных авторов были удостоены Нобелевской премии за открытие распределительной хроматографии. В последующие 10 лет метод БХ был значительно усовершенствован и получил такое распространение, что нельзя было представить без него работу какой-либо химической или биохимической лаборатории. Однако с 1952 г. БХ начала постепенно вытеснять ее младшая сестра — тонкослойная хроматография (ТСХ), которая оказалась эффективнее благодаря возможности более быстрого проведения эксперимента, большей пригодности для препаративных работ и более широким возможностям обнаружения (включая применение коррозионно-активных реагентов). В настоящее время ТСХ используется чаще, чем БХ, в примерно 5 и более раз. [c.58]

Для проявления и идентификации аминокислот, производных аминокислот и пептидов хроматограммы опрыскивают специальными реактивами. Опрыскивание реактивом Сакагучи нельзя применять при ТСХ на пластинках с силикагелем, остальные реактивы можно использовать как в случае бумажной, так и тонкослойной хроматографии. (Подробнее о реактивах для опрыскивания см. работы [96, 123, 126, 146].) Опрыскивание некоторыми реактивами можно проводить последовательно и, таким образом, получать максимальную информацию из одного опыта (см. работу [24]). Величины проявляемых пятен должны соответствовать обшепринятым для хроматографии и электрофореза. Если применять слишком много проявляющего реактива, особенно в тех случаях, когда нанесенные вещества в нем растворимы, то пятна на хроматограммах и фореграммах будут получаться расплывчатыми. При опрыскивании хроматограмм, содержащих аминокислоты и пептиды, водными растворами последние следует тщательно распылять и наносить в весьма умеренных количествах. Использование того или иного проявляющего реактива с погружением в него допустимо лишь в том случае, если [c.142]

Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ), использованный Эдманом и Бэггом и описанный в их классической работе, посвященной автоматическому секвенатору [2], наиболее прост в экспериментальном отношении, не требует дорогого оборудования, но характеризуется невысокой чувствительностью (- 1 нмоль), тех удобна как для ручного, так и для автоматического определения последовательности однако это скорее качественный, чем количественный метод. Как бесспорное достоинство метода надо отметить возможность одновременного анализа нескольких образцов. Метод можно сделать полуколичественным, элюируя ФТГ с хроматографической пластинки, но обычно это не делается. При идентификации ФТГ-Arg и ФТГ-Н з ТСХ следует дополнять другими методами — ВЭЖХ тех же ФТГ-аминокислот, или аминокислотным анализом свободных аминокислот, полученных при обратном гидролизе ФТГ-аминокислот. Следует проводить обратный гидролиз при анализе только коротких пептидов и высокоэффективном определении последовательности аминокислот средних пептидов на секвенаторе с использованием наномольных количеств образца. Для анализа ФТГ-производных аминокислот с середины 60-х годов стала использоваться газожидкостная хроматография (ГЖХ). Этим методом можно быстро и количественно определить большинство, но не все с "ГГ-производные аминокислот. В неспособности ГЖХ обеспечить однозначную идентификацию ФТГ-производных всех 20 аминокислот заклю- [c.405]