Тонкослойная хроматография аминокислот

А. ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ АМИНОКИСЛОТ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ [c.234]

Белковые соединения. Сравнительно с тонкослойной хроматографией аминокислот хроматография белковых соединений в тонком слое развита пока недостаточно. [c.117]

Тонкослойная хроматография аминокислот. ...... [c.273]

Тонкослойная хроматография аминокислот [c.305]

Распределительная тонкослойная хроматография аминокислот 119] проводится на силикагеле с использованием шести систем растворителей. Величины Rf важнейших аминокислот в этих [c.305]

Цель занятия изучить процессы обмена некоторых аминокислот в норме и при патологии. Изучить реакции аминокислот по радикалу (метилирование, трансметилирование, гидроксилирование). Освоить методы качественного определения фенилпировиноградной кислоты и диагностики фенилкетонурии методом тонкослойной хроматографии аминокислот сыворотки крови. [c.272]

Работа 92. Диагностика фенилкетонурии методом тонкослойной хроматографии аминокислот сыворотки крови (УИРС) [c.284]

РИС. 8.3. Двумерная тонкослойная хроматография аминокислот на пластинках с целлюлозой. Состав растворителей указан в тексте. [c.273]

Разделение аминокислот и пептидов с помощью ионообменной хроматографии может быть осуществлено двумя способами путем хроматографии на колонках и методом тонкослойной хроматографии. [c.133]

При использовании метода тонкослойной хроматографии разделение проводят на пластинках, покрытых силикагелем. Их можно приготовить в лаборатории (на поверхность стекла тонким слоем наносят суспензию силикагеля в воде) (с. 72). Разделение ДНФ-производных аминокислот можно проводить также на готовых стандартных пластинках, например Силуфол . Размеры камеры определяются размером пластинки. [c.147]

Идентификация ДНС-аминокислот методом тонкослойной хроматографии на пластинках, покрытых силикагелем [c.151]

Идентификация Д[ С-аминокислот методом тонкослойной хроматографии на полиамидных пластинах [c.152]

Радиоизотопный анализ производных жирных и желчной кислот, приготовленных с использованием и разделенных методом хроматографии на бумаге, осуществляли путем непосредственного измерения радиоактивности пятен хроматограммы [91, 94, 95] или путем приготовления из бумажной хроматограммы авторадиограммы и последующего измерения интенсивности хроматографических зон с помощью записывающего микрофотометра [92, 93]. Использовали и жидкостные сцинтилляционные счетчики в комбинации с жидкостной колоночной хроматографией [96]. При использовании жидкостного сцинтилляционного счетчика в комбинации с тонкослойной хроматографией чувствительность метода, в котором применяется для определения динитрофенильных производных аминокислот [97], возрастала в сто раз, достигая 1 пМ 98] при воспроизводимости результатов d=6%. Анализируя аналогичным методом смеси кислот известного состава, можно идентифицировать анализируемые кислоты и оценить их количества. Определенным преимуществом диазометана является отсутствие пространственных эффектов при проведении вышеуказанных реакций. [c.154]

Полный кислотный гидролиз ДИФ-пептида приводит к желтому ДНФ-производному Л -концевого остатка вместе со свободными аминокислотами и аминокислотами, меченными только в боковую цепь, такими продуктами как е-ДНФ-лизин и 0-ДНФ-тирозин. За исключением а-ДНФ-аргинина, сс-ДНФ- (или бис-ДИФ)производные Л -концевого остатка можно экстрагировать из подкисленного водного раствора подходящим органическим растворителем, например этилацетатом, и идентифицировать с помощью тонкослойной хроматографии. [c.266]

Методическое руководство по биохимии и иммунохимии белка. Рассмотрены теоретические основы методов и современная аппаратура для гель-фильтрации, бумажной, ионнообменной н тонкослойной хроматографии, в том числе методы количественного аминокислотного анализа с помощью автоматических анализаторов. Подробно описан анализ производных аминокислот методом газовой хроматографии. Книга хорошо иллюстрирована и снабжена подробной библиографией. [c.4]

Силикагель хорошо зарекомендовал себя в качестве носителя для тонкослойной хроматографии ДНФ-аминокислот. [c.235]

Следовательно, если, например при хроматографии в тонком слое, основные и нейтральные аминокислоты до Вал имеют необычно высокие значения и вместе с тем разделение в верхней части пластинки оказалось неполным, можно сделать вывод, что pH буферного раствора выше 3,3. К сожалению, большинство приборов для измерения pH недостаточно надежны и точны, поэтому приходится поступать так, как это принято при фракционировании в анализаторе, где pH буферного раствора проверяют по месту цистина . В тонкослойной хроматографии pH также проверяют по относительной подвижности компонентов. В оптимальном варианте цистин располагается между Ала и Вал. [c.256]

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНФ-АМИНОКИСЛОТ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ [c.270]

ДНС-аминокислоты могут быть идентифицированы с помощью электрофореза на бумаге или в тонком слое, а также с помощью тонкослойной хроматографии. [c.275]

Все ДНС-аминокислоты могут быть определены с большой степенью достоверности тонкослойной хроматографией на полиамидных пластинках. Идентификация обеспечивается тем, что полиамидные пластинки устроены по принципу сэндвича , т. е. обе стороны поддерживающей пластинки покрыты тонким слоем полиамида. На одной стороне пластинки хроматографируют изучаемую ДНС-аминокислоту, а на другую наносят контрольную смесь аминокислот. Пользуясь прозрачностью пластинки, после хроматографии можно определить неизвестную ДНС-аминокислоту. [c.279]

При фенилкетонурии содержание фенилаланина в крови превышает нормальное в 30 раз и более (норма — 85-115 мкмоль/л). Такое количество фенилаланина можно уловить методом тонкослойной хроматографии аминокислот на пластинках РЬсюп 50-Х8. [c.284]

Вопрос о природе связи аминокислотных производных с другими нефтяными компонентами (порфиринами, асфальтенами) пока не решен. Ряд экспериментальных результатов косвенно свидетельствует о возможности их взаимосвязывания или ассоциирования. Известно, что порфррины не удается отделить от аминокислот с помощью электрофореза [761]. После гидролиза заметно меняются характеристики порфириновых компонентов концентрата .несколько увеличивается удельный объем их удерживания при г ель-хроматографии [390], меняются подвижность при тонкослойной хроматографии и И К спектры. Однако убедительных прямых подтверждений наличия химической связи между аминокислотами (пептидными) и порфириновыми молекулами не получено. [c.135]

Для разделения аминокислот (гидролизата белка) методом тонкослойной хроматографии широкое применение находят пластинки, покрытые тонким слоем ионообменной смолы полистирольной природы с сульфокислотными группировками (типа Дауэкс 50X8 ) или ионообменной целлюлозой. Такие пластинки выпускаются промышленностью, например Фиксион 50x8 (Венгрия), или могут быть приготовлены в лаборатории. В этих пластинках катионообменная смола находится в Na-форме. Пластинки стабильны в водных и органических растворителях, инертны по отношению к окислителям и восстановителям, но подвергаются воздействию щелочей и концентрированных кислот. [c.133]

Исследуемое вещество (пептид, аминокислота, аминоуглевод) вводят в реакцию с различными количествами ДНФБ (например, на 1 эквивалент исследуемого соединения берут 1/4, 1/2, 1 и 2 эквивалента ДНФБ). В результате реакции образуются продукты различной степени замещения по аминогруппам, которые легко могут быть разделены методами электрофореза и бумажной или тонкослойной хроматографии, По числу ДНФ-производных судят о числе свободных ННг-групп в исследуемом соединении. [c.147]

Реактивы для проведения реакции дансилирования аминокислот (с. 149) или реактивы для определения аминокислот с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах Фиксион (с. 133). [c.155]

В полученных образцах определяют свободные аминокислоты. При тонкослойной хроматографии на пластинах Фиксион (с. 133) требуется не менее 10—30 нмоль аминокислот, для определения с помощью аминокислотного анализатора —2—5 нмоль аминокислот. Можно предварительно провести реакцию дансилирования (с. 148), а затем идентифицировать модифицированные аминокислоты с помощью тонкослойной хроматографии (в этом случае надо иметь 0,5—5 нмоль дансилированных аминокислот). При количественном определении аминокислот можно исследовать зависимость освобождения их от времени инкубации образца с карбоксипептидазой. [c.156]

Реактивы для определения аминокислот с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках Фиксион (с. 133). [c.157]

Анализ. Обычно анализ а-А. основан на взаимод. с нин-гидрином, в результате к-рого А. расщепляется до альдегида, СО2 и NH3, а NH3 образует с нингидрином фиолетовый краситель. Для количеств, определения измеряют объем выделившегося Oj или, чаще, фотометрируют образующийся краситель. Последний метод используется в автоматич. хроматографах, позволяющих разделять на сульфокатионитах и количественно анализировать сложные смеси аминокислот и пептидов. Еще более чувствителен флуоресцентный анализ продуктов реакции А. с о-фта-левым диальдегидом. Быстро развивается лигандообменный хроматографический анализ А. и пептидов на си-ликагельных сорбентах в присутствии ионов меди. Бумажная и тонкослойная хроматография чаще используются для качественного анализа. Измерение объема N3, выделяющегося при дезаминировании А. азотистой к-той, а также титрование А. щелочью в избытке формалина (методы Ван Слайка и Сёренсена) сохранили лишь историческое значение. [c.138]

Методом тонкослойной хроматографии (ТХ) можно быстро разделить аминокислоты метод требует несложного оборудования и малых исходных количеств. Для изготовления слоев толщиной 0,1 — 0,3 мм применяют стандартные носители, такие, как сипикагепь, оксид алюминия, поро-щок целлюлозы, ионообменники на основе целлюлозы, попиамиды, а также полиакриламидный и декстрановый гепи. В зависимости от материала носителя ТХ бывает адсорбционной (например, разделение на силикагеле и оксиде алюминия) или распределительной (например, разделение на слоях целлюлозы). В качестве подвижной фазы применяют те же системы, что и для бумажной хроматографии. [c.58]

Значительно чувствительнее дансильный метоО (5-диметиламино-нафтилсульфонильный метод) [98], в котором N-концевая аминокислота идентифицируется после тонкослойной хроматографии в виде интенсивно флуоресцирующего желтым светом пятна дансильного производного. Предел обнаоужения 10 [c.367]

Высокая чувствительность метода обратного изотопного разбавления с радиореагентом, а также селективность, которую обеспечивает применение индикаторного изотопа, позволяют определять микроколичества смесей первичных и вторичных аминов. Эти методы широко применяли в определениях различных аминокислот в биологических образцах [85—88]. В работе [86], в частности, описано использование этих методов для оценки содержания одиннадцати таких соединений в 1 мг белка. Метод с пипсилхлоридом применялся для анализа гистамина, причем в этом анализе проводилось четыре цикла перекристаллизации соответствующего производного с целью его очистки до получения постоянного значения удельной радиоактивности. После проведения этого анализа было предложено [89] применять данный метод для определения любого амина, который дает кристаллический замещенный д-иод-бензолсульфамид. Этим же методом оценивались микрограммные количества 2,4-диоксипиримидина и его 5-метильного производного [90]. Для разделения пипсильных производных в дополнение к бумажной хроматографии применялись жидкофазная колоночная хроматография [91] и тонкослойная хроматография [92]. Хроматографию на бумаге применяли также для оценки радиохимической чистоты реагента [93]. [c.310]

СКОЛЬКИХ лет служила материалом для упаковки колонок, и на ней впервые удалось почти полностью разделить энантиомеры. (В 1944 г. было опубликовано сообщение о том, что основание Тре-гера разделено на колонке с лактозой длиной 0,9 м [2].) Разделяющая способность полисахаридов, в частности целлюлозы, была впервые обнаружена при попытке разделить рацемические аминокислоты методом бумажной хроматографии [3—5]. При этом выяснилось, что эти соединения в некоторых случаях дают два пятна на бумажной хроматограмме. Далглищ развил свою теорию трехточечного взаимодействия в 1952 г. на базе данных о бумажной хроматографии рацемических аминокислот [6]. Известны и другие ранние работы по непосредственному разделению энантиомеров аминокислот посредством бумажной хроматографии [7] и тонкослойной хроматографии на целлюлозе (ТСХ) [8]. Все это способствовало использованию целлюлозы и ее производных, а также крахмала и циклодекстринов в хиральной ЖХ. В настоящее время в качестве потенциальных хиральных сорбентов изучается ряд природных полисахаридов. [c.108]

ДНФ-группу вытеснила Л -(1-диметиламинонафтил-5-сульфо-нильная) или дансильная группа, которую можно вводить при реакции пептида или белка с 1-диметиламинонафтил-5-сульфонил-хлоридом (8) при pH 8 схема (13) . Дансильные производные аминокислот и пептидов сильно флуоресцируют их можно отделить и идентифицировать с помощью тонкослойной хроматографии, например на е-поликапролактаме [16]. Обычная чувствительность (примерно 100 пикомоль) может быть повышена до 25 фемтомоль при использовании [ Н]-меченного дансилхлорида с последующей авторадиографией [17]. [c.266]

Количественное определение а-аминокислот возможно титрованием по Сёренсену или же взаимодействием с азотистой кислотой по Ван-Слайку. Различные а-аминокислоты могут быть разделены методами бумажной, тонкослойной хроматографии, колоночной хроматографии на ионообменных смолах, гель-фильтрации или ионофореза. [c.503]

Для фракционирования аминокислот применяется хроматография в тонком слое силикагеля или целлюлозы. В отношении отдельных аминокислот для хроматографии на силикагеле характерна большая чувствительность, чем для хроматографии на целлюлозе, однако в тонком слое целлюлозы разделение лучше. В связи с этим ниже приводится метод Аркса и Неера [2] разделения аминокислот тонкослойной хроматографией на целлюлозе. [c.234]

Тонкослойная хроматография на силикагеле оказалась весьма полезной для идентификации фенйлтиогидантоиновых производных аминокислот (ФТГ-аминокислот). Для предварительного определения этих соединений Бреннер и др. [4] рекомендовали двумерное разделение сначала в смеси хлороформ—метанол (9 1) и затем в смеси хлороформ — муравьиная кислота (100 5). Чтобы идентифицировать ФТГ-аминокислоты, на той же хроматографической пластинке фракционируют стандартные растворы известных аминокислот. [c.236]

Очень чувствительным методом идентификации аминокислот является тонкослойная хроматография их диметиламинонафталин-5-сульфонильных производных (гл. ХП1). Для фракционирования их на силикагеле можно, например, воспользоваться следующими системами растворителей хлороформ — бензиловый спирт — уксусная кислота (100 30 3) бензол — пиридин — уксусная кислота (80 20 2) 2-бутанон — пропионовая кислота — вода (15 5 6). [c.237]

Б. При хроматографии, высушивании, нанесении пробы, проявлении, оценке разделения, документации и т. д. можно применять ранее разработанные хорошо известные способы тонкослойной хроматографии. Например, для разделения основных аминокислот в аминокислотном анализаторе применяют буфер, имеющий концентрацию Ыа" 0,35 М и pH 5,23 этот же буфер пригоден для разделения основных аминокислот на пластинке Фиксион 50 х 8 . При этом, кроме основных, хорошо разделяются и идентифицируются ароматические аминокислоты Тир и Фен. [c.245]

Тонкослойная хроматография успешно применяется для идентификации ДНФ-аминокислот. По сравнению с хроматографией на бумаге этот метод более чувствителен и требует меньших затрат времени. Чаще всего смеси разделяют в силикагеле в следующих системах растворителей [2] а) толуол — пиридин — этиленхлор-гидрин—аммиак (0,8 М) (100 30 60 60) эта система гетероген-на, верхняя фаза используется для хроматографии, нижняя — для уравновешивания адсорбента б) хлороформ—бензиловый спирт— уксусная кислота (70 30 3) в) бензол — пиридин — уксусная кислота (80 20 2) г) хлороформ—метанол—уксусная кислота (95 5 1). Для идентификации достаточно примерно 0,2—0,5 мкг ДНФ-аминокислоты. Распределение ДНФ-аминокислот при двумерной хроматографии в различных системах растворителей показано на фиг. 61. [c.270]

Одно ИЗ преимуществ дансилирования по сравнению с динитро-фенилированием состоит в том, что после кислотного гидролиза ДНС-белка аминокислоты могут быть идентифицированы электрофоретически или хроматографически сразу после расщепления белка без экстракции гидролизата. Другим преимуществом является очень высокая чувствительность. Максимум возбуждения флуоресценции ДНС-аминокислот находится около 550 нм, их флуоресценция настолько интенсивна, что с помощью электрофореза на бумаге легко можно определить 1—5, а с помощью тонкослойной хроматографии 0,2—1,0 нмоль ДНС-производного. [c.275]

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДНС-АМИНОКИСЛОТ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕИ НА ПОЛИАМИДНЫХ ПЛАСТИНКАХ [18] [c.279]