Одноколоночные методы

Выбор аналитического метода. Аминокислоты можно определять с помощью двух- или одноколоночного метода. В первом случае основные аминокислоты анализируют на отдельной колонке с высотой столбика смолы 6—8 см, а кислые и нейтральные аминокислоты— на другой, более длинной колонке высотой 50 см. При этом для определения основных аминокислот требуется около 1 ч. [c.173]

Очень важно, чтобы растворы были свободны от аммиака. Если растворы, особенно А, содержат аммиак, то при одноколоночном методе на хроматограмме можно наблюдать так называемое аммиачное плато , которое начинается перед пиком аммиака и кончается после пика гистидина. Чем выше это плато, тем меньше чувствительность прибора в тех пределах, где выходят пики аммиака, лизина и гистидина. Чтобы избежать высокого фона, следует применять реактивы высокой чистоты и деионизованную воду, а также запретить курение в комнате, где стоит прибор. [c.176]

При определении кислых и нейтральных аминокислот двухколоночным методом прибору задается такая же программа, как и при одноколоночном методе, но анализ останавливают после того, как выходит пик фенилаланина. [c.184]

Цитратные (Ма, буферные растворы (одноколоночный метод, градиентная элю-ция) [c.151]

Преимуществом одноколоночного метода является и то, что для анализа используется только одна проба. Основные недостатки одноколоночного метода связаны с необходимостью приготовления градиентных растворов и последующей очистки градиентного устройства, с необходимостью удаления примесного аммиака, а также с постоянным изменением уровня фоновой линии в ходе анализа. [c.17]

Сравнительно недавно синтезирована смола типа UR-40, которая позволяет определять кислые и нейтральные аминокислоты по методике анализа физиологических жидкостей за 170 мин на колонке высотой 26 см. Основные аминокислоты физиологических жидкостей также могут быть определены на этой же колонке за 210 мин. Одноколоночный метод анализа белковых гидролизатов на этой смоле описан в разд. 1.6. Использование более коротких колонок и улучшение разделения пиков аминокислот стало возможным благодаря устранению специфических перемешивающих узлов (таких, как реактор, подводящие трубки, краны и кюветы), имеющихся в большинстве приборов. [c.36]

Одноколоночный метод анализа, смола JR-30. При постоянной температуре колонки, концентрации цитрат-ионов и ионов натрия и скорости течения буфера варьируют величину pH первого буфера. Ее увеличение с 3,28 до 3,31 ухудшает разделение треонина и серина. Цистин элюируется быстрее, но при этом ухудшается разделение глицина и аланина. Увеличение pH второго буфера с 4,30 до 4,50 при прочих неизменных условиях анализа ухудшает разделение как метионина и изолейцина, так и изолейцина и лейцина. Увеличение pH третьего буфера позволяет элюировать гистидин быстрее. [c.41]

Одноколоночный метод, смола иЯ-ЗО. Поддерживая постоянными концентрацию цитрат-ионов, температуру колонки и скорость течения буфера, варьируют концентрацию ионов натрия в третьем буфере. При уменьшении нормальности буфера с 1,4 до [c.43]

Одноколоночный метод, смола иЯ-40. При неизменных температуре колонки, концентрации цитрат-ионов и скорости течения буфера уменьшение концентрации ионов натрия приводит к задержке выхода большинства аминокислот. При уменьшении нормальности третьего буфера с 1,8 до 1,4 не только задерживается элюирование основных аминокислот, но и значительно понижается фоновая линия, обычно наблюдаемая при большей концентрации буфера. [c.43]

Одноколоночный метод, смола 11Н-40. При сохранении постоянными температуры колонки (48°С), концентрации ионов натрия (0,20 н.), величины pH первого буфера (3,545) и скорости течения буфера (60 мл/ч) увеличение концентрации цитрата с 0,066 до 0,200 М не сказывается на разделении треонина и серина. Значительно улучшается разделение глицина и аланина, а цистин элюируется из колонки быстрее. [c.45]

Одноколоночный метод, смола иЯ-ЗО. Повышение температуры колонки с 52 до 55,6 °С при постоянных значениях pH буфера, его концентрации и скорости приводит в общем к увеличению скорости элюирования аминокислот. Подвижность орнитина и лизина мало меняется с температурой. Аргинин элюируется быстрее, и, кроме того, улучшается разделение пар треонин — серин и тирозин — фенилаланин. [c.46]

Одноколоночный метод Одноколоночный метод [c.56]

Для одноколоночного метода анализа всех аминокислот (кислых, нейтральных и основных) используют колонку размером 33,5-0,9 см. Колонку заполняют так, как описано в разд. [c.60]

Ускоренный одноколоночный метод анализа [c.70]

Обсуждение. По этой простой методике анализа белковых гидролизатов можно определять 23 соединения, включая обычные аминокислоты. Однако если эти аминокислоты содержатся в физиологических жидкостях, таких, как плазма крови, моча, гомогенаты тканей, то для полного анализа требуется более сложная методика. При одноколоночном методе анализа отпадает необходимость регенерации колонки и уравновешивания смолы буфером. [c.70]

Главы 6 и 7 посвящены разделению катионов соответственно двухколоночным и одноколоночным методами. В них приведены примеры разделения аминов и щелочных и щелочноземельных металлов. В гл. 7, кроме того, рассмотрены примеры разделения переходных металлов. [c.14]

Одноколоночный метод позволяет осуществить быстрое разделение анионов, причем отсутствие компенсационной колонки никогда не затрудняет анализа. На рис. 5.2 приведен пример хроматографического разделения четырех анионов на колонке с анионообменной смолой емкостью 0,007 мэкв-г-. Смесь элюировали 1,0-10- М фталатом калия при pH 7,1. Хлорид, нитрат, тиоцианат и иодид появляются после ложного пика (происхождение которого обсуждается ниже). На рис. 5.3 приведен пример быстрого разделения хлорида, нитрата и сульфата. Емкость смолы составляет 0,04 мэкв-г-, а в качестве элюента пользовались 5,0-10— М фталата калия при pH 6,2. Если провести анализ пяти образцов, содержащих постоянное количество ионов хлора и нитрата. [c.106]

Заполнение колонки при одноколоночном методе. При одноколоночном методе анализа в системе двух растворов эти растворы отличаются по концентрации Na" B 4 раза. В системе трех буферных растворов первый и третий растворы отличаются по концентрации Na" в 8 раз. Столь большие различия могут влиять на объем смолы в колонке, если заполнение ее вести обычным способом. Чем выше молярность раствора, тем меньше набухание и соответственно объем смолы в колонке. Поэтому если при заполнении колонки был использован первый низкомолярный буфер, а при последующей обработке применялся буферный раствор более высокой молярности, то объем смолы в колонке может заметно уменьшиться, что при повторном цикле пропускания растворов приведет к очень сильному спрессовыванию. Во избежание этого заполнение колонки проводят следующим образом. [c.177]

ЭМ, для анализаторов Amino hrom (ВНР) смолу можно использовать при одноколоночном методе разделения. 50. ЭМ, для фракционирования полипептидов ( пептид-смола ). 51—52. ЭМ, для отечественного аминокислотного анализатора ХЖ-1301. [c.24]

Позднее Миллер [83] описал ускоренный одноколоночный метод анализа, устраняющий такое изменение фоновой линии. Для этого в стартовый буфер добавляют цистеиновую кислоту (8,3 мкмоль/л), не анализируемую по этому методу, которая повышает фоновую линию в начале анализа до уровня, равного высоте фоновой линии в конце анализа. Одноколоночный метод анализа с использованием градиентного элюирования с добавкой 10% метанола к буферу для поддержания разделения треонина и серина был описан также Томсоном и Майлсом [84]. Полностью автоматический одноколоночный метод анализа на высокоразрешающей колонке размером 125X0,636 см с использованием последовательной дискретной смены буферов был описан Гамильтоном [85]. Высокие чувствительность и разделяющая способность были достигнуты благодаря тщательному изучению характеристик ионообменной смолы, конструкции колонки, кюветы и характеристик регистрирующего потенциометра. [c.17]

Спакман, Стейн и Мур [12] предложили метод анализа кислых и нейтральных аминокислот на колонке размером 150 X X 0,9 см при использовании двух буферов, заменяемых один на другой в середине анализа. Согласно их методу, основные аминокислоты анализируются на второй колонке с использованием третьего буфера более высокой ионной силы и pH. Для анализа основных аминокислот, обычно встречающихся в пептидных и белковых гидролизатах, применяется колонка размером 15 X Х0,9 см. По этой методике для каждой колонки требуется отдельная проба однако методика име1Ет большие возможности. Гак, если необходимы сведения только о нескольких основных аминокислотах, например, в случае анализа физиологических жидкостей, то они могут быть получены без предварительного элюирования кислых и нейтральных аминокислот, которые при одноколоночном методе элюируются в первую очередь. [c.17]

Одноколоночный метод анализа, смола иЯ-40. Поддерживая постоянными температуру колонки, концентрацию ионов натрия и цитрат-ионов и скорость течения буфера, варьируют величину pH первого буфера. Понижение pH с 3,545 до 3,515 ухудшает разделение треонина и серина (отношение высоты впадины к высоте пика равно 0,07 определение этого понятия см. в разд. 1.5.1). Цистин элюируется из колонки медленнее, но разделение серина и глутаминовой кислоты улучшается приблизительно до 0,19. Увеличение pH второго буфера с 4,25 до 4,30 при прочих неизменных условиях анализа ухудшает разделение изолейцина и лейцина. При увеличении pH третьего буфера гистидин элюируется быстрее. [c.41]

Одноколоночный метод, смола УР-ЗО. При постоянных значениях pH натрийцитратного буфера (pH 3,28) концентрации ионов натрия (0,20 н.), температуры колонки (55,6 °С) и скорости [c.44]

Одноколоночный метод, смола 11Я-40. Повышение температуры колонки с 48,0 До 50,0 °С при постоянных значениях pH буфера, его концентрации и скорости течения приводит в основном к увеличению скорости элюирования аминокислот. Разделение треонина и серина уменьшается приблизительно до 0,01 (соотношение высот впадины и пика), а серина и глутаминовой кислоты— до 0,17. Подвижность цистина мало меняется с температурой, однако разделение пар глицин — аланин и тирозин — фенилаланин улучшается соответственно до 0,14 и 0,08. Из основных аминокислот только аргинин элюируется быстрее при повышении температуры. [c.46]

Одноколоночный метод, разработанный Пизом и Моррисом [10] л Гамильтоном [П, 12], позволяет разделять все кислые, нейтральны, и основные аминокислоты на одной длинной колонке. Гамильтон [11] обратил особое внимание на разрешение и чувствительность метода. При использовании узкой колонки (0,636 х 125 см), ионообменной смолы, отобранной по размерам частиц и структуре, и фотометра с боле -длинным путем пробега светового пучка автор достиг высокой степени разрешения, что позволило ему идентифицировать 148 аминокислот с предельной чувствительностью порядка Ю" М. [c.289]

Анноны можно разделить на хроматографической колонке и регистрировать детектором электропроводности, если воспользоваться анионообменной смолой с малой емкостью и эффективным элюентом с низкой электропроводностью. Вторую колонку для компенсации фоновой проводимости элюента применять не нужно. Для большого числа анионов одноколоночный метод обладает вм-сокой чувствительностью п хорошей разделительной способностью. [c.101]

Данные табл. 5.9 подтверждают, что двухколоночная система фирмы Dionex при применении бензоатного или фталатного элюента может обеспечить в 10 раз большую чувствительность, чем одноколоночная. Элюент на основе бензойной кислоты позволяет в несколько раз повысить чувствительность одноколоночного метода. Применение для одноколоночной ионной хроматографии элюента на основе гидроксида натрия дает возможность повысить чувствительность определения, а также детектировать анионы кислот, слишком слабых для регистрации с помощью двухколоночного варианта. [c.140]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология