Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Физиологические жидкости, анализ

    Существует два основных метода, пригодных для хроматографического анализа аминокислот. Один метод предназначен для анализа аминокислот белковых гидролизатов, другой — для анализа физиологических жидкостей. Описание этих методов приведено ниже. [c.33]

    Ионообменная ТСХ гидрофильных белков вполне возможна, но ее практически оттеснил более совершенный метод электрофореза в полиакриламидном геле и пленках ацетилцеллюлозы (последний метод нашел себе применение для клинических анализов физиологических жидкостей). [c.490]


    При исследовании любого материала (белкового гидролизата, физиологической жидкости, синтетического материала и др.) количество анализируемого образца в среднем должно быть 0,25— 0,35 мкмоля (при длине кюветы 6,6 мм), причем нижний предел — не ниже 0,1 мкмоля, а верхний — не выше 1,0 мкмоля. Если анализатор снабжен микроспектрофотометром, то можно брать для анализа 0,05—0,075 мкмоля, а нижний и верхний пределы будут 0,001 и 0,3 мкмоля соответственно. [c.178]

    Программирование. Программирование анализа, т. е. выбор соответствующего аналитического метода, зависит от конкретной задачи. Если в лаборатории определенного профиля обычно проводят однотипные исследования, например анализы гидролизатов или физиологических жидкостей, рекомендуется ограничиться использованием какого-либо одного оптимального метода. Литература по автоматическому аминокислотному анализу очень обширна, к настоящему времени описано значительное число различных методик. Не имеет смысла перечислять все эти методики, поэтому ниже будут приведены лишь те, которые по нашему мнению наиболее удобны (фиг. 36 и 37). [c.179]

    Для разделения и количественного анализа аминокислот и родственных соединений в белковых гидролизатах и физиологических жидкостях предназначены автоматические аминокислотные анализаторы, выпускаемые многими фирмами. [c.91]

    Анализ физиологических жидкостей (плазмы крови, мочи, экстрактов тканей млекопитающих) проводят на длинной колонке (150 см) в несколько иных условиях. Эффективность разделения возрастает благодаря длительному (11ч, 330 мл) элюированию буферным раствором с pH 3,25 при 30 °С. При этом [c.344]

    Этот хроматографический метод был первоначально разработан для анализа мочи, плазмы крови, тканевых экстрактов и Других физиологических жидкостей. Однако данный метод можно использовать и для других объектов, содержащих подобные [c.33]

    Для устранения указанных выше недостатков оказалось выгодным производить смолы с определенными характеристиками. Так, сферическая смола типа АА-15 позволяет анализировать все кислые и нейтральные аминокислоты белковых гидролизатов за 4 ч при высоте столбика смолы 56 см основные аминокислоты анализируются на колонке высотой 5 см, заполненной смолой типа РА-35 [130]. Позднее была получена смола типа РА-28, применяемая для анализа аминокислот, обычно обнаруживаемых в таких пробах, как плазма крови или моча. Кислые и нейтральные аминокислоты определяются по методу анализа физиологических жидкостей на этой смоле за 5 с лишним часов основные аминокислоты анализируются в этом случае почти за 6 ч на упомянутой выше смоле типа РА-35 [88]. Названные смолы дают очень сильное увеличение высоты пиков, свидетельствующее о том, что аминокислоты элюируются из сферической смолы в виде более узких зон, улучшая разделение пиков. Несколько позднее появилась смола типа иК-ЗО, с помощью которой можно анализировать кислые и нейтральные аминокислоты как белковых гидролизатов, так и физиологических жидкостей. Преимуществом этой смолы является также и то, что на ней [c.35]


    Сокращение времени анализа стало возможным главным образом благодаря улучшению конструкции и надежности анализаторов аминокислот. Этому способствовало также совершенствование и создание сферических ионообменных смол, которые используются в специальных хроматографических системах. Улучшенные смолы дают возможность использовать более короткие колонки при сохранении достаточного числа теоретических тарелок, которое позволяет разделять большое количество различных аминокислот, хроматографируемых обычно по более сложной методике анализа физиологических жидкостей. Так, реальностью стал анализ кислых и нейтральных аминокислот более сложных физиологических жидкостей, приблизившийся по времени к анализу простых белковых гидролизатов. [c.36]

    Сравнительно недавно синтезирована смола типа UR-40, которая позволяет определять кислые и нейтральные аминокислоты по методике анализа физиологических жидкостей за 170 мин на колонке высотой 26 см. Основные аминокислоты физиологических жидкостей также могут быть определены на этой же колонке за 210 мин. Одноколоночный метод анализа белковых гидролизатов на этой смоле описан в разд. 1.6. Использование более коротких колонок и улучшение разделения пиков аминокислот стало возможным благодаря устранению специфических перемешивающих узлов (таких, как реактор, подводящие трубки, краны и кюветы), имеющихся в большинстве приборов. [c.36]

    Влияние pH буфера при анализе физиологических жидкостей [c.42]

    Влияние концентрации ионов натрия при анализе физиологических жидкостей [c.43]

    Фракционирование аминокислот — важная область применения ионообменной хроматографии, обеспечивающая в первую очередь анализ алпиюкислотного состава белков и пептидов после их исчерпывающего гидролиза, а также физиологических жидкостей и пище- [c.295]

    Методика анализа физиологических жидкостей [c.61]

    По этой методике анализируют аминокислоты и родственные им соединения, реагирующие с нингидрином, которые обычно присутствуют в физиологических жидкостях. Перечень этих соединений приведен в разд. 1.3.1.2. Ниже подробно описаны процедуры анализа физиологических жидкостей на смолах иК-ЗО и иК-40. [c.61]

    В настоящее время интенсивно развиваются методы автоматического анализа аминокислот. Основы этих методик заложены Спакманом и сотр. [186], которые использовали в своей работе метод ионообменной хроматографии на сильнокислотных катионитах, разработанный Муром и 111тейном [126]. В настоящее время ведутся поиски способов ускорения анализов и совершенствуются анализаторы (см. гл. 8). Разрабатывается техника анализа белков и продуктов гидролиза пептидов, а также физиологических жидкостей. Анализ соединений первой группы проще, поскольку он предусматривает разделение лишь тех 18—20 аминокислот, которые обычно встречаются в продуктах гидролиза пептидов. Анализ физиологических жидкостей слож- [c.305]

    Методы анализа фракций могут быть физическими, химическими и биологическими. Одним из лучших методов считается детектирование радиоактивных изотопов. Результаты измерений оформляют в виде кривой зависимости определяемой величины от объема злюата. По распределению пиков на хроматограмме судят о возможности объединения некоторых фракций, совершенно чистых, без примесей других компонентов. Методом ионообменной хроматографии можно разделять различные катионы и анионы, четвертичные аммониевые основания, амины, аминокислоты, белки, продукты гидролиза пептидов, физиологические жидкости, гидролизаты клеточных оболочек микробов, антибиотики, витамины, нуклеиновые кислоты. [c.361]

    ТСХ модифицированных ароматическими заместителями аминокислот в последние годы предпочитают вести на пластинках с полиамидным покрытием, поэтому из обзора Нидервизера процитируем только методы фракционирования немодифицированных аминокислот. Разумеется, ни по чувствительности и воспроизводимости результатов, ни тем более по точности количественных определений ТСХ аминокислот не может конкурировать с современными аминокислотными анализаторами. Однако существует немало ситуаций, когда возможности ТСХ оказываются вполне адекватными поставленной задаче определение аминокислотного состава, сопоставление родственных полипептидов, выявление генетических различий, проявляющихся в замене каких-либо аминокислот, клинические анализы физиологических жидкостей и др. На рис. 160 показана приведенная в цитируемом обзоре картина распределения пятен носле двумерной ТСХ модельной смеси аминокислот на иластинках с сп-ликагелевым покрытием. На старт вносили но 1 мкг каждой из ал1И-нокислот в 0,5 мкл 0,1 М раствора НС1. Элюцию в нервом направленип проводили смесью хлороформа, метанола и 17 %-ного аммиака (2 2 1), а во втором — смесью фенола и воды (3 1 но массе). [c.482]

    При анализе содержания в физиологических жидкостях свободных аминокислот встает задача предварительной полной очистки их от белков. Для малых объемов плазмы (5—25 мкл) была описана элегантная методика осаждения белка холодным (—30°) ацетоном в капилляре (100 X 0,6 мм) с последующим центрифугированием в нем же, после чего кончик капилляра с осадком белка просто обламывали [Arola et al., 1977]. [c.483]


    Методы количественного анализа серусодержащих соединений в физиологических жидкостях приведены в [796], серу в фармацевтических препаратах определяют комплексонометрически [632], сульфат аммония в лечебных сыворотках титруют амперометрически [2]. [c.215]

    Одно из положений современной биомедицины гласит что многие, если не все, заболевания вызваны в определенной сте пени отклонением от нормального течения некоторых из десят ков тысяч химических реакций, протекающих в клетках и тканях организма [244] Для диагностики заболеваний необхо димо однозначно установить связь между всеми известными за болеваниями и характеристическими изменениями биохимиче ского состава клеток и физиологических жидкостей Один из ша гов в этом направлении —детальный анализ характерных мно гокомпонентных смесей физиологических жидкостей Основным методом такого анализа стал ХМС метод, который практически [c.186]

    Аминокислоты Имеется множество методов для выделения и анализа аминокислот в физиологических жидкостях Эти ме тодики используют метод ТСХ, высокоэффективную жидкостную хроматографию, хроматографию на бумаге и газовую хромато графию Основным недостатком анализа аминокислот с по мощью ГХ—МС является необходимость их выделения из био логических жидкостей для последующего анализа в газовой фазе Чаще всего для этой цели применяют ионообменн/ю хро матографию Однако меченые аминокислоты могут потерять изотопную метку при долговременном пребывании в водных растворах при низких значениях pH, что является необходимым условием ионообменной процедуры [c.197]

    Авторы работы [288] предложили новый метод выделения аминокислот из биологических жидкостей свободный от недо статков ионообменной очистки Метод быстр, удобен при анали зе большого количества образцов и позволяет получить амино кислоты в форме, удобной для последующего ГХ и ГХ—МС анализа Физиологическая жидкость (например, плазма) под кисляется до pH = 2 и экстрагируется диэтиловым эфиром для [c.197]

    Для измерения pH, рСОг и рОг при помощи электродов различных типов [16, 17] разработан ряд методик [18, 19, 20, 121]. Особенно большое значение в этом случае имеет метод отбора и хранения проб, поскольку парциальное давление кислорода и диоксида углерода в пробах цельной крови и плазмы, если не принять специальных мер предосторожности, сравняется с их парциальным давлением в воздухе. Кроме того, так как показания электродов зависят от правильности их градуировки и эксплуатации, их следует периодически (через каждые несколько часов) проверять, используя градуировочную смесь газов соответствующей концентрации. При помощи специальной компьютерной системы операцию градуировки можно автоматизировать. Физиологические жидкости удобно анализировать методом атомно-абсорбционной [22] и эмиссионной спектроскопии [23]. После соответствующей предварительной обработки исследуемый образец вводят в виде раствора в пламя, где происходит его атомизация. В эмиссионном спектральном анализе энергия пламени используется для возбуждения атомов. В результате перехода из возбужденного состояния в основное они испускают излучение с характеристическими длинами волн, интенсивность которого пропорциональна концентрации определяемых атомов в пламени. В атомно-абсорбционном анализе через атомный пар пробы пропускают излучение и регистрируют его. При этом интенсивность излучения снижается в соответствии с I) показателем поглощения элемента при той длине волны, при которой проводятся измерения, 2) длиной пути, пройденного излучением в образце, и 3) концентрацией определяемого элемента. Если первые две величины поддерживаются постоянными, то, измерив поглощение, можно установить концентрацию элемента. Эти два метода дополняют друг друга, и в каждом конкретном случае аналитик выбирает тот из них, который в данной ситуации более чувствителен и более точен. Эмиссионный спектральный анализ может быть менее селективен, чем атомно-абсорбцион-ный, и более подвержен спектральным помехам. Одни элементы можно определять и тем и другим методом (А1, Ва, Са), другие лучше анализировать методом атомно-абсорбционной спектроскопии (например, Ве, В1, Ли, 2п), третьи же целесообразнее определять атомно-эмиссионным методом (и, Ки, N. ТЬ и т. д.). [c.29]

    Анализ нингидринположительных соединений в физиологических жидкостях проводят на колонках длиной 150 и 50 см. [c.320]

    Одноколоночный анализ белковых гидролизатов и физиологических жидкостей проводят по единой схеме на колонке 0,9 X Х133 см при 60 °С. Смолу урановешивают 0,25 н. буферным раствором цитата натрия с pH 2,91. Образец вносят в 2 мл буферного раствора с pH 2,0. Первый буферный раствор (0,25 и. с pH 2,91), подают микронасосом со скоростью 30 мл/ч. После установления рабочего давления включают самописец, определяют скорость подачи и включают насос подачи нингидринового реагента, установленный на 30 мл/ч. Поскольку элюирование ведут в градиенте буфера, используют нингидриновый реагент с большей буферной емкостью. Градиент формируют [c.320]

    Анализ аминокислот белковых гидролизатов, физиологических жидкостей и биологических экстрактов проводят на колонке длиной 133 см в одной системе буферных растворов [61-Элюирование ведут в плавном градиенте концентраций и значений pH, которые определяются составом исходных буферных растворов (табл. 32.1) и способом построения градиента в девятикамерном смесителе Varigrad (рис. 32.3). Для построения градиента используют два буферных раствора цитрата натрия  [c.347]

    Наряду с одноколоночным анализом в непрерывном градиенте был разработан одноколоночный анализ в ступенчатом градиенте [8]. Вначале этот метод сильно уступал по эффективности двухколоночной схеме анализа время анализа белкового гидролизата составляло 38 ч. Разделение проводили на колонке (0,63X100 см) с амберлитом Щ-120 (20—40 мкм) в трех буферных растворах с pH 2,95 4,15 и 5,0 при 40 и 50 °С. Удовлетворительное разделение этим методом достигалось при правильном выборе градиента и тщательном подборе прочих условий анализа. Дальнейшее развитие этой схемы шло по линии сокращения времени анализа, т. е. повышения эффективности, а также повышения хроматографического разрешения при анализе нингидринположительных компонентов из биологических материалов. В результате продолжительность анализа белковых гидролизатов была доведена до 260 мин [40]. При анализе физиологических жидкостей основная задача состоит в том, чтобы разделить все имеющиеся компоненты на одной колонке и определить объемы их выхода в идентичных условиях. В связи с этим следует отметить работу Гамильтона [41], в которой указаны объемы выхода 180 веществ. Эти данные можно использовать для идентификации компонентов физиологических жидкостей, а также для выбора условий анализа нингидринположительных веществ природных смесей. Для повышения разрешения смесей амидов и других трудноразделяемых пар аминокислот также используют буферные растворы на основе солей лития [42, 43]. [c.348]

    Образцы физиологических жидкостей (крови, плазмы, мочи, спинномозговой жидкости) освобождают от белков, осаждая их пикриновой или сульфосалициловой кислотой [75—77]. Осадок удаляют на центрифуге, надосадочную жидкость используют в последующей работе. Белки можно удалять, используя катиониты в Н+-форме [78] или центрифугируя смеси при высоких скоростях [43]. Аналогичным образом готовят для анализа экстракты гомогенатов тканей, также с использованием три-хлоруксусной и хлорной кислот [79]. Иониты используют для очистки от белков экстрактов большинства растительных тканей [80]. [c.352]

    Примечания. 1. Смола рекомендована для хроматографии на длинных колонках с применением небольшого давления (6—7 кгс/см ). 3. Для хроматографии на длинных колонках с давлением до 21—28 кгс/см . 4—6. Для ВСЖХ. Смола А-9 отличается повышенной жесткостью и улучшенной филь трационной способностью при высоком давлении. 7,8. Для препаративных работ. 18. Для работ с давлением до 28—35 кгс/см. 20—28. Предназначены для анализа аминокислот в гидролизатах (№ 20—22) и физиологических жидкостях (№ 23, 24), а также для препаративных работ (№ 25—28). 31, 32. Универсальные высокоэффективные смолы. 41. Однородность зернения 2 мкм. 42—54. На основе смолы Amberlite IR-120 Влажность (в %) 10—15 (№ 42—44), 44—48 (№45), 49—55 (№ 46), 50—55 (№ 47—52). Смолы № 50—52 соответствуют смолам № 42—44, дополнительно очищены (АС). 55—61. Сорта смолы Zerolit 225. 62—69. АС, поставляются во влажном состоянии. Сорт смолы № 66 — с добавкой индикатора, смола № 67—69 — макропористая. 77, 78. Предназначены для анализа аминокислот в гидролизатах (№ 77) и в физиологических жидкостях (№ 78). 80. Для использования в аминокислотном анализаторе, работающем по методу лигандной хроматографии. 87, 88. Рекомендованы для работы на малых (№ 87) и больших (№ 88) колонках с давлением соответственно до 3 или до 17 кгс/см . [c.101]

    Среднесшитые снльноосновные аниониты (тип I, 4—8% ДВБ) применяют для )азделения и анализа нейтральных углеводов (в виде боратных комплексов) 1] ди- и трикарбоновых кислот (с ацетатными и формиатными буферными растворами) [2 нуклеотидов, нуклеозидов и нуклеиновых оснований (с ацетатными и формиатными буферными растворами) [3] компонентов мочи и других физиологических жидкостей [4]. Для разделения пептидов основного характера применяют слабосшитые (2% ДВБ) и макропористые аниониты [5]. См. также разд. 74. [c.107]

    Несколькими исследователями разработаны ускоренные методы хроматографического анализа аминокислот не только для обнаружения многих врожденных дефектов метаболизма, о которых упоминалось выше, но и для быстрого анализа многих аминокислот физиологических жидкостей. Так, Льюис [79] использовал короткую ионообменную колонку для определения метионина и цистина. Для разделения при комнатной температуре была использована колонка размером 40X1.5 см, заполненная смолой зеокарб-225 (>200 меш) пробу предварительно окисляли. При скорости течения буферного раствора 200 мл/ч цистеиновая кислота элюируется при объеме элюата 36—40 мл. [c.13]

    Бенсон [81] описал ускоренную хроматографию аминокислот, связанных с фенилкетонурией, лейцинозом и другими врожденными дефектами метаболизма. Эти анализы выполнены на одной колонке, заполненной сферической катионообменной смолой типа РА-35, которая может быть также использована для хроматографического разделения основных аминокислот, присутствующих в физиологических жидкостях. [c.16]

    Спакман, Стейн и Мур [12] предложили метод анализа кислых и нейтральных аминокислот на колонке размером 150 X X 0,9 см при использовании двух буферов, заменяемых один на другой в середине анализа. Согласно их методу, основные аминокислоты анализируются на второй колонке с использованием третьего буфера более высокой ионной силы и pH. Для анализа основных аминокислот, обычно встречающихся в пептидных и белковых гидролизатах, применяется колонка размером 15 X Х0,9 см. По этой методике для каждой колонки требуется отдельная проба однако методика име1Ет большие возможности. Гак, если необходимы сведения только о нескольких основных аминокислотах, например, в случае анализа физиологических жидкостей, то они могут быть получены без предварительного элюирования кислых и нейтральных аминокислот, которые при одноколоночном методе элюируются в первую очередь. [c.17]

    Имеется вторая схема анализа, которая обеспечивает лучшее разделение аминокислот при анализе физиологических жидкостей и дает возможность анализировать большее число аминокислот. Для анализа кислых и нейтральных аминокислот используют ту же самую колонку размером 150 X см однако анализ основных аминокислот проводят на колонке 50X0.9 см (см. разд. 1.3). [c.18]

    В настоящее время имеется два типа устройств для ввода проб, которые удовлетворяют этим требованиям в одних используются калиброванные капиллярные трубки, в других — маленькие патроны или колонки со смолой. Несмотря на то что оба типа устройств пригодны для гидролизатов и физиологических жидкостей, первый тип наиболее пригоден для белковых или пептидных гидролизатов, поскольку они обычно не содержат коллоидных примесей, которые могут быть вредными для смолы (например, липиды, клетки и т. п.). С другой стороны, второй тип наиболее пригоден для анализа свободных аминокислот физиологических жидкостей, например плазмы. Колонки со смолой в этом типе устройства для ввода проб сорбируют аминокислоты, которые должны быть проанализированы, и служат в качестве фильтра для удаления обнаруживаемых в пробе примесей. Элюирующий буфер, который затем переносит пробу в [c.31]

    Анализ основных аминокислот. Для анализа этих аминокислот используют смолу РА-35 при высоте столбика смолы 23 см. Скорость подачи буфера и нингидринового реагента та же, что и при анализе кислых и нейтральных аминокислот. Анализ начинают с 0,38 п. натрийцитратного буфера pH 4,25 + 0,01 (см. табл. За) при 32,3 °С, который на 185-й минуте заменяют на 0,35 и. натрийцитратный буфер pH 5,36 + 0,01 одновременно повышают и температуру в рубашке колонки до 62,0 °С, используя тот же температурный градиент. Нормальное давление на колонке при 32,3 °С составляет 14,8 атм, а продолжительность анализа— 345 мин (см. рис. 2). В целом анализ кислых, нейтральных и основных аминокислот физиологических жидкостей занимает немногим более 11ч. [c.61]


Смотреть страницы где упоминается термин Физиологические жидкости, анализ: [c.461]    [c.524]    [c.525]    [c.268]    [c.24]    [c.56]    [c.187]    [c.188]    [c.75]    [c.325]    [c.85]    [c.34]    [c.35]   
Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам Часть 2 (1982) -- [ c.306 , c.331 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Жидкости анализ

Физиологические жидкости



© 2025 chem21.info Реклама на сайте