Количественое определение веществ в зонах хроматографии на бумаге

Качественное и количественное определение веществ на бумаге методом осадочной хроматографии становится весьма удобным и быстрым, если хроматографируемый раствор содержит одно или несколько радиоактивных веществ. В этом случае присутствие и количество вещества в той или иной зоне может быть установлено [c.121]

Третий тип реакции между соединением и реагентом является аномальным, но, к сожалению, именно этот тип реакции обычно встречается при хроматографическом определении лекарственных препаратов. При низком содержании вещества в зоне эти реакции могут протекать полностью, либо возможно недостаточное проникновение проявляющего реагента к веществу, сорбированному на внутренних слоях бумаги, что аналогично взаимодействию по реакции второго типа. Однако при концентрации вещества в зоне выше определенной наблюдается совершенно новое явление интенсивность окраски зоны действительно понижается по мере дальнейшего увеличения концентрации вещества в зоне. Это обусловлено не только тем, что реагент, по-видимому, не проникает к веществу, но и тем, что концентрация вещества в зоне достаточна для изменения характера реакции или даже ее торможения. Все это можно будет увидеть на хроматограмме, где нормальную окраску производного дают лишь зоны с низким содержанием вещества и краевые участки зон с высоким содержанием вещества. Центры зон с высокой концентрацией вещества либо реагируют в незначительной стенени, так что зона еще сохраняет круглую форму, либо их окраска заметно отличается от окраски краевых ее участков. Очевидно, своеобразное поведение веществ этой группы при проявлении хроматограмм значительно ограничивает методы, которые могут быть использованы для количественного определения веществ после разделения их смесей методом хроматографии на бумаге. [c.41]

Количественное определение веществ в зонах хроматографии на бумаге [15] [c.261]

Разделение хроматографируемых веществ в колонке улучшается при промывании хроматограммы чистым растворителем. Зоны при этом обособляются, границы их становятся более резкими. Осадочные хроматограммы имеют четкие нижние границы и равномерное распределение осадка по высоте зоны. Эта особенность осадочных хроматограмм используется для количественного определения веществ по высоте зоны. В бумажном способе осадочной хроматографии в качестве носителя используются полоски или круги фильтровальной бумаги средней плотности. Бумага на несколько минут погружается в раствор осадителя, концентрация которого подбирается опытным путем, и высушивается на воздухе. [c.389]

Количественная хроматография на бумаге и в тонком слое весьма перспективна ввиду ее простоты и в принципе должна быть точным методом анализа, поскольку в идентичных условиях количество вещества в зоне всегда будет определяться количеством вещества, нанесенным в точку на линии старта. Кроме того, распределение в зоне должно быть постоянным, для того чтобы метод конечного измерения (по площади пятна, по показаниям денситометра или путем измерения оптической плотности после элюирования) обеспечивал количественное определение первоначально нанесенного вещества. Однако на практике исключительно трудно создать идентичные условия развития каждой хроматограммы. Цель настоящей работы — обсуждение факторов, вызывающих изменения в распределении вещества в зонах, и способов их преодоления. [c.9]

Проблема количественного определения вехцеств в зонах после разделения методом хроматографии на бумаге весьма сложна, а методы, используемые для этих целей, зависят от природы анализируемых веществ. Тем не менее имеются общие положения, которые все-таки могут быть рассмотрены. В настоящей главе обсуждается классический тип хроматограмм на бумаге. В этом случае первоначально бесцветные соединения обнаруживают после хроматографического разделения путем обработки хроматограммы реагентом, образующим с анализируемым веществом хорошо заметное на хроматограмме окрашенное соединение. [c.33]

По механизму разделения хроматографии на бумаге является распределительной. Метод основан на различии в коэффициентах распределения между двумя несмешивающимися фазами. Неподвижная фаза в этом случае удерживается в порах специальной хроматографической бумаги, которая служит носителем. Подвижная фаза продвигается вдоль листа бумаги, главным образом благодаря капиллярным силам. Для количественной оценки подвижности веществ в хроматографической системе используют параметр равный отношению скорости движения зоны определенного компонента к скорости движения фронта подвижной фазы. Значения определяют как и в ТСХ. На подвижность веществ в условиях хроматографии на бумаге влияет не только коэффициент распределения, но и взаимодействие их с волокнами, условия проведения эксперимента и характеристика бумаги. Мето- [c.614]

Разнообразие современных хроматографических методов может привести на первый взгляд к неправильному представлению о том, что объединение столь различных методов одним термином хроматография является искусственным, неправильным. На самом деле это различие только кажущееся. Все современные хроматографические методы обладают рядом общих, причем весьма существенных черт. Так, любое хроматографическое разделение включает перемещение анализируемой пробы через слой неподвижного вещества (твердый адсорбент, жидкая неподвижная фаза, нанесенная на твердый порошкообразный носитель или бумагу). Перемещение компонентов смеси осуществляется газом или жидкостью — подвижной фазой. Вследствие селективного замедления, осуществляемого неподвижной фазой, компоненты анализируемой смеси перемещаются с различными эффективными скоростями. Это обстоятельство приводит к образованию отдельных зон или полос, каждая из которых содержит один компонент разделенной смеси. Задача исследователя состоит в обнаружении темн или иными способами этих зон и определении их качественного и количественного состава. [c.6]

Способы окрашивания зон на поверхности бумаги сходны с применяемыми в хроматографии. Такое окрашивание может служить для быстрых качественных определений. Но метод может быть сделан и количественным, несмотря на имеющиеся многочисленные потенциальные источники ошибок. В этом случае измеряют интенсивность пятен в проходящем или отраженном свете, часто с автоматической записью на диаграмме но интенсивности окраски определяется количество вещества. [c.95]

Денситометрические методы были применены к трем группам веществ, являющихся характерными представителями целого ряда веществ, весьма удобных для анализа таким способом. Первая группа — Соп1ит алкалоиды — представляет собой ненасыщенные соединения, поэтому даже при успешном элюировании малые количества их нельзя определить спектрометрически в ультрафиолетовой области. Для этих целей Ферберн и др. [16] разработали методику газовой хроматографии, но она оказалась недостаточно чувствительной. Вторую группу — алкалоиды опиума— можно проанализировать методом хроматографии на бумаге с количественным определением в зонах путем измерения площади зон [7]. Но хотя этот метод весьма надежен, он достаточно трудоемок. Для третьей группы — алкалоидов митрагины — Шеллард и Элам [17] предложили ТСХ-систему, в которой конечные зоны были красного цвета на белом фоне, что весьма удобно для денситометрии. Благодаря этой [c.25]

Для разделения весьма малых количеств многокомпонентных смесей на индивидуальные компоненты широко применяют методы хроматографии на бумаге и в тонком слое. Неизбежно, что с развитием этих методов должны предприниматься некоторые попытки количественного определения индивидуальных компонентов в зонах. Первые попытки такого рода сделаны в 1949 г. Фишером, Парсонсом и Холмесом, предложившими измерение размеров зон. Пэди и Тру-тер в 1962 г. ввели методы, основанные на математическом соотношении между площадью зоны и количеством присутствующего в ней вещества, которые успешно используются в настоящее время. Однако широкое распространение получили и физико-химические методы оценки зон при хроматографическом разделении на бумаге и в тонком слое. [c.7]

Количественную хроматографию на бумаге проводят двумя способами с разрезанием хроматограмм на части и на целых хроматограммах. В первом случае возможны два варианта всю хроматограмму разрезают на небольшие прямоугольники стандартного размера, которые затем отдельно помещают на агаровую пластинку, засеянную тест-микробом. Одновременно на эту же пластинку помещают контрольные куски хроматографической бумаги такого же размера, на которые нанесен стандартный антибиотик в известных количествах. Сравнивая размер зон подавления в опыте и контроле, можно определить содержание антибиотика в различных участках хроматограммы. Такой метод применяли для пенициллинов [6], стрептомицииов [351], ан-тимицинов [314, 352], геликсинов и эндомицинов [284], т. е. тогда, когда, кроме биоавтографического метода, не было других способов выявления веществ на хроматограммах. Если расположение изучаемого вещества можно определить заранее, то при количественных определениях вырезают только зону расположения антибиотика, вещество затем элюируют подходящим растворителем. Для определения содержания антибиотика чаще всего используют спектрофотометрический метод. Таким образом проводили определение тетрациклинов антибиотики и продукты их деградации выявляли по свечению в УФ-свете, для элюирования использовали фосфатный буфер с pH 4,5 или растворы соляной и серной кислот количественные определения проводили микробиологическими или спектрофотометрическими методами [97, 99, 101, 258, 350—355]. Метимицин и близкие антибиотики обнаруживали на хроматограммах в виде коричневых пятен по- [c.36]