Метризамид

Метризамид химически инертен и устойчив в диапазоне pH 2,5—12. С биополимерами он не взаимодействует, даже практически не влияет на степень их гидратации в растворе (не отнимает воду). Метризамид не осаждается кислотой и 70%-ным этанолом — белки и нуклеиновые кислоты легко осадить из его -раствора. [c.207]

Вязкость и плотность растворов глицерина, особенно в области высоких концентраций, нарастают медленнее, чем растворов сахарозы и метризамида, но таким образом, что для растворов глицерина и сахарозы с одинаковой плотностью вязкость оказывается значительно выше у глицерина. Поэтому центрифугирование в градиенте плотности глицерина используют главным образом в тех случаях, когда это диктуется какими-либо дополнительными соображениями, например стабилизирующим действием глицерина на активность некоторых ферментов. [c.209]

Метризамид имеет определенные преимущества перед сахарозой в отношении плотности и вязкости его растворов. При одинаковой концентрации вязкость раствора метризамида несколько меньше, чем раствора сахарозы, а плотность — существенно выше. Это означает, что для создания устойчивых градиентов плотности растворов метризамида требуются заметно меньшие его концентрации. И все же метризамид практически почти не используют для зонально-скоростного центрифугирования, что объясняется рядом причин. Одна из них, как будет видно ниже,— очень низкие значения плавучих плотностей нуклеиновых кислот в его растворах и, следовательно, малые скорости осаждения [c.209]

Перспективны элементоорганические соединения, содержащие тяжелые атомы. Для них высокая плотность раствора может быть обеспечена при умеренной концентрации. Именно на этом пути был найден и успешно использован для равновесного центрифугирования описанный выше метризамид. [c.242]

Совершенно иная картина наблюдается, при равновесном центрифугировании биополимеров в растворах метризамида, который практически йе связывает воду. Плавучая плотность нуклеиновых кислот в этом случае оказывается в пределах [c.248]

ГРАДИЕНТЫ ПЛОТНОСТИ РАСТВОРОВ МЕТРИЗАМИДА [c.270]

Метризамид в отличие от сахарозы и тем более, солей, связывает очень мало воды. Этим обусловлена высокая степень гид- [c.270]

Но есть и недостаток — относительно высокая вязкость ра тво-ров метризамида. Градиент его плотности при центрифуги]рова-нии образуется медленно. Растворы метризамида при концентрации более 40% настолько вязки, что их вносят не пипеткой, а шприцем. [c.272]

Для иллюстрации возможностей использования градиентов метризамида приведем три примера. [c.272]

Плотность сухого и сырого вещества оценивают с помощью равновесного центрифугирования в градиенте плотности (разд. 5.2.3). Однако использование этого метода для клеток, а не для субклеточного материала сопряжено со скрытыми трудностями. При определении таким способом плотности сырого вещества гидратированных клеток (например, в растворах метризамида и ренографина) активность воды и осмотическая сила имеют по ходу градиента разные значения к тому же градиентный раствор может проникать в водное пространство матрикса клеточной стенки. При определении [c.237]

Данный метод требует более длительного центрифугирования в градиенте концентрации сахарозы (16 ч при 73 000 g) или метризамида (15—45%-ный градиент, 190000 g, 6 ч). Растворы метризамида обладают более низкой вязкостью и осмотическим давлением, чем растворы сахарозы, и поэтому их использование для изопикнического центрифугирования предпочтительно. Растворы метризамида всегда следует готовить непосредственно перед использованием на 10 мМ HEPES, pH 7,8 [26]. [c.151]

Для создания градиентов плотности среды при зонально-скоростном центрифугировании нашли применение растворы следующих веществ сахарозы, глицерина, метризамида ( Ме1п8ат1-с1е ), фиколла ( р1соП ) и перколла ( РегсоИ ). Первые два вещества общеизвестны, поэтому приведем краткие характеристики трех остальных. [c.206]

Метризамид —фирменное название довольно сложного производного трийодбензойной кислоты. К бензольному кольцу, кроме трех атомов йода, присоединены еще ацетамид и Ы-метйЛ [c.206]

Карбоксильная группа бензойной кислоты блокирована амидной связью с 2-амино-З-дезоксиглюкозой. Молекулярная масса метризамида — 789. Наличие трех атомов йода обеспечивает высокую собственную плотность этого вещества (2,17 г/см ). Остаток глюкозы и три карбонильных кислорода обусловливают очень хорошую растворимость в воде. Метризамид хорошо растворяется и в метаноле, этаноле, диметилформамиде и диметилсульфоксиде. Вместе с тем ионогенные группы отсутствуют — Чйолекула не несет заряда лишь при pH 10 проявляются слабокислые свойства. [c.207]

К недостаткам метризамида относятся следующие. Ультрафиолетовое облучение его (и даже дневной свет), а та1сже нагревание выше 55° ведут к частичному освобождению йода. Растворы метризамида нельзя автоклавировать их стерилизуют фильтрованием. Метризамид сильно поглощает в ультрафиолетовой. области спектра (Яи с=242 нм), в том числе при 260 и 280 нм, но не мешает окраске биополимеров, например нуклеиновых кислот, -бромистым этидием. Для сцинтилляторов на основе диоксана и -нафталина метризамид является очень сильным тушителем, а для тритон-толуольных — умеренным (падение эффективности счета до 20%) Определение РНК с орцином, ДНК с дифениламином и белка по методу Лоури нельзя проводить в присутствии метризамида — его следует удалить ультрафильтрацией, [c.207]

Метризамид довольно слабо окрашивается обычным краси- Телем для белков — СВВ. Если разбавить фракцию после цен- трнфугйрования до концентрации метризамида менее 4% и такой же раствор метризамида использовать в кювете сравнения, [c.207]

Твердый метризамид в виде белого порошка можно хранить как угодно долго при комнатной температуре, если он защищен от света. Растворы его могут быть атакованы микроорганизмами. Метризамид выпускает норвежская фирма Nyegaard . [c.208]

Метризамид имеет весьма существенные преимущества при проведении равновесного центрифугирования, поэтому дальней-щее знакомство с его физико-химическими характеристиками и нспрльзованием его растворов отложим до соответствующей главы. [c.210]

Ниже рассмотрены особенности каждого из названных солевых градиентов. Различные технические аспекты их приготовления и использования подробно проанализируем на примере самого распространенного — градиента плотности растворов s l. Затем отметим особенности и принципиальные отличия других солевых градиентов. Отдельно остановимся на равновесном центрифугировании в градиентах плотности растворов метризамида. [c.250]

Что же будет происходить в сечении 2, прилегающем к стенке пробирки Следует помнить, что мы имеем дело с ионами или молекулами (в случае метризамида), не склонными слипаться и образовывать осадок на стенке. Под действием центробежной силы они будут стремиться, независимо друг от друга, соскользнуть вниз по наклонной стенке пробирки. Но внизу располагается область более вь1сокой плотности раствора, сформировавшаяся в соответствии с большим значением максимального радиуса вращения для этого слоя жидкости. Диффузия [c.253]

Некоторые сложности могут возникнуть при определении радиоактивности во фракциях. s l и метризамид являются сильными тушителями сцинтилляторов на основе диоксана и [c.258]

Ввыше была приведена структура молекулы метризамида и были отмечены основные физико-химические характеристики его водных растворов. Они не нашли применения для зональноскоростного центрифугирования, но все шире используются в режиме равновесного, поэтому здесь уместно привести более подробные данные, характеризующие растворы метризамида [c.270]

Для вычисления плотности раствора метризамида через его коэффициент преломления, измеренный при 20° (пго), можно пользоваться следующими соотношениями р5=3,453п2о — 3,601 р2о=3,350л2о—3,462. Концентрация, выраженная в виде процент ного отношения массы метризамида к объему раствора т1У,%) связана с коэффициентом преломления следующим образом С=613,5лго-817. [c.270]

Гидратация белков не столь сильно выражена, как в случае нуклеиновых кислот, поэтому значения плавучей плотности белков в растворах метризамида примерно такие же, как в растворах сахарозы. О степени гидратированности нуклеиновых кислот можно судить по тому, что их собственная плотность близка к 2 г/см [ ohen, Eisenberg, 1968]. Можно себе представить, какое количество воды прочно связывается с молекулами нуклеиновой кислоты, если их плавучая плотность падает до значений [c.271]

Сопоставляя данные по плавучим плотностям со значениями плотности растворов метризамида, легко видеть, что плавучие плотности всех перечисленных биологических объектов перекрываются относительно умеренными концентрациями водных растворов метризамида. Вместе с тем высокая плотность самого метризамида (2,17 г/см — за счет трех атомов йода) придает ему способность, подобно s l или KI. образовывать градиент плотности при длительном центрифугировании и большой скорости вращения ротора. Отсюда вытекает возможность использования водных растворов метризамида в качестве среды для равновесного центрифугирования в градиентах плотности. Малая плавучая плотность биополимеров в растворах метризамида, его химическая инертность и отсутствие диссоциирующего воздействия дают ему преимущества по сравнению с солевыми растворами. [c.271]

Градиент плотности метризамида следует преформировать ступенчато за сутки до опыта, для того чтобы ступени имели возможность сгладиться за счет диффузии. Зато эти градиенты хорошо сохраняют свой профиль. Например, преформированный градиент метризамида может сохранять линейность (не отвечающую его равновесному распределению) в течение десятков часов центрифугирования. [c.272]

В угловом роторе, где длина градиента мала, можно обойтись без преформирования. Форма равновесного градиента плотности раствора -метризамида получается довольно сложной, близкой к экспоненциальной (из-за вмешательства вязкости). Иногда она оказывается слишком крутой, поэтому предпочитают преформировать неравновесный линейный градиент, и воспользоваться его устойчивостью для сравнительно непродолжительного центрифугирования. [c.272]

При фракционировании нуклеиновых кислот для воздействия на их плавучую плотность можно варьировать добавки соли и pH среды. Фракционирование белков в градиентах метризамяаа не очень удобно ввиду высокой вязкости необходимых для этой цели довольно концентрированных растворов метризамида (40—50% rnlV). Особенно ценен метризамид для равновесного фракционирования нуклеопротеидов, которые в его растворах Hf диссоциируют и имеют небольшую плавучую плотность. Метризамид. можно использовать в щелочной среде (pH 12), когда ДНК денатурирует, и удается, например, изучать распределение белков по комплементарным нитям молекул ДНК [Russev, Tsa-nev, 1976]. [c.272]

Для-удаления примесей тяжелых металлов, особенно при малых концентрациях нуклеиновых кислот, растворы метризамида следует очищать на колонках helex-100 . [c.272]

Использовался преформированный линейный градиент 10— 60% (m/F) метризамида при 5 с диапазоном плотностей [c.273]

Рис. 76. Разделение рибосом (/) и мРНП-частиц (2) из мышцы зародыша цыпленка центрифугированием в градиенте плотности метризамида [Bester et а .. 1980]

Рис. 77. Изменение плавучей плотности (р) ДНК (а) и хроматина (б) в растворе метризамида в зависимости от концентрации солей [Kondo et al., 1979]

Недав но [Murphy et al., 1980] равновесным центрифугированием в градиенте плотности метризамида удалось отделить но-воси нтезированный, импульсно меченный хроматин от основной массы хроматина. Новосинтезированный хроматин отличается более высокой плотностью, что, по-видимому, объясняется более плотной упаковкой в нем нуклеосом. [c.274]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология