Флуорохромы

Флуоресцирующие антитела представляют собой гамма-глобу-линовые фракции иммунных агглютинирующих сывороток, химически соединенные с флуорохромами. Вследствие этого они обла- [c.164]

Среди флуорохромов заменителей основного фуксина наиболее удачным является Аурамин О [11]. Интенсивность флуоресценции его в комплексе хорошо отражает содержание ДНК. Недостатком этого флуорохрома, как и многих других, является чувствительность к ультрафиолетовым лучам. Ослабление флуоресценции Аурамина О происходит в первые 2 минуты облучения (их надо выждать, прежде чем приступать к измерению). [c.147]

Зеленая флуоресценция с максимумом при 530 ммк присуща разбавленным растворам АО, где молекулы флуорохрома находятся в мономерной форме. В концентрированных растворах образуются агрегаты молекул, флуоресцирующие красным светом с максимумом при 640 ммк. Соответственно зеленой флуоресценции комплекса АО-ДНК соответствует мономерная посадка молекул АО на молекулу ДНК, красная и оранжевая флуоресценция комплекса АО-РНК — димерной или полимерной посадке. [c.177]

Нативная ДНК также способна к наружной посадке АО, но после насыщения ее молекул мономерами АО. Это происходит при избытке флуорохрома в растворе, что было показано ранее [23]. [c.178]

Разработанный нами метод оценки состояния ДНК в ядре по характеру флуоресценции АО основан на том, что стабильная ДНК, фосфатные группы которой блокированы аминогруппами белка, связывает АО только в мономерной форме и флуоресцирует зеленым светом в области 530—575 ммк даже в избытке флуорохрома. [c.179]

Лабильная ДНК, значительная часть фосфатных групп которой свободна, способна наряду с комплексом по типу мономерного связывания молекул АО давать комплекс с агрегированными молекулами флуорохрома. Благодаря этому комплекс АО-лабильная [c.179]

Реактивы и оборудование 1) исходный раствор флуорохрома 1 ЮОО на дистиллированной воде, 2 0,2 М фосфатно-цитратная или 0,2 М ацетатно-натриевая буферная смесь pH 3,6 —4,0, 3) 96, 75, 50, 25%-ный этанол, [c.180]

Основной раствор флуорохрома готовят в концентрации 1 1000 на дистиллированной воде и перед проведением опыта разводят буфером до концентрации 1 5000. [c.180]

Из испытанных четырех флуорохромов наименее пригодным оказался примулин, вызывающий яркое желто-зеленое свечение протоплазмы, [c.225]

НелюминесцируюЩие объекты можно обработать специальными флуорохромами (акридином желтым, акридином оранжевым, аурамином, примулином, тиоф-лавином, конго красным, тетрациклином, хинином) и также наблюдать люминесценцию, но это уже будет. наведенная, или вторичная, люминесценция, которая гораздо чаще используется в микроскопии. [c.19]

Препараты, окрашенные флуорохромами, изучают в средах, не люминесцирующих под действием коротковолновых Лучей,—в воде, глицерине, вазелииовом масле или физиологическом растворе. [c.19]

Преимущества люминесцентной микроскопии по сравнению с обычной заключаются в следующем сочетание цветного изображения и контрастности объектов возможность изучения морфологии живых и убитых клеток микроорганизмов в питательных средах и тканях животных и растений исследование клеточных микроструктур, избирательно поглощающих различные флуо-рохромы, которые являются при этом как бы специфическими цитохимическими индикаторами изучение функционально-морфологических изменений клеток использование флуорохромов при иммунологических реакциях и подсчете бактерий в образцах с невысоким их содержанием. [c.19]

В металлургической и машиностроительной промышленности люминесцентный анализ применяют для поверхностной дефектоскопии. Исследуемую деталь погружают в люминесцирующий раствор—флуорохрома в петролейном эфире, керосиново-масляную смесь с диметилкоэроксинолом и другие. Затем с детали соответствующим растворителем смывают флуоресцентный раствор, который остается только в капиллярных поверхностных трещинах. После этого деталь рассматривают в камере для флуоресцентных наблюдений, и все трещины на детали ясно выступают в виде флуоресцирующих полосок. [c.162]

В 1955 г. Ehrli h с соавт. использовали электронное сканирующее устройство для количественного определения бактериальной популяции в чистых культурах в питательном бульоне. Бактериальный мазок готовили количественно, окрашивали флуорохромом корифосфином и исследовали под люминесцентным микроскопом, включающим фотометрическую систему для измерения интенсивности флуоресценции, излучаемой микробами данного поля зрения. Контроль вели визуальным прямым микроскопическим подсчетом. Получена линейная зависимость между интенсивностью свечения и количество. бактерий, связь выражена больше для более крупных организмов. Необходимая для регистрации интенсивность свечения достигалась содержанием в поле зрения от 2 до 10 тыс. бактериальных клеток. [c.93]

В нашей стране подобный принцип автоматического учета суммарного потока люминесценции, создаваемого совокупностью бактерий в мазке в поле зрения микроскопа, применили Л. Б. Каминир и В. М. Алексеева (1966). Были испытаны флуорохромы акридин оранжевый, при-мулин, аурамин на культурах Е. соИ, Ps. fluores ens. Вас. megaterium. В результате разработан быстрый (13 с) флуорометрический метод автоматического учета числа бактерий в мазке. Чувствительность метода, по мнению авторов, вполне достаточна для регистрации специфического свечения бактерий, окрашенных люминесцирующи-ми красителями. [c.93]

Фильтр с осевшими на него бактериями подсушивают сухим жаром до полного высыхания. Флуорохромирование производят в течение 2 мин помещением фильтра стороной с бактериями вверх на поверхность 0,2% раствора флуорохрома лактата этакридина на фосфатном 1/15 М буфере с pH 7,0—7,5, предварительно нагретого до температуры 70°С. Затем остатки красителя удаляют помещением фильтра на фильтровальную бумагу, смоченную дистиллированной водой. Фильтр перекладывают до тех пор, пока площадка под ним не перестанет окрашиваться. [c.97]

Первые попытки применить люминесцентный метод для разделения живых и мертвых клеток бактерий были сделаны Strugger (1942, 1949) с использование.м для этой цели флуорохрома акридинового оранл<евого. Флуорохромы акридинового ряда привлекли к себе внимание из-за присущей им метахромазии, т. е. способности изменять цвет свечения в зависимости от концентрации. Помещенные в слабые водные растворы акридинового оранжевого живые клетки флуоресцируют зеленым светом, свойственным данной концентрации красителя. Мертвые клетки адсорбируют краситель до значительных концентраций и флуоресцируют оранжевым и красным. [c.109]

Установлена зависимость окрашивания клеток в разные цвета от способа флуорохромировання, концентрации флуорохрома, концентрации бактериальной суспензии, способа щиання и интенсивности обеспечения культуры кислородом и т. п., а не от возраста клетки. [c.110]

Таким образо.м, раздельный учет л<ивых и мертвых микроорганизмов весьма сложен даже в чистых культурах микроорганизмов. Большие методические трудности связаны с изучением микроорганизлюв природной воды. Наиболее перспективными и заслуживающими внимания являются. метод Пешкова и методы окрашивания различными флуоресцирующими красителями (флуорохромы и диахромы). [c.111]

Учитывая ряд преимуществ флуорохромов для разделения jKHBbix и. мертвых микрооргани.змов, Т. 3. Артемова (1973) испытала акридиновый оранжевый, при.мулин, аурамин, родамин о Ж и некоторые другие красители. Объектами служили природная водопроводная вода и взвеси чистых культур Е. соИ в воде. Флуорохромирование бактерий велось на нелюминесцирующих мембранных фильтрах. [c.113]

Представляет интерес поиск метода определения мертвых клеток, погибших не только в результате естественных процессов, но и убитых воздействие.м различных физических и химических агентов. Были испытаны примулин, акридиновый оранжевый и некоторые другие флуорохромы для определения свечения клеток Е. oli, убитых термальной обработкой (кипячение), хлором, формалином, хлороформом, фенолом, хлоридом натрия. [c.115]

Серия опытов по испытанию свойств других флуорохромов по разделению живых и убитых хлором клеток показала хорошие результаты на чистых культурах с аурамином 00, родамином 6Ж и их сочетанием. РГнак-тивированные хлором клетки Е. соИ при флуорохромировании аурамином люминесцировали ярко-желтым цветом и отчетливо были видны по сравнению с тускло-зелеными живыми клетками. Родамин 6Ж окрашивал убитые хлором клетки в красный цвет по сравнению с желтыми живыми при сочетании флуорохромов 2 1 получалась весьма красочная картина — мертвые клетки светились тускло-красным, а их ядра ярко-желтым. Однако при натурных исследованиях водопроводной хлорированной воды эти флуоро.кромы не дали возможности определить соотношение живых и мертвых бактерий. [c.117]

Кононенко А. П., Кононенко К- Г1. О методе прямой флуорохромии для выявления мертвых микробных клеток.— В кн. Бпофизика и радиобиология. Вып. I, Киев, 1966, с. 33—Зо. [c.256]

Вместе с тем оптические свойства флуорохрома зависят от его концентрации. При низких концентрацияхч (до 10 М), [c.121]

Люминесцентный метод определения состояния РНК в клетке. Определение состояния РНК в клетке по люминесценции с АО основано на способности этого флуорохрома связываться только со свободными фосфатными группами НК. После обработки липидорастворителями характерное для комплекса РНК-АО красное свечение усиливается. [c.172]

Чувствительность метода оценки состояния ДНК по соотношению свободных и блокированных белками фосфатных групп во много раз возрастает, если основные красители заменить основными флуорохромами и адсорбцию последйих измерять по интенсивности флуоресценции при соответствующих длинах волн. [c.177]

По представлению Лермана [21], [22], основанному на результатах физико-химических исследований, мономерность АО обусловлена интеркаллярной посадкой — его плоские молекулы по принципу стерического соответствия вклиниваются в промежутки между двумя парами нуклеотидов. В результате образуется комплекс АО-ДНК, у которого молярное отношение флуорохрома к фосфору НК, т. е. АО Р, равно 1 6 [24] или 1 8 [1]. [c.178]

При такой посадке молекулы флуорохрома разобщены друг от друга. Однонитчатым деспирализованным молекулам или участкам молекул НК характерна наружная посадка АО, благоприятная для агрегации флуорохрома. В таких комплексах, например с деспирализованной молекулой полиуридиловоп кислоты, отношение АО Р = 1 1,5 [24]. [c.178]

В этом случае молекулы флуорохрома связываются свободными фосфатными группами ДНК и располагаются по гребням ее двухнитчатой опирали. [c.178]

Как оказалось, в присутствии ионов магния АО не способен связываться свободными фосфатными группами лабильной ДНК, в то же время интеркаллярной посадке флуорохрома на ДНК ионы магния не мешают. В ряде опытов удалось наблюдать, что наружной посадке АО на ДНК мешают такие сравнительно слабые основные красители, как метиловый зеленый и пиронин. [c.178]

Флуорохромы (люмогены) используют отнюдь не только в люминесцентной микроскопии их с успехом применяют и во многих других случаях, например для получения флуоресцентных адсорбентов при хроматографировании бесцветных и нелюминесцирующих соединений. Зоны вен ества на хроматограмме обнаруживают по отсутствию люминесценции адсорбента в тех местах, где вследствие абсорбции веществом возбуждающего излучения адсорбент не люминесцирует. Брокман и Байер [31 ] рекомендуют морин для покраски адсорбента, но только если хроматографируют на окиси алюминия, на окиси магния или на карбонате кальция если адсорбент — кремнезем, пользуются берберином применение натриевой соли 3-оксипирен-5,8,10-трисульфокислоты для покраски подкисленной соляной кислотой окиси алюминия (80 мг на 1 кг) позволяет выявлять вещества, спектр поглощения которых простирается в область коротких длин волн. В другой работе [32] описан метод получения твердых флуоресцентных колонок их преимущество в отсутствии стеклянных стенок, препятствующих выявлению зон вещества, спектр поглощения которых лежит в той же области длин волн, где поглощает стекло (230 — 290 ммк). [c.74]

Кристаллические включения не дают свечения после обработки флуо-рохромами без предварительной фиксации срезов, в то время как ядра в тех же клетках ярко светятся. Фиксация срезов производилась реактивами Грисса и др. Применялись следующие флуорохромы (растворы в дистиллированной воде 1 1000) примулин, берберинсульфат, аурофосфин, акридиновый оранжевый. По мнению Гольдина 101, прекрасным фиксатором для вирусных включений является 1%-иый водный раствор пикриновой кислоты с последующей тщательной промывкой. [c.225]

Методика обработки срезов применялась следующая 1) фиксация срезов пикрииовой кислотой в течение двух и более часов, 2) тщательное промывание водой, 3) обработка флуорохромом в течение 15—30 мин.. 4) промывание водой и наблюдение. [c.226]

Для практика представляет суш,ественный интерес различать по флуоресценции муку ржаную и пшеничную. К сожалению, цвет их флуоресценции настолько близок, что это невыполнимо однако применение приема люминесцентного анализа — покраски флуорохромами — позволило разработать соответствующую методику. Установлено, что различие в свечении видоп муки становится хорошо заметным после окрашивания ее раствором диметилнафтейродпна концентрации 0,01%. Пшеничная мука приобретает ярко-оранжевое свечение, ржаная и ячменная — серо-оранжевое. [c.228]

П ш е н и ц а и я ч м е и ь. Не у всех злаков различие люминесценции срезов семян в зависимости от их жизнеспособности выражено отчетливо. В таких случаях пользуются другим приемом люминесцентного ана лиза — окраской флуоресцентными красителями. Так, жизнеспособность семян пшеницы, р ки и ячменя определяют после предварительного окрашивания Срезов зародышей флуорохромами, увеличиваюхцимп контрастность свечения зародыша и эндосперма. Для окраски срезов зародышей пшеницы применялся водно-спиртовой раствор родамина 6 ЖДН концентрации 0,00005—0,0001 г/сл , а для окраски срезов ячменя — содовый раствор (1% N33003) акридинового оранжевого концентрации 0,0003- - [c.233]

Люминесцентный анализ (1961) -- [ c.73 , c.225 , c.226 , c.233 , c.235 , c.237 , c.238 , c.272 , c.309 , c.312 , c.327 , c.372 ]

Органические люминофоры (1976) -- [ c.290 ]

Микрокристаллоскопия (1955) -- [ c.35 ]

Теория и практика иммуноферментного анализа (1991) -- [ c.144 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология