Химотрипсин бензоил

Влияние ионов Си++ на кинетические параметры гидролиза этилового эфира М-бензоил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипсином. Условия опыта pH 6,0 25° С ионная сила 0,1 М (K I) [c.148]

Рис. 73. Обработка результатов эксперимента по ингибированию ионами меди гидролиза этилового эфира К-бензоил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипсином

Рис. 74. Определение константы ингибирования а-химотрипсина ионами меди в реакции гидролиза этилового эфира М-бензоил-Ь-тирозина

Определите значения константы Михаэлиса и максимальной скорости для гидролиза метилового эфира М-бензоил-Ь-аминомасляной кислоты, катализируемого а-химотрипсином. Экспериментальные данные о зависимости начальной скор(5с ги от концентрации субстрата [c.235]

Рис. 29. Зависимость начальной стационарной скорости гидролиза этилового эфира Н-бензоил-Ь-тиро-зина под действием а-химотрипсина от ионной силы раствора (КС1,) / — 0,1 2— 0,2 5—0,5 4—1,0 (Мартинек, Яцимирский, Березин, -1971)

Путем сравнения с зависимостью от pH стадии, характеризующейся величиной 2, мы показали, что гидролиз соединения анил-фермент является стадией, лимитирующей скорость в ферментативном гидролизе обычных субстратов — амидов аминокислот. В случае химотрипсина этиловый эфир ацетил-Ь-фенил-аланина гидролизуется в 1000 раз быстрее, чем соответствующий амид, а в случае трипсина этиловый эфир бензоил-Ь-аргинина гидролизуется в 300 раз быстрее, чем соответствующий амид. [c.332]

Рис. 2.30. Зависимость начальной стационарной скорости гидролиза этилового эфира Ы-бензоил-Ь-тн-розина под действием а-химотрипсина от ионной силы растюра (Кс1). 1 - 0,1 2 - 0,2 3 - 0,5 4 - 1,0 [Мартинек, Яцимирский и др., 1971].

Образование пептидных связей, катализируемое гидролитическими ферментами, наблюдали в таких системах, где продукт реакции нерастворим и, тем самым, удаляется из сферы реакции. Например, при приведенной ниже реакции, катализируемой химотрипсином, бензоил-Ь-тирозилглицинанилид выпадает в осадок и может быть получен с довольно значительным выходом [c.262]

Удивительное свойство бифенильного модельного соединения состоит в том, что в растворе оно существует в двух медленно взаимоиревращающихся формах, в которых эфирная группа занимает либо внешнее (экваториальное), либо внутреннее (аксиальное) положение относительно бифенильной системы. а-Химотрипсин проявляет суи ествепиую специфичность к 5,5экв-конформеру, тогда как остальные конформеры существенно инертнее к ферменту. Скорость гидролиза и константа Михаэлиса для активного кон-формера фактически идентичны аналогичным величинам соответствующего нормального субстрата — метилового эфира М-бензоил-фенилаланина. [c.235]

Определить значения кат и Ктщат) для гидролиза метилоного эфира Н-бензоил-Ь аминомасляной кислоты, катализируемого а-химотрипсином [7], исходя из данных табл. 2. [c.87]

Известно, что в промышленном препарате а-химотрипсина обычно содержится примесь трипсина, причем оба этих фермента способны катализировать гидролиз этилового эфира Ы-бензоил-аргинина. Исходя из данных табл. 17, определить процентное содержание активного трипсина в препарате а-химотрипсина, если Б отдельном эксперименте найдено, что для гидролиза этилового эфира Ы-бензол-Ь-аргинина, катализируемого трипсином, Кт(клж) = = 4-10 М йкат = 29,6 сек" . [c.125]

В таблице 3 приведены данные по влиянию ионов Си++ на кинетические параметры гидролиза этилового эфира Н-бензоил-Ь-тирози-на, катализируемого а-химотрипсином. На основании данных таблицы и схемы (7.17) определить значения индивидуальных констант ферментативного гидролиза. [c.148]

Р-Нафтиловый эфир № -бензоил-О, Ь-фепи.1таланина применяется в биохимии для колориметрического определения активности протеолитического фермента химотрипсина [1]. [c.73]

Активность химотрипсина проявляется при pH 7—9,. но она несколько меняется в зависимости от субстрата [128]. Максимальный гидролиз некоторых синтетических субстратов, например бензоил-/-тирозиламида, наблюдается при pH 7,8. [c.199]

Установлено [27], что частично очищенный папаин способен атаковать синтетические субстраты амидного и пептидного типа. Аналогичными свойствами обладает и кристаллический фермент [178], который вызывает расщепление, хотя и с весьма различными скоростями, всех синтетических субстратов для трипсина, пепсина, химотрипсина, карбоксипепти-дазы и пептидаз. Из известных в настоящее время субстратов папаина наиболее чувствительным оказался бензоил-/-арги-ниламид. Атака фермента иа фракцию А окисленного инсулина свидетельствует о широком спектре гидролитического действия, напоминающем действие пепсина, хотя степень разрыва различных связей этими ферментами весьма различна. [c.210]

Амвд М-бензоил-Ь-тирозина Химотрипсин 15 25 [c.724]

Карбоновые кислоты, образующие ацильную часть нормальных субстратов химотрипсииа (например, карбобензокси-ь-фе-нилалапин, Ы-ацетилдибром-ь-тирозип, бензоил-ь-фенилаланин и М-ацетил-ь-триптофан) [27—31], вступают в катализируемую химотрипсином реакцию обмена с водой, меченной 0 . Результаты реакции свидетельствуют либо о протекании реакции двойного обмена [c.246]

Эти реакции показывают, что фермент всегда находит одну гидролизующуюся связь в молекуле акцептора (первый член в левой части приведенных выше уравнений). Например бензоил-тирозинамид является специфическим субстратом химотрипсина, и в реакционной среде, несомненно, содержится бензоилтирозин. Используя тот же пример, можно было бы предположить, что образование R гир. гли. А обусловлено не транспептидированием, а просто реконденсацией R тир (молекулы со свободной карбоксильной группой) с гли А. Однако ничего подобного не происходит (и это является, повидимому, наиболее существенным), так как процесс останавливается или, по крайней мере, его скорость очень сильно уменьшается, если для проведения реакции используются молекулы, содержащие свободную карбоксильную группу. Таким образом становится очевидной роль обмена . [c.193]

Был предложен метод специфического окрашивания трипсина и химотрипсина в результате расщепления ими хромогенных субстратов а- М-бензоил-ОЬ-аргинил-п-нитроанилида и N-аце-тил-Ь-тиронил-п-нитроанилида соответственно [304]. Гели обсушивают фильтровальной бумагой и помещают на бумагу ватман ЗММ, смоченную раствором субстрата в 10%-ном диметил-сульфоксиде. Через 5—15 мин в местах локализации ферментативной активности появляются желтые полосы. [c.302]

Эти величины можно сравнить с величиной 1,052 для случая отсутствия нулевого энергетического уровня в переходном состоянии [58]. Кинетические изотопные эффекты, обнаруженные при гидролизе эфирных субстратов, катализируемом химотрипсином, близки к эффектам, характерным для гидролиза метилформиата, катализируемого общим основанием [59]. Это означает, что лимитирующей стадией является, по-видимому, образование тетраэдрического промежуточного соединения. Катализируемый папаином гидролиз бензоил-Ь-аргининамида характеризуется кинетическим изотопным эффектом ( Ы/ Ы) около 1,024, что близко к верхнему пределу (1,01 — 1,025) для расщепления связи С—N [60], найденному в модельных опытах. Этот факт означает, что в переходном состоянии связь С—N в значительной мере расщеплена и скорее всего объясняется тем, что лимитирующей стадией является распад тетраэдрического промежуточного соединения (гл. 12, разд. Б.2). [c.97]

Возможным источником ошибок является нежелательное изменение свойств ферментов. Химотрипсин часто рассматривают как раствор имидазола и серина. Однако белки крайне чувствительны к окружению они могут неспецифически связывать органические молекулы и ионы, изменяя при этом свои кинетические свойства. Первое правило, которого следует придерживаться при постановке экспериментов, состоит в том, что реакции необходимо проводить при строго фиксированных, одинаковых концентрациях фермента. Многие белки склонны к агрегации, что может привести к изменению констант скорости. Второе правило гласит соотношение между продуктами следует определять путем непосредственного анализа продуктов, а не из косвенных данных. Например, скорость атаки ацилфермента бензоил-Туг-химотрипсина глицинамидом (GIyNH2) была в свое [c.226]

Прокарбоксипептидаза А активируется при отщеплении с помощью трипсина около 64 аминокислотных остатков с Ы-конца полипептидной цепи [125]. Этот зимоген обладает довольно высокой каталитической активностью. Проявляя способность гидролизовать небольшие эфиры и пептиды [126, 127], прокарбоксипептидаза отщепляет от лизоцима С-концевой лейцин только в семь раз медленнее, чем карбоксипептидаза. Зимоген гидролизует также бензоил-<31у-Ь-РЬе с йса = 3 с и Км = = 2,7 мМ (соответствующие величины для фермента равны 120 с и 1,9 мМ) [126]. В отличие от химотрипсина в прокар-боксипептидазе, несомненно, имеется центр связывания и каталитический аппарат практически полностью сформирован. [c.382]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология