Ингибирования константа, определение

Рис. 82. Графические способы определения констант ингибирования ферментативной реакции в случае связывания с активным центром фермента двух молекул конкурентного ингибитора (схема 6.35)

Рис. 103. Применение метода Фостера— Ниманна для определения константы конкурентного ингибирования пенициллинамидазы продуктами ферментативного гидролиза бензилпенициллина (по данным А. А. Клёсова и В. К. Швядаса), если начальные концентрации субстрата (мМ)

Рис. 74. Определение константы ингибирования а-химотрипсина ионами меди в реакции гидролиза этилового эфира М-бензоил-Ь-тирозина

Рис. 74. Применение метода Диксона для определения константы конкурентного ингибирования коферментом А реакции фосфотрансацетили-рования, катализируемой фосфат-ацетилтрансферазой [31], если концентрация неорганического субстрата (фосфата), мМ

Рис. 43. Определение кинетических и равновесных параметров ингибирования к-бутанолом гидролиза гиппурового эфира Ь-аргинина, катализируемого карбоксипептидазой В, с помощью обработки значений каталитических констант (а) и констант Михаэлиса (б) в координатах уравнения (5.14)

Для определения константы ингибирования распространен также так называемый метод Диксона, согласно которому экспериментальные данные откладывают в координатах (1/у, [I]) (см. рис. 46). [c.80]

Рис. 55. Определение константы диссоциации неактивного тройного комплекса ЕЗг в условиях ингибирования ферментативной реакции субстратом

Хотя сложность кинетического уравнения реакции и затрудняет расчет энергии активации, следует отметить (пренебрегая реакциями ингибирования и обратной реакцией), что члены, входящие в знаменатель уравнения (XIП. 10.7), имеют энергии активации, равные соответственно 88 и 85 ккал. Эти значения сильно завышены по сравнению с теми значениями энергии активации, которые рассчитаны на основании определений констант скоростей на неглубоких стадиях процесса и предположения, что механизм соответствует реакции первого порядка. Наблюдаемая энергия активации изменяется от наименьшего значения, равного примерно 69,8 ккал [49], до наибольшего 77 ккал [50, 51]. Несмотря на эти высокие значения энергии активации, упрощенный механизм приводит к тому, что рассчитанная константа скорости на самом деле выше наблюдаемой. Причина состоит в том. [c.312]

Рис 36. Графическое определение констант ингибирования для конкурентного (Л) и неконкурентного ( ) ингибиторов методом Диксона [c.214]

Рис. 41. Определение в координатах Диксона константы неконкурентного ингибирования гидролиза бутирилхолина, катализируемого холинэстеразой. Концентрации субстрата (а) — МО-3 м- (б) 2,5-10- М (в)-9.1-10-5 М (г) -5-10-5 М

Рис. 46. Применение координат Диксона для определения константы конкурентного ингибирования коферментом А реакции фосфотрансацетилирования, катализируемой фосфат-ацетилтрансферазой. Концентрации нуклеотидного субстрата (Ацетил-СоА) (а) 1,25-10-< М (б)—8.5Х X 10-5 м (в) —3,5-10-5 м

Наличие или отсутствие сопутствующей молекулярной реакции с участием от 10 до 50% продукта,в зависимости от углеводорода в настоящее время не может быть ни доказано, ни опровергнуто. Действительно, невозможно объяснить, каким образом пропилен и окись азота дают одинаково низкие предельные скорости разложения при добавлении к различным углеводородам, если исключить, что остаточная реакция носит иной характер и, поэтому она, возможно, является молекулярной. Существует, однако, расхождение между опытами по ингибированию и фотохимическими исследованиями, так как в первом случае результаты указывают на то, что окись азота лишь в 10 раз более эффективна, чем пропилен, для удаления радикалов, во втором случае интересующее нас отношение значительно выше. Это отношение может быть измерено путем определения констант скорости реакций метил-радикалов, полученных фотохимически, раздельно с пропиленом и окисью азота. Устранению этих расхождений поможет дальнейшая экспериментальная работа-в условиях низких конверсий, которая даст более надежные экспериментальные данные. [c.27]

Исследование кинетики ингибированной полимеризации в этих условиях открывает интересные возможности для выяснения детального механизма ингибирования и определения кинетических констант элементарных реакций, рассмотренных в начале этой главы. Дополнительные сведения, которые могут быть получены при сопоставлении чисто кинетических данных с результатами измерений длины полимерных цепей, будут рассмотрены в следующем разделе. Зависимость скорости полимеризации от начальной концентрации ингибитора и других факторов, определяющих скорость реакции, была исследована в работах ряда авторов [6, 12— 15]. В дальнейшем изложении мы будем в основном придерживаться работ [6, 13]. [c.154]

Отметим две важные особенности, характеризующие конкурентное ингибирование константа Кг не должна зависеть ни от [I], ни от природы субстрата, использованного для ее определения. Поскольку К1 всегда является константой равновесия, при значениях Км, близких к Кг (в тех случаях, если структуры субстрата и ингибитора аналогичны), можно считать, что Км также является константой равновесия. [c.391]

Для идентификации механизма ингибирования и определения константы ингибирования часто применяют метод Диксона, откладывая значение 1/у от / при различных (рис. 2.64) [c.204]

Этот короткий обзор некоторых основных особенностей реакций автоокисления показывает сложность составляющих его процессов. Принимая цепной характер описанных реакций окисления, ясно видно, что любое вещество, способное давать свободные радикалы, будет потенциальным катализатором и любое вещество, превращающее активные радикалы в неактивные или в молекулы, будет потенциальным ингибитором. Однако разнообразие возможных реакций, охватывающих инициирование, обрыв, перекрещивание с разветвленными реакциями — истинными или вырожденными,— требует детальной интерпретации для каждой реакции окисления и затрудняет обобщения, которые, вероятно, могут быть ошибочными. Изучение катализа и ингибирования этих реакций окисления проводилось либо с практической целью, как в случае ингибирования нежелательных процессов окисления материалов при их хранении или использовании, так и для катализа определенных окислительных процессов, либо для разъяснения результатов кинетических измерений и оценки некоторых констант скоростей. Обе эти задачи будут проиллюстрированы примерами в следующих разделах. [c.452]

Использование аффинной хроматографии для определения, например, констант ингибирования ферментов, по-видимому, весьма перспективно. Данные об объемах элюатов, содержащих фермент, на колонке с иммобилизованным ингибитором, полученные при использовании различных концентраций ингибитора в растворе, позволяют определить константы ингибирования как для связанного ингибитора, так и для ингибитора в растворе. Метод детально рассмотрен в гл. 4. Большое преимущество этого метода состоит в том, что при использовании одного и того же ингибитора как для иммобилизации, так и для элюирования можно непосредственно сделать выводы о влиянии связей с носителем и природы носителя на изучаемое взаимодействие на основании совпадения или различий в определяемых величинах констант диссоциации. Следовательно, метод аффинной хроматографии открывает новые возможности не только для изучения взаимодействия биологически активных веществ, он перспективен также и для выяснения влияния микроокружения на образование этих комплексов. [c.19]

Величина Q рассчитывается из измерений, например, потен-ииала деполяризации мембраны, содержащей рецептор. Зависимость обратных величин 1/Q от 1/[L] может быть использована для графического определения Qmax и Ко так же, как это делается в ферментативной кинетике по методу Лайнувера — Берка. Константа ингибирования антагониста Кг тоже может быть получена аналогичным путем как из упомянутого графика обратных величин, так и из графика Диксона — зависимости 1/Q от [I], где [I]— концентрация ингибитора (антагониста). [c.247]

Одним из методов определения константы ингибирования продуктом (Кр) является метод Фостера — Ниманна [3]. Согласно этому [c.168]

Как следует из уравнения (16.22), если ApE- te < [Flo при определенных соотнощениях констант ингибирования (активации) могут наблюдаться как положительные, так и отрицательные кооперативные эффекты - в зависимости от того, какая форма катализатора - димерная или мономерная - более каталитически активна и более прочно связывает молекулы эффектора. [c.480]

В таблице 3 приведены кинетические данные для гидролиза этилового эфира К-ацетил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипоином в присутствии конкурентного ингибитора, метилового эфира М-ацетил-П-фенилаланил-Ь-аланина. Определить значение константы ингибирования фермента ОО-дипептидом, если начальная концентрация субстрата и начальное время реакции неизвестны. Определение концентрации непрореагировавшего субстрата в ходе ферментативной реакции проводилось в каждом случае через равные промежутки времени. [c.172]

Достаточно убедительное доказательство гетерогенного механизма ингибирования получено в работе [89], в которой сопоставлялись огнетушащие концентрации различных солей определенной дисперсности для тушения метано-воз-душных смесей, а также константы скорости гетерогенной рекомбинации атомов кислорода и водорода на поверхности солей. Огнетушащую эффективность измеряли методом флегматизации, т. е. установлением пиковой концентрации потока порошка, подаваемого сверху навстречу распространяющемуся пламени метана в воздухе в стандартной трубе для определения пределов воспламенения. [c.115]

Лодставляя в выражения (8.28), (8.29) значения Ут и Кт(кат определенные из начальных скоростей ферментативной реакции, можно найти величину константы ингибирования фермента продуктом реакции. [c.180]

Если рассматривать поверхность катализатора как набор определенного числа активных центров S°, способных образовывать химические связи с адсорбироваными частицами, то можно ожидать, что вещества, которые могут вступать в реакцию с активными центрами катализатора, будут ингибировать процесс. При этом эффективность ингибирования будет зависеть от относительного давления адсорбатов и их констант сорбции. Рассмотрим в качестве примера простую ленгмюровскую сорбцию двух сорбатов АиВ на активных центрах поверхности S° [c.543]

Рис. 40. Определение константы неконкурентного ингибирования гидролиза бутирилхолина, катализируемого холинэстеразой

В таблице 7 приведены кинетические данные для гидролиза бромацетил-ВЬ-фениллактата, катализируемого карбоксипептидазой [7]. Найти значение константы конкурентного ингибирования продуктом реакции, если значения йкат и Кт(кат), определенные из начальных скоростей ферментативной реакции, равны 57,4 сек и 1,6 10 М соответственно. [c.174]

Рис. 88. Применение метода Фостера — Ниманна для определения константы конкурентного ингибирования пенициллинамидазы продуктами ферментативного гидролиза бензилпенициллина

Определение константы скорости инактивации фермента ротено-ном. Выделяют препарат Кейлина—Хартри, Кювету рН-метра (объ-<емом 4,5 мл) заполняют средой измерения активности (п. 2) и добавляют НАДН до конечной концентрации в кювете, равной 1 мМ. В кювету погружают отмытый рН-электрод, через 2—3 мин вносят 50 мкл суспензии Кейлина—Хартри ( — 25 мг/мл) и регистрируют изменение pH в ходе НАДН-оксидазной реакции. По ходу реакции в кювету вносят ротенон (0,1 мкМ) и наблюдают ингибирование ферментативной активности, связанное с образованием каталитически неактивного комплекса фермент-ротенон. Внося ингибитор в различных концентрациях (0,025 0,05 0,075 0,1 0, 5 мкМ), определяют зависимость скорости инактивации от концентрации ротенона и рассчитывают величину константы второго порядка скорости инактивации фермента ингибитором. [c.441]

ОТ интенсивности света [25, 26] . Чтобы из этих значений т определить константу скорости к, пользовались двумя различными методами а) Спектрофотометрически измеряли концентрацию атомов иода в фотостационарном состоянии при непрерывном освещении, при том же наборе интенсивностей [28]. При сильном освещении раствора иода дугой от угольных электродов наблюдалось некоторое уменьваение оптической плотности, которое приписывали диссоциации молекул иода на атомы. Концентрация атомов (Г) , найденная таким образом, была порядка 10 М. Было найдено, что эта концентрация примерно пропорциональна корню квадратному из интенсивности света. Используя уравнение (7.33), нашли, что к равна 1,1-10 л-молъ -сек . Учитывая трудности определения концентрации атомов, эту величину следует рассматривать как предварительную, б) В тех же условиях методом ингибирования была измерена скорость инициирования i г. Принцип этого метода заключается в том, что атомы иода количественно реагируют с аллилиодидом в присутствии кислорода, причем каждый атом дает одну молекулу иода, так что можно определить число атомов иода, образованных в условиях опыта в данное время. Был найден также квантовый выход как отношение к измеренной скорости поглощения энергии. [c.146]

Из отношения В А можно найти отношение А инг/ ст и, если /сст известна, можно также вычислить константу скорости реакции ингибирования. Из величин В, соответствующих различным температурам, можно найти энергию активации реакции ингибирования, если, конечно, имеются сведения о константах зарождения и развития цепей. Наиболее простым путем определения энергии активации реакций ингибирования оказалось вычисление ее из зависимости отношений В А от температуры. Разработанный метод прямой позволил вычислить на основании экспериментальных данных для заторможенного крекинга алканов энергии активации реакций торможения цепей на различных ингибиторах и энергию активации захвата радикалов СНз стенками ( инг = 3—8 ккал1молъ и ст, снз ккал1молъ) [33]. [c.353]

Результаты анализа ингибирующей способности двух различных ингибиторов в смеси (табл. 1) свидетельствуют об отсутствии взаимодействия между ними и возможности их индивидуального определения. Найденные значения /с, и / совпадают с соответствующими значениями, полученными в реакции инициированного окисления этилбензола [13] и работе [14], Если каждьп ингибитор в смеси расходуется независимо и константы скорости ингибирования k для них различаются достаточно существенно, то вначале преимущественно расходуется сильный ингибитор, а затем — более слабый. В таком случае кинетическая кривая, описываемая уравнением (V), состоит из нескольких участков, каждый из которых в полулогарифмических координатах пред- [c.125]

При обсуждении метода удаления фосфата обработкой известью Меррим и Джорден отмечают, что фосфат удаляется лучше, если процесс образования карбоната кальция ингибирован. К сожалению, эти авторы использовали неточные значения растворимости карбоната кальция, который образуется в результате добавления извести к сточным водам. Тем не менее они сделали вывод, что для характеристики реакций осаждения, вызванных добавками извести, могут быть использованы равновесные модели или модели неизменного состояния. Как будет показано ниже, использование таких моделей для расчета процесса образования карбоната кальция в сточных водах может привести к большим ошибкам. Так, обычные концентрации определенных примесей, например фосфата, могут снизить константу скорости образования карбоната кальция па несколько порядков и быть причиной успешной или неудачной обработки сточной воды известью. [c.28]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология