Глюкоза дегидрогеназа

В качестве сопрягающих ферментов часто используют дегидроге-назы и их коферменты в окисленной или восстановленной форме. Например, активность гексокиназы определяют в системе, содержащей дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата и НАДФ. Скорость восстановления НАДФ соответствует скорости гексокиназной реакции. Иногда используют системы двойного или тройного сопряжения, однако конечным звеном такой системы является соответствующая дегидрогеназа (например, при определении активности фосфофруктокиназы, креатин-киназы). При определении активности в сопряженной системе следует учитывать ряд условий. [c.208]

Активность гексокиназы определяют энзиматическим методом. В качестве сопрягающего фермента в реакционную среду добавляют дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата и НАДФ. Ферментативную реакцию [c.216]

Дегидрогеназа глюкозо-6-фосфата (кристаллический препарат). [c.217]

Эта чувствительная реакция на восстанавливающие сахара позволяет различать а-кетолы и простые альдегиды. Порядок активности участия в этой реакции следующий фруктоза>глюкоза>лактоза> >мальтоза>н-масляный альдегид. Реактив используется также для определения дегидрогеназы в тканях, клетках и бактериях, при изучении прорастания семян и для определения кортизона. [c.541]

Глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназа — 18 Е/мл (коммерческий препарат). В процессе работы хранится в ледяной бане. [c.41]

Концентрацию АТФ измеряют в сопряженной энзиматической системе с гексокиназой и дегидрогеназой глюкозо-6-фосфата по количеству образующегося НАДФН по следующей схеме [c.294]

Глюкоза подвергается действию АТФ и превращается в глюко-зо-6-фосфат. Это соединение под влиянием фермента (оксоизоме-разы) перестраивается так, что образуется фруктозо-6-фосфат. Повторное действие АТФ переводит его в фруктозо-1,б-дифосфат. Для этого требуется участие фермента — фосфофруктокиназы. Фермент альдолаза разрывает шестичленную цепь атомов углерода, так что образуются трехуглеродные соединения — фосфогли-цериновый альдегид и фосфодиоксиацетон (он под действием фермента триозофосфатизомеразы переходит в фосфоглицериновый альдегид). Далее на фосфорилированный глицеральдегид воздействует важный фермент — дегидрогеназа. Активная группа этого фермента, переносящая водород, построена по тому же общему типу, по какому построены и фрагменты нуклеиновых кислот она содержит органические основания, остатки углевода рибозы и фосфатную группу и обозначается НАД. [c.367]

Дегидрогеназа глюкозо-6-фосфата. [c.228]

Мд(СНзСОО)2 0,5 мМ фруктозо-1,6-дифосфат 10 ед/мл фосфоглюкомутазы. Реакцию начинают добавлением 2 мМ глюкозо-1-фосфата. Инкубируют при 38° С в течение 10—15 мин. Останавливают реакцию нагреванием в течение 15 мин при 100° С. Белок удаляют центрифугированием. В супернатанте определяют количество образовавшегося глюкозо-1,6-дифосфата. Для этого глюкозо-1,6-дифосфат превращают в глюкозо-6-фосфат 10-минутным гидролизом в 0,1 н. растворе НС1 при 100° С. Раствор нейтрализуют и определяют в нем глюкозо-6-фос-фат с помощью дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата или после щелочного гидролиза. [c.232]

S. Дегидрогеназа глюкозо-6-фосфата — коммерческий препарат (разводят перед использованием 100 мМ трис-НС буфером, pH 7,5, до конечной концентрации 60 инт. ед./мл). [c.355]

Типичная реакция катализируется УДФ-О-глюкозо-дегидрогеназой с образованием УДФ-В-глюкуроновой кислоты. Реакция пеобрати] [а и требует участия двух молекул НАД не имеется никаких данных об участии какого-либо наполовину окисленного (двухэквивалентного) промежуточного продукта. [c.309]

Аэробные дегидрогеназы, для которых единственным акцептором водорода служит молекулярный кислород, называются оксида з а м и. Отнимая водород от окисляемого субстрата и передавая его кислороду воздуха, оксидазы могут образовывать воду или перекись кислорода. Из оксидаз важную роль играют полифенолокси-даза и глюкозооксидаза, окисляющие соответственно полифеноль-ные соединения (например, пирокатехин в хинон) и глюкозу в глюконовую кислоту. [c.117]

Активность фосфоглюкомутазы может быть определена двумя ме-т-одами химическим, основанным на определении убыли субстрата реакции, и энзиматическим — в сопряженной системе, содержащей помимо фосфоглюкомутазы и глюкозо-1-фосфата также НАДФ и дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата. Последний фермент используется в избытке, и скорость реакции, катализируемой фосфоглюкомутазой, определяют по нарастанию НАДФН. [c.227]

Для определения активности (при любом методе) препарат фермента подготавливают для работы, активируя его в среде, содержащей 1 мМ. Mg ls и 30 мМ. гистидин (или имидазол). Смесь инкубируют 10—20 мин при 0° С. Предварительно растворы фосфоглюкомутазы л сопрягающего фермента (дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата) обессоливают на колонке с сефадексом G-25 (тонкий). [c.227]

Открытие О. Варбугом в 1931 фермента глюкозо-6-фос-фат-дегидрогеназы, катализирующего первую р-цию П. ц., сделало возможным его полную расшифровку, к-рую осуществили Ф. Дикенс, Ф. Липман, Э. Рэкер и Б. Хорекер. [c.465]

В спектрофотометрическую кювету объемом 3 мл помещают следующие компоненты (указаны конечные концентрации) 40 мМ трис-НС1 буфер (pH 7,5), 2 мМ глюкозо-1-фосфат, 1 мкМ глюкозо-1,6-дп-фосфат, 0,2 мМ НАДФ, 10 мМ M.g l2, 0,5 ед/мл дегидрогеназы глюко-зо-6-фосфата (в объеме 50 мкл) и 0,02 ед/мл (в объеме 50 мкл) фосфоглюкомутазы. Реакцию начинают добавлением фосфоглюкомутазы. Смесь перемешивают и регистрируют нарастание оптической плотности при 340 нм. [c.228]

Активность глюкозофосфатизомеразы может быть определена двумя методами химическим — по измерению образующегося в прямой реакции фруктозо-6-фосфата (количество фруктозо-6-фосфата определяют по фруктозе) и энзиматическим — по измерению образующегося глюкозо-6-фосфата в обратной реакции (количество глюкозо-6-фосфата определяют в сопряженной системе с помощью дегидрогеназы глюкозо-б-фосфата). Скорость ферментативной реакции регистрируют спектрофотометрически по нарастанию НАДФН (см. с. 7). [c.233]

Примечание. Если в препарате дегидрогеназы глюкозо-6-фос-фата имеется примесь дегидрогеназы-6-фосфоглюконата, при энзиматическом методе определения активности фосфоглюкозоизомеразы образуется 6-фосфоглюконат — конкурентный ингибитор фермента. Учитывая количество образовавщегося б-фосфоглюконата, вносят поправку при расчете активности фосфоглюкозоизомеразы. [c.234]

В спектрофотометрическую кювету вносят следующие компоненты (указаны конечные концентрации) 50 мМ трис-НС1, pH 7,2 1,0 мМ АДФ 30—10 мМ Мд(СНзСОО)г 2 мМ глюкозу 0,25 мМ НАДФ гексокиназу 0,5 ед/мл дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата 0,5 ед/мл, креатинкиназу. Следят за изменением оптической плотности если из- [c.294]

Определение активности фруктозо-1,6-дифосфатазы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшегося фруктозо-6-фосфата. Метод основан на использовании системы двойного ферментного сопряжения с участием глюкозо-6-фос-фатизомеразы и дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата согласно схеме [c.355]

Определение в супернатанте глюкозо-6-фосфата проводят энзиматическим методом в системе с дегидрогеназой глюкозо-6-фосфата согласно схеме (с. 41). За ходом реакции следят на спектрофотометре по увеличению оптической плотности при 340 нм в результате восстановления НАДФ. Показания прибора регистрируют после доведения реакции до конца. [c.372]

Состав реакционной среды объемом 3 мл трис-НС1 буфер 50 мМ, pH 7,5 НАДФ — 1 мМ, дегидрогеназа глюкозо-6-фосфата — 1 инт. ед. в пробе, супернатант, содержащий глюкозо-6-фосфат, — 0,5—1 мл. [c.372]

Нарушения функционирования нек-рых ферментов П.ц. приводят к развитию тяжелых заболеваний человека. Недостаточность глюкозо-б-фосфат-дегидрогеназы в эритроцитах служит причиной лек. гемолитич. анемии, а снижение активности транскетолазы в результате нарушения ее способности связывать тиамин приводит к развитию нервно-психич. расстройства-синдрома Вернике-Корсакова. [c.465]

Это был один из первых примеров, иллюстрирующих способность фермента делать выбор между двумя идентичными атомами в прохи-ральном центре (гл. 6, разд. Г, 2). Два атома водорода в 4-м положении NADH были обозначены как Нд (ныне называемый npo-R) и Нч (npo-S), а две стороны никотинамидного кольца — как А и В. Алкогольдегидрогеназа всегда удаляет водородный -атом На (npo-R). Малат-, изоцитрат-, лактат- и D-глицератдегидрогеназы избирают этот же атом водорода [70]. Между тем дегидрогеназы, действующие на глюкозо-6-фосфат, глутамат, 6-фосфоглюконат и 3-фосфоглицери-новый альдегид, удаляют /гро-5-водород > [c.243]

Реакция, сходная с той, которую катализирует глицеральдегид-З-фосфат—дегидрогеназа, катализируется глюкозо-6-фосфат—дегидрогеназой. Именно этот фермент первоначально привлек к себе внимание Варбурга и привел к открытию NADP+. Субстратом этого фермента служит не свободный альдегид, а циклическая форма полуацеталя, которая окисляется в лактон. Затем лактон гидролизуется до 6-фосфо-глюкоиата. [c.248]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология