Фосфофруктокиназа

В качестве сопрягающих ферментов часто используют дегидроге-назы и их коферменты в окисленной или восстановленной форме. Например, активность гексокиназы определяют в системе, содержащей дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата и НАДФ. Скорость восстановления НАДФ соответствует скорости гексокиназной реакции. Иногда используют системы двойного или тройного сопряжения, однако конечным звеном такой системы является соответствующая дегидрогеназа (например, при определении активности фосфофруктокиназы, креатин-киназы). При определении активности в сопряженной системе следует учитывать ряд условий. [c.208]

Фосфорилирование фруктозо-6-фосфата F6P, катализируемое фосфофруктокиназой PFK. [c.40]

Механизм реакции. Общий химический механизм, используемый для объяснения гликолитических колебаний, был сформулирован Хиггинсом (56] на основе уже известной химии фосфофруктокиназы и связанных с нею гликолитических интермедиатов [c.34]

Малкова и др. [11] провели моделирование открытой двух субстратной реакции, катализируемой фосфофруктокиназой Е. соИ, и определили параметры, при которых наблюдаются колебания. [c.125]

Фосфофруктокиназа катализирует фосфорилирование фруктозо- [c.237]

Фосфорилирование фермента не отражается на ферментативной активности при pH 8,0. Однако фосфорилирование белка оказывает влияние на аллостерические свойства фермента повышается чувствительность к ингибированию АТФ и цитратом, но снижается чувствительность к активирующему действию АМФ и фруктозо-2,6-дифосфата. Предполагают, что фосфорилирование индуцирует конформацион-ные изменения, способствующие смещению равновесия между двумя формами фермента активной и неактивной. При связывании АТФ в ингибиторном центре также происходит смещение равновесия в сторону неактивной конформационной формы фосфофруктокиназы. [c.238]

Определение активности фосфофруктокиназы [c.239]

Активность фосфофруктокиназы можно измерить двумя методами по скорости образования фруктозо-1,6-дифосфата (I) или АДФ (И). В обоих случаях количество продукта ферментативной реакции определяется по окислению НАДН. [c.239]

Ниже приводится описание обоих методов измерения активности фосфофруктокиназы. [c.239]

Вторым сигналом, оповещающим клетку о слишком высокой скорости процессов катаболизма, является выход из митохондрий накопившегося цитрата. Это имеет существенное значение для синтеза жирных кислот одновременно цитрат действует как отрицательный эффектор на фосфофруктокиназу (рис. 9-3) и таким образом снижает общую скорость гликолиза. При понижении концентрации АТР и накоплении ADP последний служит положительным эффектором для окисления изоцитрата, вызывая в результате быстрое снижение концентрации цитрата. [c.325]

Аллостерические свойства фосфофруктокиназы [c.240]

Глюкоза подвергается действию АТФ и превращается в глюко-зо-6-фосфат. Это соединение под влиянием фермента (оксоизоме-разы) перестраивается так, что образуется фруктозо-6-фосфат. Повторное действие АТФ переводит его в фруктозо-1,б-дифосфат. Для этого требуется участие фермента — фосфофруктокиназы. Фермент альдолаза разрывает шестичленную цепь атомов углерода, так что образуются трехуглеродные соединения — фосфогли-цериновый альдегид и фосфодиоксиацетон (он под действием фермента триозофосфатизомеразы переходит в фосфоглицериновый альдегид). Далее на фосфорилированный глицеральдегид воздействует важный фермент — дегидрогеназа. Активная группа этого фермента, переносящая водород, построена по тому же общему типу, по какому построены и фрагменты нуклеиновых кислот она содержит органические основания, остатки углевода рибозы и фосфатную группу и обозначается НАД. [c.367]

Выделение и очистка фосфофруктокиназы из скелетных [c.241]

Солюбилизация АТФ. Промытый осадок растворяют в 3 мл (в расчете на 400 г мышц, использованных для экстракции фермента) 10 мМ раствора АТФ, pH 7,2. Нерастворившийся белок отбрасывают центрифугированием при 11 500 в течение 10 мин. Супернатант, содержащий фосфофруктокиназу, разливают на несколько порций и хранят при —70° С. [c.243]

Стадии, в к-рых осуществляются необратимые р-ции (П-IV), играют существ, роль в регуляции скорости Г. Наиб. важный регуляторный фермент-фосфофруктокиназа, катализирующая р-цию III ее активность ингибируется [c.580]

Фосфофруктокиназа — один из ключевых ферментов, регулирующих процесс гликолиза в целом. Активной формой фермента является тетрамер, состоящий из 4 субъединиц с молекулярной массой 83 000 Да каждая. В зависимости от условий тетрамеры могут превращаться в высокополимерные агрегаты или диссоциировать на неактивные димеры и мономеры. Фосфофруктокиназа является аллостерическим ферментом. К числу аллостерических эффекторов относятся субстраты (АТФ, фруктозо-6-фосфат) и продукты реакции (АДФ, фруктозо-1,6-дифосфат), а также такие метаболиты, как АМФ, цАМФ, цитрат, фруктозо-2,6-дифосфат, фосфокреатин, 3-фосфоглицерат, 2-фосфо-глицерат, фосфоенолпируват, ионы МН4+, К+, неорганический фосфат и др. [c.238]

Фруктозо-6-фосфат под действием фермента фосфофруктокиназы присоединяет по месту первого углеродного атома второй остаток фосфорной кислоты за счет АТФ и превращает в фруктозо-1,6-днфосфат. Эта реакция практически необратима. Молекула сахара переходит в оксоформу и становится лабильной, способной к дальнейшему превращению, так как ослабляется связь между третьим н четвертым углеродными атомами. [c.205]

Колебания типа предельного цикла в основном относятся к колебаниям концентрации пары F6P—FDP. Кроме того, периодически меняется концентрация глюкозы, превращающейся в фруктозо-6-фосфат F6P на первой стадии по реакции первого порядка. На второй стадии активированная форма фосфофруктокиназы действует как фермент, а фруктозо-1,6-дифосфат FDP проявляет на этой стадии активирующее действие. Конечным продуктом реакции является глицеральдегидфосфат GAP. [c.34]

Модель 2. Предложенная Сельковым [103] модель гликолитической системы основана на превращениях фосфофруктокиназы [c.35]

Модель 5. Сосуществование устойчивого предельного цикла и устойчивой особой точки. В этой модели Дынни-ка, Селькова и Семашко [За] рассматриваются гликоли-тические стадии, включающие реакции, катализируемые фосфофруктокиназой (PFK), аденилаткиназой (ADK) и обобщенным ферментом Е . [c.40]

Активирование фосфофруктокиназы PFK адеиозиимоно-фосфатом АМР. Скорость введения фруктозо-6-фосфата F6P равна vi. [c.40]

Голдбеттер и Вениератос [85] провели анализ влияния кооперативности действия ферментов в математической модели колебательной гликолитической реакции с активированием продуктом. Ими было установлено соотношение между неустойчивостью и значением коэффициента Хилла в аллостерической модели для фосфофруктокиназы. [c.125]

Глюкозофосфатизомераза (КФ 5 3.1.9) катализирует обратимое превращение глюкозо-6-фосфата и фруктозо-6-фосфата. Равновесие устанавливается при соотношении альдозы к кетозе приблизительно равном 2 1. Для проявления активности фермента не требуется присутствия ионов металлов или каких-либо кофакторов. Реакция изомеризации легко протекает в диализованных экстрактах мышц. Отсутствие АТФ в таких экстрактах делает невозможным дальнейшее превращение фруктозо-6-фосфата под влиянием фосфофруктокиназы. О процессе изомеризации судят по изменению содержания глюкозо-6-фосфата и фруктозо-6-фосфата в процессе инкубации. [c.61]

Кристаллический препарат фосфофруктокиназы растворяют в 50 мМ Na-p-глицерофосфате, содержащем 0,2 мМ ЭДТА, 0,2 мМ ди-титреитол и 0,1 мМ АТФ, pH 8,0 концентрация фермента 2—3 ед/мл. Вместо триС НС] буфера, pH 8,0, можно использовать трис-фосфатный, глицилглицин-Ыа-р-глицерофосфатный, триэтаноламиновый буферные растворы. [c.240]

Для определения количества образующегося фруктозо-1,6-фосфата вместо а-глицерол-З-фосфатдегидрогеяазы может быть использована дегидрогеназа 3-фосфоглицеринового альдегида. В этом случае активность фосфофруктокиназы измеряют по скорости восстановления НАД+ (см. определение активности глицеральдегид-З-фосфатдегидро-геназы на с. 253). [c.240]

Перекристаллизация. Кристаллическую суспензию фосфофруктокиназы центрифугируют. Кристаллы растворяют в Ыа-р-глицерофос-фате —ЭДТА—АТФ, pH 7,2. Нерастворившийся осадок отбрасывают после центрифугирования, а супернатант используют для повторной кристаллизации. Кристаллы фосфофруктокиназы собирают центрифугированием, суспендируют в небольшом объеме Ыа-р-глицерофосфатного буфера, pH 7,2, содержащего 2 мМ ЭДТА, 2 мМ АТФ и сульфат аммония при 40%-ном насыщении. В этом растворе фермент хранят при 4° С. [c.242]

Фракционирование сульфатом аммония. К супернатанту медленно добавляют сухой сульфат аммония ири постоянном перемешивании до 45%-НОГО насыщения. Продолжают перемешивание в течение часа и оставляют на ночь. Центрифугируют 50 мин при lOOOOg. Осадок отбрасывают. К супернатанту добавляют сульфат аммония до 55%>-ного насыщения. Продолжают перемешивание в течение часа. Осадок, содержащий фосфофруктокиназу, собирают центрифугированием (30 мин при ISOOOg ) и осторожно суспендируют в минимальном объеме буфера А. [c.244]

Гель-хроматография. Раствор фосфофруктокиназы наносят на колонку (4x50 см), заполненную биогелем А—1,5т, предварительно уравновешенную буфером Б. Этим же буфером проводят элюцию белка с колонки. Во фракциях измеряют концентрацию белка и ферментативную активность. Фракции белка, содержащие наибольшую активность, объединяют. К объединенному раствору добавляют сульфат аммония до 557п-ного насыщения. Продолжают перемешивание в тече- [c.244]

Повторная гель-хроматография. Раствор фосфофруктокиназы наносят на колонку (2,2x60 см), заполненную биогелем А—1,5т, уравновешенную буфером А. Фермент элюируют тем же буфером. Фракции с наибольшей удельной активностью объединяют. [c.245]

Скорость превращения веществ в альтернативных метаболических путях, а значит и их предпочтительная направленность решающим образом зависят от особенностей функционирования ферментов субстратного цикла. Для таких ферментов характерна, как правило, реци-прокная регуляция с участием аллостерических эффекторов. В случае рассматриваемого субстратного цикла эффекторами являются АМФ — ингибитор фруктозо-1,6-дифосфатазы и активатор фосфофруктокиназы, а также цитрат-ион, являющийся активатором фруктозо-1,6-дифосфатазы и ингибитором фосфофруктокиназы. [c.354]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.325 , c.337 ]

Аминокислоты Пептиды Белки (1985) -- [ c.387 ]

Начала органической химии Книга первая (1969) -- [ c.463 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.329 , c.333 , c.342 , c.358 , c.553 , c.554 , c.555 ]

Химия углеводов (1967) -- [ c.367 , c.368 ]

Биологическая химия (2002) -- [ c.216 ]

Биохимия (2004) -- [ c.88 , c.244 ]

Теоретические основы биотехнологии (2003) -- [ c.165 ]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.107 ]

Биохимия растений (1966) -- [ c.122 ]

Общая микробиология (1987) -- [ c.225 , c.226 , c.249 , c.270 , c.493 , c.494 ]

Метаболические пути (1973) -- [ c.14 , c.29 , c.61 ]

Биологическая химия Издание 4 (1965) -- [ c.257 , c.267 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.280 , c.281 , c.286 ]

Биохимия растений (1968) -- [ c.0 ]

Неорганическая биохимия Т 1 _2 (1978) -- [ c.683 ]

Химия биологически активных природных соединений (1976) -- [ c.68 ]

Начала органической химии Кн 1 Издание 2 (1975) -- [ c.434 ]

Биохимия Издание 2 (1962) -- [ c.191 , c.280 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.109 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.182 , c.183 , c.185 , c.197 , c.207 , c.215 , c.216 , c.218 , c.219 ]

Проблема белка Т.3 (1997) -- [ c.513 ]

Генетика человека Т.3 (1990) -- [ c.16 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.182 , c.183 , c.185 , c.197 , c.207 , c.215 , c.216 , c.218 , c.219 ]

Биологические мембраны Структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами (2000) -- [ c.82 , c.83 , c.85 ]

Нейрохимия (1996) -- [ c.157 , c.159 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.287 ]

Основы ферментативной кинетики (1979) -- [ c.163 , c.185 , c.197 ]

Иммуноферментный анализ (1988) -- [ c.21 ]

Методы очистки белков (1995) -- [ c.297 , c.298 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.341 , c.342 ]

Структура и механизм действия ферментов (1980) -- [ c.195 , c.196 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.109 ]

Биологическая химия (2004) -- [ c.255 , c.275 , c.527 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.30 , c.33 , c.34 , c.284 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология