Экстракция ферментов

Для выделения ацетилхолинэстеразы из эритроцитов используют метод экстракции фермента из стромы п е-лочным буфером в присутствии нейтрального детергента Твин-20 с последую- [c.53]

Перед экстракцией ферментов исходное сырье подвергают измельчению с целью разрушения клеток. Для этого применяют лабораторные и промышленные мельницы (вальцы, дезинтеграторы, дисмембраторы), а также высокое давление, ультразвук, чередующиеся замораживание и оттаивание. [c.168]

Солюбилизация АТФ. Промытый осадок растворяют в 3 мл (в расчете на 400 г мышц, использованных для экстракции фермента) 10 мМ раствора АТФ, pH 7,2. Нерастворившийся белок отбрасывают центрифугированием при 11 500 в течение 10 мин. Супернатант, содержащий фосфофруктокиназу, разливают на несколько порций и хранят при —70° С. [c.243]

Поверхностное культивирование обеспечивает наиболее близкие к физиологическим условия роста гриба. Однако рост гриба происходит обычно медленно из-за отсутствия эффективного массопереноса и стерических ограничений. Трудно наладить эффективный теплообмен, в особенности если используются толстые слои среды. Ферментный препарат малоактивен, поскольку содержит в основном мицелий и остатки среды, поэтому для его обогащения проводят экстракцию ферментов из поверхностной культуры водой с последующей сушкой или осаждением ферментов из экстракта органическими растворителями. Наконец, поверхностные культуры образуют, как правило, большое количество спор, обладающих аллергическим действием. [c.108]

Экстракция фермента из ацетонового порошка печени. Препарат готовят в количестве, достаточном для работы всей группы. Для этого к 200 мг ацетонового порошка печени добавляют 15 мл глицинового буфера и оставляют в термостате при 37 °С на 20 мин для экстрагирования фермента. При этом колбу периодически встряхивают. Затем смесь фильтруют и экстракт используют для определения активности аргиназы. [c.47]

Эти методы служат для разрушения клеток и выделения ферментов в раствор. Если фермент локализован в органеллах, метод может быть использован только при условии, что органеллы также разрушаются. С другой стороны, может понадобиться предварительное выделение самих органелл, что позволит избавиться от загрязнения цитоплазматическими ферментами перед экстракцией фермента из органелл. Для этого требуется менее сильное воздействие. Предварительное растворение поверхностных коллагеновых и целлюлозных структур препаратами гидролитических ферментов позволяет в дальнейшем разрушать клетки более мягкими способами, сохраняя целостность органелл. Примером подобной методики служит получение препаратов митохондрий из таких тканей, как скелетная или сердечная мышцы, под действием протеолитических ферментов [6]. Однако эта методика применима только для получения препаратов в небольших масштабах и больше подходит для. метаболических исследований органелл, чем для очистки ферментов. Выход очищенных органелл может быть очень низким, поэтому во многих случаях лучше сначала разрушить всю ткань, а затем уже приступить к выделению нужного фермента из сложной смеси белков в экстракте. Таким образом, ферменты митохондрий и хлоропластов часто получают из тканевого гомогената, а не из выделенных органелл. [c.42]

Ход работы. К 50 мг порошка су хой почечной ткани добавляют 1 мл фосфатного буфера с pH 7,6 и оставляют для экстракции фермента на 20 минут, время от времени встряхивая. [c.194]

Схема производства очищенных ферментных препаратов показана на рис. 23. Экстракция ферментов из сухой культуры производится водой при температуре 20—25°С в диффузионной батарее таким образом, чтобы получать вытяжки, содержащие 30—35% экстрактивных веществ. Затем эти вытяжки фильтруются с помощью друк-фильтра. Диализом против водопроводной воды за 20—24 ч из вытяжки удаляют 55—60% балластных веществ, а после этого ферменты (белок) осаждают изопропиловым [c.178]

Обычно для экстракции ферментов из куль тур грибов применяют диффузионный способ Полного извлечения здесь добиваются много кратным экстрагированием культуры водой При этом, кроме ферментов, в раствор пере ходят многие растворимые продукты и примеси — различные про дукты гидролиза, углеводы, органические кислоты, соли и т. п В заводских условиях процесс экстрагирования осуществляется в диффузионной батарее, состоящей из 8—10 диффузоров, которые соединяются коммуникациями для экстракта и воды. [c.186]

Проведение автолиза без прибавления воды к ткани приводит к образованию в растворе высокой концентрации продуктов распада белка, которые оказывают сильное стабилизирующее влияние на фермент. Последний, находясь в концентрированном автолизате, защищен от денатурации гораздо больше, чем при обычной экстракции фермента или проведении автолиза в более оводненной среде. [c.206]

Влияние электролитов на экстракцию ферментов [c.54]

Обработка жома, полученного после экстракции ферментов на батарее диффузоров, приводит к дополнительному извлечению некоторого количества амилазы, что подтверждает потери ферментов при диффузии. [c.55]

Сукцинат убихинон-редуктаза (СУР) катализирует окисление сукцината убихиноном. По данным электрофореза, в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия фермент состоит из 3 —4 полипептидов. Субъединицы с молекулярными массами 70 000 и 28 000 Да представляют собой собственно сукцинатдегидрогеназу, в субстратсвязывающем центре которой происходит дегидрирование сукцината низкомолекулярные компоненты комплекса И (м. м. ок. 15 000 Да) придают сукцинатдегидрогеназе реактивность по отношению к убихинону, чувствительность к специфическим ингибиторам и, по-видимому, принимают участие в связывании фермента с мембраной. Выделение препарата СУР основано на экстракции фермента из мембраны с помощью неионного детергента тритона Х-100 и концентрировании препарата охлажденным ацетоном. Дальнейшее фракционирование сульфатом аммония и очистка на кальдий-фосфатном геле позволяют получить фермент в высокоочищенном состоянии с каталитической активностью около 25 мкмоль окисленного сукцината в 1 мин на [c.423]

Для извлечения ферментов, находящихся в большей степени в адсорбированном на клеточных структурах состоянии, применяют измельчение тканей в гомогенизаторах и ступках с последующей экстракцией фермента из разрушенных клеток водой, слабыми солевыми растворами, спиртом, глицерином и другими реагентами. [c.134]

Обсуждая проблемы получения очищенных ферментов, правильнее рассмотреть отдельные технологические стадии, не связывая их в единую технологическую линию. В любом случае, однако, схема очистки сводится к 1) освобождению от нерастворимых веществ 2) освобождению от сопутствующих растворимых веществ 3) фракционированию, как правило, хроматографическими методами. В подавляющем большинстве случаев на первом этапе используют экстракцию фермента. [c.126]

Изменения называются конфигурационными, когда их вторичные и третичные структуры белков способны принимать различные геометрические очертания в зависимости от изменения клеточной среды (pH, температура, окислительно-восстановительный потенциал, ионная сила и т. п.) [151]. Это можно проиллюстрировать на примере катехолоксидазы винограда Vitis vi-nifera), которая представлена разными множественными формами в зависимости от условий экстракции фермента [85]. [c.45]

Если целевой продукт представляет собой растворимый Метаболит или он синтезируется внутри клетки и не секретируется вовне, то прибегают к другим методам выделения экстр)акцни, сорбции, осаждению, хроматографии, выделению с помощью мембран. Экстракцию проводят органическими растворителями из клеток (твердая фаза), например, антибиотика гризеофульвина ацетоном, или бензилпенициллина при pH 2,0—3,0 — бутил-ацетатом из культуральной жидкости после отделения клеток продуцента (система "жидкость-жидкость"), или, наконец, экстракция ферментов (в частности, пуллуланазы) в двуфазных водных системах, например, глюкана-декстрана и несовместимого с ним поли-этиленгликоля (ПЭГ-6000). [c.388]

Получение. Экстракция фермента из сердечной мышцы свиньи деминерй ли-эованной водой, обработка кальций-фосфатным шяем, двукратное осаждение сульфатом аммония и ацетоном, диализ против фосфатного буферного растврра -(pH — 7,5) и перекристаллизация. М, м. около 135 ООО. [c.201]

После разрушения клеток чаще всего проводят экстракцию фермента. Из животных и растительных тканей экстрагировать ферменты гораздо легче, чем из микроорганизмов. Их извлекают водой, буферными растворами, растворами нейтральных солей, органическими растворителями (ацетон, алифатические спирты и др.) в смеси с водой в различных соотношениях или безводными (диметилформалгид), иногда разбавленными щелочами, кислыми белковыми осадителями, например трихлоруксусной или пикриновой кислотами. Чаще всего применяют 2—10 объемов растворителя, выбирая pH в соответствии с зоной рН-устойчи-вости и с областью лучшей растворимости, которые являются характерными для каждого белка или даже для определенных групп белков. Проводят экстракцию чаще при охлаждении (2— 5°С), но более длительное время, или 2—3 ч при более высоких температурах (30—45°С). [c.141]

При экстракции ферментов на вибрационной мельнице добавлением электролитов (Na l, СаСЬ, Zn h) не удалось уменьшить разведение и получить более концентрированные растворы. [c.54]

Все стадии экстракции ферментов, очистки и концентрирования должны проводиться при 2—4 °С. Ввиду нестабильности восстанавливающих агентов, монотиоглицерина и меркаптоэтанола, их следует добавлять в буферы непосредственно перед использованием. NBr-активированная сефароза 4В неустойчива и должна немедленно вводиться в реакцию конденсации с лигандами. ой-Аманитин — чрезвычайно токсичное соединение и при работе с ним должны быть приняты специальные меры предосторожности. Особое внимание следует обратить на соблюдение [c.170]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология