Глюкозофосфатизомераза

Кристаллизация. После аффинной элюции можно провести кристаллизацию фермента. Элюат, содержащий глюкозофосфатизомеразу, диализуют в течение ночи против насыщенного сульфата аммония, приготовленного на 25 мМ триэтаноламине, содержащем 1 мМ ЭДТА и 0,1%-ный 2-меркаптоэтанол, pH 8,2. Осадок собирают центрифугированием и растворяют в том же буфере разводят до концентрации белка 10 мг/мл. К раствору белка медленно на холоду добавляют насыщенный раствор сульфата аммония до 48%-ного насыщения. Выпавший при этом аморфный осадок удаляют. Раствор белка оставляют а ночь при комнатной температуре для кристаллизации. [c.237]

При изучении влияния pH и температуры на максимальную скорость превращения 0-глюкоэо-6-фосфата в 0-фруктозо-6-фосфат под действием глюкозофосфатизомеразы [2] были найдены значения рК ионогенной группы активного центра фермента, равные 9,35+0,06 и 8,71+0,11 при температурах 30 и 40° С соответственно. Оценить значение теплоты ионизации найденной ионогенной группы и вычислить ошибку экспериментально определенной величины АЯион- [c.252]

Фосфоглюкомутаза (КФ 2.7.5.1) катализирует обратимое превращение глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат. Равновесие реакции сильно сдвинуто в сторону образования глюкозо-6-фосфата и устанавливается, когда около 95% фосфогексоз находится в форме глюкозоб-фосфата. Фермент относительно термостабилен и не инактивируется при нагревании до 65°С. Б задаче предлагается проследить за превращением глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат, используя мышечный экстракт, в котором предварительной термообработкой инактивирована глюкозофосфатизомераза. [c.60]

Глюкозофосфатизомераза (КФ 5 3.1.9) катализирует обратимое превращение глюкозо-6-фосфата и фруктозо-6-фосфата. Равновесие устанавливается при соотношении альдозы к кетозе приблизительно равном 2 1. Для проявления активности фермента не требуется присутствия ионов металлов или каких-либо кофакторов. Реакция изомеризации легко протекает в диализованных экстрактах мышц. Отсутствие АТФ в таких экстрактах делает невозможным дальнейшее превращение фруктозо-6-фосфата под влиянием фосфофруктокиназы. О процессе изомеризации судят по изменению содержания глюкозо-6-фосфата и фруктозо-6-фосфата в процессе инкубации. [c.61]

Глюкозофосфатизомераза катализирует обратимую реакцию изомеризации, в которой глюкозо-6-фосфат (альдоза) превращается во фруктозо-6-фосфат (кетозу). Реакция легко протекает в обоих направлениях, так как изменение свободной стандартной энергии невелико [c.232]

Глюкозофосфатизомераза является димером с молекулярной массой 132 000 Да состоит из двух идентичных субъединиц. После обработки 6 М гуанидин-НС1 молекула диссоциирует на субъединицы с молекулярной массой 62 000 Да. Фермент обладает высокой специфичностью по отношению к D-глюкозо-б-фосфату (i m=0,12 мМ) и D-фрук-тозо-6-фосфату (/( =0,07 мМ при 30° С, pH 8,2), не катализирует изомеризацию других фосфосахаров. [c.232]

Активность глюкозофосфатизомеразы может быть определена двумя методами химическим — по измерению образующегося в прямой реакции фруктозо-6-фосфата (количество фруктозо-6-фосфата определяют по фруктозе) и энзиматическим — по измерению образующегося глюкозо-6-фосфата в обратной реакции (количество глюкозо-6-фосфата определяют в сопряженной системе с помощью дегидрогеназы глюкозо-б-фосфата). Скорость ферментативной реакции регистрируют спектрофотометрически по нарастанию НАДФН (см. с. 7). [c.233]

М раствора триса, объем доводят до 10 мл водой, pH 8,3). Реакционная смесь в 1 мл содержит 50 мМ трис, pH 8,3, 4 мМ глюкозо-6-фосфат. Пробы инкубируют 1—2 мин при 37° С, после чего реакцию начинают добавлением глюкозофосфатизомеразы (в объеме 25— 50 мкл). Останавливают реакцию добавлением 8 н. НС1. Контрольную пробу инкубируют без фермента. Ферментативную реакцию измеряют в различные промежутки времени с интервалом 30 с. [c.233]

Примечание. Так как препараты фосфоцеллюлозы отличаются между собой, целесообразно предварительно установить количество ионообменника, необходимое для связывания фермента. Берут (в расчете на сухой вес) 5 г фосфоцеллюлозы, уравновешенной буфером А, и добавляют определенную порцию раствора белка. В элюате определяют активность глюкозофосфатизомеразы. Последующие порции белка добавляют до полного насыщения ионообменника ферментом. На основе этих данных рассчитывают количество фосфоцеллюлозы, требующееся для связывания всего фермента. Суспензию перемешивают 30—40 мин, после чего в элюате определяют ферментативную активность, чтобы убедиться в полноте адсорбции фермента. [c.237]

Ферменты (в скобках даны кодовые номера) I - гексокиназа (2.7.1.1) или глюкокиназа (2.7.1.2) IА -гликоген-фосфорилаза (2.4.1.1) 1В - фосфоглюкомутаза (2.7.5.1) 2 - глюкозофосфатизомераза (5.3.1.9) 3 - фосфофруктокиназа (2.7.1.11) 4 - фруктозобисфосфатальдолаза (4.1.2.13) 5 - триозофосфатизомераза [c.78]

Из разных клеток были выделены и очищены альдолазы неско.льких различных типов и свойства их были изучены. Наиболее тщательно исследована альдолаза из скелетных мышц кролика. Активная форма фермента представляет собой тример, состоящий из трех полипептидных цепей. Известно, что этот фермент в отсутствие альдотриозы катализирует обмен водорода в НгС — ОН-группе диоксиацетонфосфата и проявляет стереоспецифичность, противоположную стереоспецифичности триозофосфатизомеразы, которая обладает такой же стереоспецифичностыо и таким же механизмом действия, как и глюкозофосфатизомераза (реакция XI.4). Специфичность альдолазы из скелетных мышц кролика в отношении возможных субстратов свидетельствует о том, что диоксиацетонфосфат (и соответствующая часть молекулы гексозы) взаимодействует с ферментом высокоизбирательным [c.287]

Внутримолекулярные рксидоредуктазы катализируют взаимопревращения альдоз и кетоз. Например, триозо сфатнзомераза (К.Ф.5.3.1.1), которая обратимо превращает 3-фосфоглицериновый альдегид в диоксиацетонфосфат глюкозофосфатизомераза (К.Ф.5.3.1.9) превращает глюкозо-6- сфат во фруктозо- [c.105]

ДЛЯ ферментативных реакций. Число оборотов А -3-кетостероидизомеразы равно 2,8-10 с при 25° С и pH 7,0 [69). Отдельные стадии в каталитическом процессе должны протекать по крайней мере также быстро, как и реакция в целом, так что стадии переноса протона внутри фермент-субстрат-ного комплекса осуществляются быстрее, чем обмен протона с растворителем. Таким образом, чтобы объяснить наблюдаемое отсутствие обмена с растворителем, нет необходимости постулировать какой-либо механизм, защищающий активный центр от проникновения в него протонов растворителя. Числа оборотов глюкозофосфатизомераз [71] ле кат в диапазоне 2,5...6 -10 с . По порядку величин эти значения сравнимы с ожидаемыми скоростями обмена протона, так что частичный обмен протона с растворителем в этой реакции не представляется неожиданным. [c.171]

При количественном анализе аллостерической регуляции с помощью АТР, ADP и АМР в неочищенных экстрактах, содержащих глюкозофосфатизомеразу, важно не допускать значительных изменений концентрации Ф-6-Ф в результате изомеризации. Для этого можно добавить 0,2 М нейтрализованный раствор глюкозо-6-фос-фата (Г-6-Ф) и 20 ед. Г-6-Ф-изомеразы на 1 мл. В течение 1 ч при комнатной температуре в растворе будут находиться 0,05 М Ф-6-Ф и 0,15 М Г-6-Ф. За международную единицу принято количество фермента, которое фосфорилирует 1 мкмоль Ф-6-Ф в 1 мин в описанных выше условиях при 25 °С [ДАз4о-ь2- 6,22-10 = (микромоли в 1 мл)-2 = микромоли на кювету]. [c.398]

Предполагают, что в скелетных мышцах гликолитическая система стимулируется ионами, связывающимися с якорным белком подложки — тропонином С, Первый этап сборки комплекса — это, по всей вероятности, посадка фосфофруктокиназы на якорный белок. Остов ядра комплекса, так называемое ядрышко , образуют в мышечной ткани, кроме фосфофруктокиназы, альдолаза и глицеральдегидфосфатдегидрогеназа. В состав ядра входят глюкозофосфатизомераза, пируваткиназа, лактатдегидрогеназа и фосфоглицераткиназа. Остальные компоненты комплекса (фосфоглицеромутаза, енолаза, триозофосфатизомераза, глицерол-З-фосфатдегидрогеназа) занимают, очевидно, положения на периферии комплекса (рис. 21). [c.85]

Рис. 21. Этапы сборки комплекса ферментов гликолиза — якорный белок подложки 2 — глюкозофосфатизомераза 3 — фосфофруктокиназа 4 — альдолаза 5 — глицеральдегидфосфатдегидрогеиаза 6 — фосфоглицераткиназа 7 — фосфоглицеромутаза 8 — енолаза, 9 — пируваткиназа, 10 — лактатдегидрогеназа 11 — триозофосфатизомераза 12 — глицерол-З-фосфатдегидрогеназа. В скобках указано число молекул ферментов в состояниях I—IV комплекса

Поскольку глюкоза стабильное соединение, на ее активацию необходима затрата энергии, что осуществляется в процессе образования фосфорных эфиров глюкозы в ряде подготовительных реакций. Глюкоза (в пиранозной форме) фосфорили-руется АТР с участием гексокиназы, превращаясь в глюкозо-6-фосфат, который изомеризуется в фруктозо-6-фосфат с помощью глюкозофосфатизомеразы. Этот переход необходим для образования более лабильной фуранозной формы молекулы гексозы. Фруктозо-6-фосфат фосфорилируется вторично фосфофруктокиназой с использованием еще одной молекулы АТР. [c.137]

В регуляции соотношения между ПФП и гликолизом принимает участие ряд интермедиатов неорганический фосфат, 6-фосфоглюконовая кислота, эритрозо-4-фосфат. Недостаток неорганического фосфата подавляет гликолиз и активирует ПФП. 6-Фосфоглюконовая кислота служит ингибитором гликолитического фермента фосфофруктокиназы (глюкозофосфатизомеразы), что способствует функционированию ПФП. Эрит-розо-4-фосфат, являясь субстратом транскетолазной и транс-альдолазной реакций, может тормозить активность ферментов гликолиза и тем самым переключать превращения углеводов с гликолитического на пентозофосфатный путь. [c.170]

Фосфофруктокиназа, представляющая собой белок с М = 140000 у бактерий и от 360000—400000 (во всех случаях—тетрамер) до 800000 (гексамер или октамер) у эукариот, является самым медленным из всех ферментов, обслуживающих дихотомический распад углеводов. Эта практически необратимая реакция лимитирует весь процесс. В то же время активность глюкозофосфатизомеразы, например, в дрожжах, в 500 раз превышает активность фосфофруктокиназы и на 1—2 порядка выше, чем у других ферментов дихотомического распада, т. е. это один из самых быстрых ферментов обмена глюкозо-6-фосфата. Строение и механизм действия фосфофруктокиназы из термофильной бактерии детально изучены (рис. 111). [c.341]

Смотреть страницы где упоминается термин Глюкозофосфатизомераза: [c.232] [c.232] [c.233] [c.233] [c.234] [c.237] [c.51] [c.55] [c.119] [c.358] [c.119] [c.211] [c.295] [c.165] [c.543] [c.170] [c.176] [c.172] [c.181] [c.61] [c.86] [c.63] [c.141]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.91 , c.119 ]

Принципы структурной организации белков (1982) -- [ c.91 , c.119 ]

Теоретические основы биотехнологии (2003) -- [ c.165 ]

Генетика человека Т.3 (1990) -- [ c.18 , c.19 ]

Электрофорез в разделении биологических макромолекул (1982) -- [ c.7 , c.28 , c.286 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология