Биоавтография

К настоящему времени открыто очень много самых различных (и химически и биологически) антибиотиков, поэтому невозможно предложить какую-то универсальную систему для их хроматографии. Для обнаружения классических антибиотиков разработаны были в свое время химические цветные реакции, но обычно их обнаруживают методом биоавтографии. При разработке и идентификации новых антибиотиков стал традиционным метод определения их хроматографических спектров (профилей) посредством биоавтографии. Если установлено, что определенная среда проявляет свойства антибиотика по отноще-нию к какому-либо бактериальному штамму, то эту среДу или экстракт из нее хроматографируют в серии выбранных растворителей и подвергают хроматограммы (в виде полосок) био-автографическому обнаружению (прижимают полоски к пленке с культурой и определяют зоны, в которых подавляется рост бактерий). Значения Rf пятен соединений, проявляющих свойства антибиотика, измеряют во всех растворяющих системах и строят кривую зависимости Rf от используемой системы (на оси ставят номера систем). Соединяя нанесенные точки, получают ломаную линию, которую и называют хроматографическим спектром или профилем. Этого обычно достаточно для получения полной хроматографической характеристики или для идентификации исследуемого антибиотика. Некоторые авторы используют до 14 растворителей для построения хроматографического спектра. В качестве примера приведем перечень систем, исполь- [c.139]

Для идентификации относительно больших количеств цианкобаламина можно рассматривать хроматограмму при различном освещении. При дневном свете по красной окраске можно определить еще 0,3 цг, в УФ-свете при длине волны 365 мц — 0,5 цг и при длине волны 254 мц — I цг в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне. После хлорирования и опрыскивания раствором о-толидин — иодид калия (реактив № 32) можно еще обнаружить даже 0,2 цг в виде фиолетовых пятен. Для микроопределения следует также использовать биоавтографию. [c.244]

Поскольку бумажную и тонкослойную хроматографию применяют в сочетании с колоночной хроматографией, например для проверки гомогенности отдельных компонентов, биоавтографию можно считать общим методом обнаружения антибиотиков. Биоавтография основана на способности антибиотиков подавлять развитие чувствительных к ним штаммов. В результате разделяемые вещества обнаруживаются на хроматограмме по зонам подавления. Более подробно эти вопросы рассматриваются в специальной литературе [3, 4]. [c.204]

Рис. 3. Лоток ДЛЯ заливки твердых питательных сред при биоавтографии хроматограмм [32]

Обычно при биоавтографическом методе используют лотки, в которые заливают агар с тест-микробом. Дном лотка служит лист стекла или плексигласа, к которому приклеивают или прикрепляют при помощи винтов боковые стенки. Конструкция одного из таких лотков представлена на рис. 3. Кроме того, предложена модификация биоавтографического метода, при которой лотки не требуются. В этом случае хроматограммы погружают в расплавленный агар, засеянный тест-микробом, и затем вынимают из агара и инкубируют во влажной камере. Утверждают, что такая модификация является более чувствительным методом, чем обычная биоавтография [33]. [c.9]

Гигромицин (гомомицин) на хроматограммах выявляли при помощи биоавтографии (сенная палочка). Значения Кг в различных системах [728, 875] приведены ниже. [c.122]

БИОАВТОГРАФИЯ НА ОСНОВЕ РОСТА ИЛИ ИНГИБИРОВАНИЯ РОСТА 1) [c.174]

Методы переработки для выделения подвергаемых хроматографическому разделению экстрактов определяются свойствами исходного материала, формой применения и количеством находяш ихся в нем витаминов. В природных продуктах витамины находятся не в свободном состоянии, а каким-то образом связаны. Искусственно полученные препараты для стабилизации часто заключают в желатину. Из однородных проб (раствор, порошок) витамины известным способом экстрагируют непосредственно или после гидролиза. Полученные таким образом экстракты после концентрирования и дальнейшей очистки (например, методом вымораживания или колоночной хроматографии) наносят на пластинки для ХТС и подвергают одно- или двумерному хроматографированию, используя соответствующ ие растворители. Обнаружение витаминов на пластинке осуш ествляют либо при рассматривании в свете с различной длиной волны, либо при опрыскивании соответствую-пщми реактивами . Для количественных расчетов целесообразно проводить сравнение со стандартом, прошедшим стадии хроматографического разделения, элюирования и последуюш,его физико-химического определения. Для определения витаминов можно использовать также биоавтографию, т. е. [c.212]

Рис. 2. Исполь.зование стрептомицинозависимого штамма кишечной палочки при биоавтографии хроматограмм производных стрептомицина [31]

Такое явление наблюдается, например, при хроматографировании нефракционированного препарата карциностатина [55]. На тех хроматограммах, в которых оба синергидных компонента перемещались одинаково, можно было выявить зоны подавления тест-микроба. Они отсутствовали при хроматографировании в таких растворителях, которые разделяли оба компонента (рис. 5), Карциностатин удалось разделить на фракции А vl В. При хроматографировании компонента А хроматограмму перед наложением на агар обрабатывали раствором компонента В и, наоборот, хроматограммы с компонентом В обрабатывали раствором компонента А. В этом случае антибиотики удавалось выявить при помощи биоавтографии (рис. 5). [c.11]

Рис. 14. Использование нескольких тест-микробов при биоавтографии хроматограмм антибиотиков с ephalosporium sp. [177]

Саркомицин. При хроматографировании в органических растворителях подвижность уменьшается, если повышать pH буферных растворов, применяемых для обработки бумаги [111,301]. Препараты саркомицина удается разделить на отдельные компоненты при хроматографировании на бумаге, обработанной 10%-ным цитратным буфером pH 6,5—6,6 в различных органических растворителях. В н-бутаноле, насыщенном водой, наблюдалось разделение на компоненты, характеризующиеся величинами Кг 0,12—0,14, 0,28—0,36 (саркомицин Л), 0,51—0,58 (саркомицин В). Для разделения можно также использовать бутилацетат [843—845], хлороформ, изоамиловый спирт [288]. Антибиотики обнаруживали методом биоавтографии с использованием сенной палочки. [c.116]

Антибиотик выявляли при помощи биоавтографии (в качестве тест-микроба использовали Ba illus subtilis) или визуально [ПО, 725, 787, 312]. [c.140]

Для выявления неомициновых антибиотиков на хроматограммах вначале применяли биоавтографию [58, 59, 791, 1184, 1238], но затем были найдены более простые, химические методы. Сре-111 них наиболее часто используют реакцию с нингидрином [247, 1238—1241]. Эта реакция непригодна для ацетильных производных неомицинов [1193]. Хроматограммы обрабатывают раствором гипохлорита натрия, высушивают на воздухе и помещают в 95%-ный спирт. Далее опрыскивают смесью равных объемов 1 %-ного раствора крахмала и 1%-ного раствора иодистого калия. При этом ацетильные производные неомицинов выявляются в виде темно-синих пятен на бледном фоне. Разработана другая модификация этого метода, пригодная для количественных определений [360]. Хроматограммы помещают на 20 мин. при ко.мнат-ной температуре в раствор хлора в четыреххлористом углероде. Для его приготовления хлор, полученный из 100 мл соляной кислоты и 50 г перманганата калия, пропускают через воду и концентрированную серную кислоту и затем растворяют в 1 л четыреххлористого углерода. Раствор после прибавления примерно 5 г карбоната бария и 5 г плавленого хлористого кальция хранят в темной склянке. Хроматограммы высушивают на воздухе в течение 30 мин. при 4—6° в темноте и обрабатывают крахмальным реагентом 1 г крахмала и 0,25 г иодистого калия растворяют при нагревании в 3,5 мл воды, 0,5 мл этого раствора быстро добавляют к 50 мл пиридина. Для обработки хроматограмм используют свежеприготовленный раствор. [c.197]

Методом хроматографии фузариновую кислоту идентифицировали среди продуктов жизнедеятельности различных грибов, в том числе мутантных форм [1308, 1309]. При хроматографировании фузариновой кислоты образуются длинные полосы. Это нежелательное явление не наблюдается, если хроматографировать антибиотик в виде медного комплекса [1306]. Для него отмечены следующие величины Rt п-бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 5) — 0,27 та же смесь в соотношении 7 3 10 — 0,62 м-бутанол — муравьиная кислота — вода (10 7 10) — 0,09 изопропанол— муравьиная кислота — вода (4 1 5)—0,40 50%-ный диоксан — 0,63 коллидин, насыщенный водой,—0,26 лутидин, насыщенный водой,— 0,30 [1306, 1310]. Для выявления антибиотика на хроматограммах используют биоавтографию [1308], а также химические методы обнаружения [1306, 1310]. В случае медного комплекса хроматограммы обрабатывают рубеановой кислотой (0,1 %-ный раствор в ацетоне), окраска усиливается в парах аммиака. Также можно применять бромкрезолзеленый. Разработан метод обнаружения фузариновой кислоты при помощи сегментов колеоптилей сеянцев томатов [77]. [c.208]

М фосфатный буфер с pH 6,8—0,59 [543] бензол — метанол — вода (1 2 1)—0,4 водонасыщенный бутанол — 0,8 [49, 1311], н-бутилацетат, насыщенный водой,— 0,87 [1312]. В системе бен зол — уксусная кислота — вода (6 7 3) разделяются циклогексимид, дегидроциклогексимид, ангидроциклогексимид (см. рис. 29) [488—490]. Актидион выявляли биоавтографией (тест-микробом служили дрожжи), а также гидроксамовой реакцией [488, 489]. Хроматографию на бумаге использовали при изучении биосинтеза актидиона, а также его циркуляции в растениях [486, 488—490, 1313—1314]. [c.209]

Стрептимидон в системах № 1, 2 3 (состав указан на стр. 115) имеет величину 0,84, 0,72 и 0,76 соответственно. В н-бутаноле, насыщенном 2 н. аммиаком, Рг составляет 0,88. Обнаружение проводили при помощи биоавтографии, в качестве теста использовали клетки саркомы 180 [40], см. также табл. 3. [c.209]

Для выявления 6-АПК и 7-АЦК пригодна реакция с нингидрином или реакция ацилирования фенилацетилхлоридом в присутствии бикарбоната натрия или пиридина [84, 552, 563, 1370]. Образовавшиеся при этом фенилацетильные производные можно обнаружить, применяя биоавтографию. Ацилирование проводили также радиоактивным фенилацетилхлоридом [86]. При изучении пеницилленовых,пенициллоиновых и пениллоиновых кислот можно использовать нингидрин или иод-крахмальный реагент [548, 549, 631, 1371 —1373]. Пенициллоиновые кислоты дают также голубое окрашивание с ртутно-арсено-молибдатным реактивом Нельсона [1374]. [c.222]

Антибиотики группы эхиномицина можно обнаружить на хроматограммах при помощи биоавтографии на фоне Ba illus subtilis или В. my oides [139,235,1474—1476] в качестве теста применяли саркому 180 и культуру раковых клеток Игла [34, 40]. Хроматограммы можно фотографировать в УФ-свете [139] (рис. 103 и 104). [c.237]

Итурин хроматографировали в системах пиридин — бутанол— вода (4 6 3) и бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 5), для обнаружения можно использовать реактив Паули и биоавтографию Peni illium notatum) [1482]. [c.240]

Биомицин выявляли на хроматограммах при помощи биоавтографии [26 , 770, 787, 791], использовали также реакции с нингидрином [262, 1239] и Сакагути [92] и краски эритрозин В, кислый фуксин и т.. д. 1063]. [c.242]

Б1ЦИЛИЗИН в системе н-бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 4) характеризуется величиной Rf 0,43, имеется минорный компонент с У /0,15. Обнаружение проводили биоавтографией на фоне Ba illus subtilis [1508, 1509], в случае радиоактивного препарата использовали радиоавтографические методы [1510]. [c.244]

Найдено, что при хроматографировании на полосках стеклоткани, пропитанной кремневой кислотой ( hrom AR фирмы Mallin krodt), удается избежать прилипания частиц силикагеля к поверхности агара. Кроме того, в этом случае можно наносить на пластинку меньшую пробу, чем при работе с пластинками для биоавтографии [405]. [c.288]

Азалос и сотр. [414] опубликовали список эталонных микроорганизмов, пригодных для обнаружения многих антибиотиков, а Бетипа — обзор по применению биоавтографии в тонкослойной и бумажной хроматографии [415]. [c.289]

Ростовые вещества могут быть определены по их благоприятному действию на рост определенных микроорганизмов в среде агар-агара, а антиростовые вещества — по задержке развития микроорганизмов. Метод получил название биоавтографии. [c.900]

Смотреть страницы где упоминается термин Биоавтография: [c.302] [c.368] [c.137] [c.138] [c.124] [c.8] [c.8] [c.22] [c.23] [c.64] [c.173] [c.240] [c.241] [c.243] [c.244] [c.246] [c.247] [c.247] [c.252] [c.533] [c.546] [c.174] [c.175] [c.197]

Методы органической химии Том 2 Издание 2 (1967) -- [ c.900 , c.917 ]

Методы органической химии Том 2 Методы анализа Издание 4 (1963) -- [ c.900 , c.917 ]

Хроматография на бумаге (1962) -- [ c.0 ]

Хроматография Практическое приложение метода Часть 1 (1986) -- [ c.25 ]

Хроматография Практическое приложение метода Часть 2 (1986) -- [ c.145 , c.146 , c.149 , c.152 ]

Методы общей бактериологии Т.3 (1984) -- [ c.0 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология