Вирусные упаковка

Как показано на рнс. 15-22, хромосома обычно подразделяется на четыре оперона короткий — продуцирующий репрессор, ранний левый, ранний правый и поздний ). Ранние опероны детерминируют в основном синтез ферментов, обеспечивающих репликацию и рекомбинацию, а также синтез регуляторных белков. Поздний оперон связан с синтезом белков, необходимых для организации вирусных частиц он должен транскрибироваться с более высокой скоростью, которая обеспечивается Продуктом гена Q. В пределах позднего оперона гены от А до F участвуют в упаковке ДНК фага Айв образовании головок, тогда как гены от 2 до / обеспечивают синтез и сборку отростков. Гены S -а. R продуцируют белки, вызывающие разрушение мембраны бактерии-хозяина и лизис клетки. На последних стадиях фазы литического развития большая часть ранних генов выключается другим репрессором фага X (кодируемым геном его). Из сказанного видно, что регуляция транскрипции даже у вирусов может представлять собой достаточно сложный процесс. [c.261]

Каждая рибосомная субчастица содержит много различных белков, и большинство из них представлено лишь одной молекулой на рибосому. В этом состоит коренное отличие структурно асимметричного рибосомного рибонуклеопротеида от вирусных нуклеопротеидов, образованных за счет упорядоченной упаковки многих идентичных белковых субъединиц. Открытие и доказательство этого факта, главным образом в пионерских исследованиях Ж.-П. Валлера, установило один из важнейших принципов структурной организации рибосом. [c.90]

Образование вирусного капсида и упаковку в него двух РНК-цепей и молекул обратной транскриптазы. [c.488]

Манн и др. сконструировали первую клеточную линию для упаковки ретровирусов. Для этого они встроили вирусный геном с предварительно удаленной нуклеотидной последовательностью, ответственной за упаковку, в хромосому клеточной линии, которая в этих условиях производит неинфекционные вирусные частицы. После трансфекции этих клеток ДНК-конструкцией, которая содержала последовательность, необходимую для упаковки, и терапевтический ген, но не содержала ретровирусные гены. [c.492]

Рис. 21.7. Аденовирусный вектор. В клетку-хозяина, несущую интегрированный в геномную ДНК функциональный ген Е1 аденовируса, вводят встроенную в сегмент аденовирусного генома (0-17 единицы карты) плазмиду с терапевтическим геном (ТГ) и участок геномной ДНК аденовируса (9-100 единицы карты). Длина генома аденовируса равна 100 единицам. В результате рекомбинации (штриховая линия) между перекрывающимися участками плазмиды и ДНК аденовируса образуется молекула ДНК, эквивалентная полноразмерному вирусному геному. Рекомбинантная ДНК, содержащая терапевтический ген, упаковывается и высвобождается из клетки после лизиса. Образующиеся вирусные частицы дефектны по репликации. Плазмидная ДНК, входящая в состав конечной генетической конструкции, не влияет на упаковку рекомбинантной ДНК (не показано).

Интересно, что присутствие нити РНК внутри белковой гильзы придает всей структуре повышенную стабильность. Без РНК молекулы белка образуют четвертичную структуру вирусной палочки, но процесс их соединения может остановиться в любой момент и длина белковой гильзы определяется случайными обстоятельствами. Нолимеризуясь в присутствии цепи РНК, белковая палочка вируса приобретает длину, определяемую спиральной упаковкой РНК, т. е. такую же, как в нативном вирусе. [c.359]

Фаговые геномы малы. В самом деле, как в случае всех вирусов, принципиальным ограничением является необходимость упаковки нуклеиновой кислоты внутри его белковой оболочки. Это обусловливает многое в стратегии вирусной репродукции. Обычно они используют аппарат клетки-хозяина, который вместо того, чтобы реплицировать и выражать бактериальные гены, реплицирует и выражает фаговые гены. [c.206]

Упаковка вирусных геномов в оболочку [c.344]

Синтез головки фага завершается упаковкой в нее молекулы ДНК. Затем к головке прикрепляется уже собранный отросток. И наконец, к отростку крепятся нити, и сборка фага завершена. Изображенная на рис. 7.2 детальная последовательность событий на каждом этапе была расшифрована посредством генетического анализа мутаций, влияющих на развитие фага Т4. В этой главе мы расскажем о том, как генетический анализ помогает понять устройство и работу вирусного генома. [c.193]

Упаковочная последовательность Y, обеспечивающая эффективную упаковку вирусной РНК в вирусные частицы. [c.276]

Третье различие между системами репликации ДНК фагов Т4 и Т7 касается способа превращения конкатемера в зрелый мономерный геном. В первом случае длина сегмента ДНК, отрезаемого от конкатемера, задается не специфической нуклеотидной после-доватачьностью (как у Т7), а вместимостью фаговой головки кон-катемерная молекула ДНК начинает упаковываться в головку, а когда головка заполнится, активируется эндонуклеаза, которая отщепляет оставшийся снаружи участок молекулы. Поскольку в головку помещается сегмент ДНК, превышающий по своим размерам уникальную последовататьность вирусного генома, повторение актов упаковки и нарезания генерирует молекулы с кольцевыми перестановками и прямыми концевыми повторами (рис. 147). Отметим, что в фаговом геноме закодирован фермент, способствующий превращению разветвленных молек л ДНК в линейные. [c.280]

Однако вирусы в качестве векторов обладают и существенными недостатками имеют небольшую емкость, патогенны и неспособны встраиваться в хромосомы хозяина. Небольшую емкость можно увеличить, если инфицировать вирусом (например, ВМЦК) растительные протопласты, а не клетки. В этом случае инфекция не передается от клетки к клетке, нет необходимости в упаковке ДНК в вирусные частицы. [c.148]

Геном ретровируса дикого типа представлен двумя идентичными одноцепочечными молекулами РНК, каждая из которых состоит из шести участков длинного концевого повтора (5"-LTR, от англ. long terminal repeat)] некодирующей последовательности пси" необходимой для упаковки РНК в вирусную частицу трех генов, кодирующих структурный белок внутреннего капсида (gag), белок, обладающий функциями обратной транскриптазы и интегразы (pol), и белок оболочки (env) 3 -LTR-последовательности (рис. 21.2). Жизненный цикл ретровируса включает следующие стадии. [c.488]

MOM без El-области и последовательности, ответственной за упаковку, провели котрансфекцию клетки-хозяина, экспрессирующей Е1-гены. Молекула ДНК аденовируса, дефектная по репликации и упаковке, поставляет гены для синтеза компонентов вируса, а продукт лигирования реплицируется и упаковывается в вирусные частицы. При этом около 99% высвобождаемых вирусных частиц содержат молекулу ДНК с терапевтическим геном (генами). С помощью центрифугирования их можно отделить от дефектных по репликации вирусов, которые все же образуются в незначительном количестве. ДНК-клонирующая емкость такой системы достигает 28 т. п. и. [c.496]

Давно было известно, что двоякопреломляющие жидкие фазы возникают в колониях вирусов, образующих крупные включения в-клетках хозяина, в частности палочкообразных вирусов, таких, как вирус табачной мозаики. Этот вирус имеет цилиндрическую форму с определенным диаметром и длиной. С помощью поляризационного оптического микроскопа Бернал и Фанкучен [34] определили, что такие фазы имеют либо смектический, либо холестерический характер. Более поздние исследования [35, 36] подтвердили существование смектической организации. Гурье [37] получил микрофотографию нематической структуры для того же вируса (рис. 29). Недавние электронные микрофотографии замороженных сколов обнаружили смектическую слоистую структуру с гексагональной упаковкой в каждом слое [38]. Вирусные частицы соседних слоев наклонены друг к другу таким образом, что образуют зигзаги или укладываются в виде елочки. Ясно, что эти картины очень близки к тем, которые дают истинные трехмерные кристаллы. Взаимное расположение таких цилиндрических вирусов являет собой яркий пример кристаллического или мезоморфного полиморфизма. [c.279]

Линейная двухцепочечная ДНК—наиболее распространенный тип макромолеку. лярной организации ДНК, характерный для вирусов, бактерий и многоклеточных организмов. Мол. масса для такой ДНК некоторых вирусов 320 10. Не исключено, что наиболее крупные среди таких молекул в действительности могут быть кольцевыми молекулами, разорвавшимися в процессе выделения. Обладая высокой жесткостью, которая обусловливает высокую степень вязкости, линейные двухцепочечные ДНК не лишены и определенной гибкости, обеспечивающей их молекулярную упаковку внутри вирусной частицы или клетки. [c.58]

Первые гипотезы о происхождении трансформирующих вирусов основывались на допущении возможности случайной упаковки клеточных мРНК в вирионе вместе с геномом вируса затем должна была иметь место гомологичная рекомбинация между РНК, в результате которой могли возникнуть трансформирующие вирусные геномы. Однако данную модель пришлось пересмотреть. Для этого были две причины. Во-первых, с-опс-последо-вательности обнаружены в виде редко встречающихся мРНК, в которых отсутствуют сигналы упаковки. Во-вторых, на уровне РНК осуществление рекомбинационных событий кажется маловероятным. [c.493]

Существующая в настоящее время модель образования трансформирующих вирусов представлена на рис. 38.5. Предполагается, что ретровирус встроился вблизи с-опс-гена. В результате делеции происходит слияние генома провируса с геном с-опс, затем транскрипция ведет к образованию объединенной РНК, содержащей вирусные последовательности в одном конце и клеточные последовательности one в другом. В результате сплайсинга удаляются интроны как в вирусной, так и в клеточной частях молекулы. РНК имеет соответствующие сигналы для упаковки в вирионы. Вирионы могут образовываться, если в клетке содержится другая, интактная, копия провируса. В этих случаях некоторые диплоидные частицы вирусов содержат одну слившуюся и одну вирусную РНК. [c.493]

Образование замкнутых структур - колец, трубок или сферических частиц - дополнительно стабилизирует весь арегат общее число связей между белковыми субъединицами в этом случае увеличивается. Более того, поскольку такая структура формируется благодаря взаимозависимым кооперативным взаимодействиям, то сборка и разборка могут производиться относительно малыми изменениями, затрагивающими сами субъединицы. Особенно ярко это можно проиллюстрировать на примере белковых оболочек многих простых вирусов, имеющих форму полого шара Такие оболочки часто собраны из сотен идентичных белковых субъединиц, окружающих и защищающих вирусную нуклеиновую кислоту (рис. 3-43). Структура белков оболочки должна быть особенно гибкой, так как она должна допускать различные типы межсубъединичных контактов, а также обеспечивать изменение упаковки субъединиц при выходе нуклеиновой кислоты в начале цикла размножения вируса. [c.151]

К ч с-действующим вирусным последовательностям, необходимым вектору для эффективной репликации, относятся оба LTR, область инициации обратной транскрипции (прилежащая к LTR) и сигнальная последовательность для упаковки, расположенная вблизи от 5 LTR [14] (рис. 9.2). Все остальные последовательности могут быть заменены, поскольку их утраченные функции легко комплементируются по транс-схеме. Структура провируса как бы заранее подготовлена к конструированию на его основе вектора, так как цис-действующие последовательности, необходимые для репликации, кластерированы у концов провирусного генома и отделены от транс-действующих последовательностей, расположенных в центре. Такая организация позволяет легко вводить в геном чужеродные последовательности, замещая ими вирусные структурные гены. [c.279]

Клетки упаковывающих линий содержат провирусную ДНК хелперного вируса с делетированным сигналом упаковки. Поэтому собственные вирусные РНК-транскрипты не могут упаковываться в вирусные частицы. Однако этот дефект является только цис-действующим, так что хелперный ировирус производит все необходимые вирусные белки, способные обеспечить упаковку соответствующих РНК-геномов в вирионы по транс-схеме. Таким образом, когда рекомбинантный провирус вводится в упаковывающие клетки, его транскрипты формируют мажорный класс способных к упаковке молекул и клетки продуцирую вирусные частицы, содержащие почти исключительно рекомбинантные РНК-геномы. Такие вирусные препараты считаются свободными от хелперных элементов, хотя на практике они иногда содержат в небольшом количестве репликационно-компетентные хелперы [32]. [c.287]

Одной ИЗ ВОЗМОЖНЫХ причин делеций в ретровирусных геномах служит аномальный сплайсинг вирусной РНК. Хотя в MLV-векторах сигнал для упаковки расположен ниже вирусного донорного сайта сплайсинга (относительно направления транскрипции), так что молекулы, претерпевшие сплайсинг с участием именно этого сайта, неспособны упаковываться в вирусные частицы, криптические сайты сплайсинга, присутствуюш,ие во вставке, способны вызывать нежелательные последствия. Делеции и перестройки могут происходить также в результате рекомбинационных событий с участием эндогенных мышиных ретровирусных последовательностей, рекомбинации в процессе трансфекции или же ошибок при обратной- транскрипции и интеграции [14]. Кроме всего прочего в некоторых случаях делеции могут неумышленно отбираться при селекции на экспрессию определенного маркерного гена. Примером этого может служить эксперимент (табл. 9.7), демонстрирующий особенности сплайсинг-вектора для спаренных генов рМХ 1122/иг/с. пео в присутствии последовательности с-тус ингибируется сплайсинг вирусной РНК (разд. 9.7.1). Несмотря на низкую эффективность трансфекции, обнаруживаемую, этим вектором при селекции на устойчивость к G418, трансфицированные клетки активно продуцировали пео-трансдуцирующий вирус (табл. 9.7). Однако последующий анализ показал, что эти вирусные частицы несут делецию с-тус (М. Скотт, Г. Вармус, неопубликованные данные). Следовательно, селекция на эффективную экспрессию гена neo привела к утрате последовательностей с-тус, ответственных за ингибирование образования субгеномной лео-мРНК- Высокая частота делеций, обусловливающая повышенный уровень экспрессии селективного маркера, также свойственна и векторам с внутренним промотором, однако пока такие данные получены только для векторов на основе ретровирусов птиц [41]. [c.305]

Видимо, природа использует целый набор механизмов, чтобы организовать сборку вирусных нуклеопротеидов. Для всех структур характерно наличие множества контактов белок — белок об этом можно судить не только по внеишему виду вирусных частиц, но и по тому, что их сборка может осуществляться в отсутствие нуклеиновых кислот. За исключением палочковидных вирусов, множество контактов имеется и на уровне нуклеиновой кислоты в них, вероятно, принимают участие некоторые внутренние белки. Таким образом, в этих вирусах белковые и нуклеиновые компоненты в значительной спепени разделены в соответствии с тем, что белок выполняет функцию упаковки для переноса, защиты и введения в клетку нуклеиновой кислоты. Некоторые ферменты, участвующие в сборке ви- [c.210]

Смотреть страницы где упоминается термин Вирусные упаковка: [c.289] [c.258] [c.148] [c.289] [c.489] [c.490] [c.492] [c.562] [c.890] [c.362] [c.299] [c.491] [c.277] [c.278] [c.279] [c.280] [c.16] [c.18] [c.97] [c.97] [c.31] [c.333] [c.333] [c.16]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология