Канамицин-устойчивости ген

Одна из главных проблем безопасности связана с векторами, которые используются для трансформации клеток растений. Они содержат гены устойчивости к антибиотикам, чаще всего к канамицину. Эти гены оказываются в геноме трансформированного растения вместе с нужным геном (рис. 25.1). Трансгенные томаты содержат именно такой ген. Беспокойство вызывает тот факт, что после того, как томат съеден, ген устойчивости к канамицину может попасть в геном бактерии Е. соИ, обитающей в кишечнике человека. Поскольку бактерии выводятся из ор- [c.240]

И подобную чушь периодически тиражируют весьма уважаемые издания Говорят и об опасности применения растений с введенным селективным геном устойчивости к антибиотику канамицину. Дескать, поешь картошку с таким геном и станешь устойчивым к антибиотику. Даже студентам младших курсов биологических и медицинских вузов ясно, что это вздор, но как действует на обывателя Конечно же, о том, что устойчивость возникает из-за неправильного употребления, особенно устаревших и не рекомендованных к применению антибиотиков, предпочитают не говорить. [c.168]

II, фермент, ответственный за устойчивость к таким антибиотикам, как неомицин и канамицин. Следовательно, для проявления этой функции транспозона такая замена необходима. [c.464]

Устойчивость паромомицина уменьшается при увеличении pH [78]. Будучи гликозидами аминосахаров, неомицин, паромомицин и канамицин устойчивы в кислом растворе. При повышении pH способность к разложению увеличивается незначительно [78, 79]. [c.478]

Поскольку дефектные по тимидинкиназе ВКО спонтанно возникают с относительно высокой частотой (примерно 1 на 10 -10" вирусных частиц), нередко проводят котрансфекцию клеток каким-либо селективным маркером и нужным геном. Это облегчает разграничение спонтанных мутантов и мутантов, полученных с помощью гомологичной рекомбинации. В качестве селективного маркера обычно используют ген neo, кодирующий фермент неомицин-фос-фотрансферазу И и обеспечивающий устойчивость к аналогу канамицина G-418. Этот ген, в отличие от других селективных маркеров, остается стабильным при встраивании в геном ВКО. [c.240]

Селективный маркерный ген, например ген неомицинфосфотрансферазы, который обеспечивает устойчивость трансформированных растительных клеток к канамицину. Поскольку этот ген (как и многие другие маркерные гены, используемые при трансформации растений) по своей природе прокариотический, необходимо поставить его под контроль растительных (эукариотических) сигналов регуляции транскрипции, в том числе промотора и сигнала терминации-полиаде-нилирования. Это обеспечит эффективную экспрессию гена в трансформированных растительных клетках. [c.377]

Вначале чужеродные гены вводили в ДНК хлоропластов в составе плазмидного вектора, несущего неселективную чужеродную ДНК и селективный маркер, например ген устойчивости к антибиотику, фланкированные специфическими последовательностями хлоропластной ДНК (рис. 17.7). Такая стратегия была весьма эффективной, однако нередко селективный маркер мешал экспрессии фланкирующих хлоропластных генов. Чтобы решить эту проблему, разработали стратегию, в которой селективный маркер и чужеродный ген не были физически связаны друг с другом. Для этого растения табака трансформировали смесью одинаковых количеств двух разных плазмид одна содержала селективный маркер (ген устойчивости к спектиномицину), фланкированный ДНК из одного участка хлоропластной ДНК, а вторая — чужеродный ген (ген устойчивости к канамицину), фланкированный последовательностями из другого участка [c.385]

Бактероиды группы В. fragilis, как правило, растут в присутствии 20 % желчи, устойчивы к канамицину, колистину и ванкомицину, не обладают липазной активностью (на среде с яичным желтком), не образуют пигмента и не дают флюоресцентного свечения. Для более точной идентификации применяют дополнительные тесты. В частности, методом газожидкостной хроматографии определяют характерные продукты метаболизма анаэробов — летучие жирные кислоты (см. подразд. 1.2.4). Детальная идентификация выделенных культур оправдана в случае тяжелого течения инфекции, признаках генерализованного процесса и при неэффективности антимикробной терапии. [c.185]

Стрептомицин и другие аминогликозидные антибиотики (неоми-цин, канамицин, мономицин, гентамицин, гигромицин В) нарушают считывание генетического кода на уровне 308-субъединиц рибосом. При этом антибиотики взаимодействуют с рибосомами и подавляют связывание некоторых т-РНК. При действии стрептомицина неправильно считывается только пиримидиновое основание. Стрептомицин может быть причиной возникновения устойчивых и даже зависимых от антибиотика штаммов, образующихся из чувствительных клеток дикого типа путем мутации. У зависимых особей мутация аллельналокусу резистентности к стрептомицину или очень тесно сцеплена с ним. [c.108]

Антибиотики-аминогликозиды [23] включают ряд противоми-кробных веществ, в химической структуре которых имеются гликозид-ные связи стрентомицины, неомицины, канамицины, гентамицины, гигромицин, сизомицин, амикацин и др. Аминогликозиды — антибиотики широкого спектра действия в отношении чувствительных грамположительных и грамотрицательных бактерий. Все они тормозят белковый синтез благодаря взаимодействию с 30S субчастицами бактериальных рибосом и в результате нарушения их функций. Названные антибиотики более активны в щелочной среде. Устойчивые к аминогликозидам бактерии инактивируют антибиотики с помощью ферментов, образующихся при наличии в клетках R-плазмид. [c.188]

Когда в канамицине по положению (-I-NH2-) Н замещается на остаток у-амино-а-оксимасляной кислоты молекула антибиотика меняется. В результате синтезируется молекула нового антибиотика -амикацина, она уже не будет субстратом для действия ряда ферментов (трансфераз) I-V. Это очень устойчивые и активные антибиотики. Они лучше природных антибиотиков. [c.232]

После воздействия, индуцирующего мутации, и многочасового роста бактериальную суспензию инкубируют в среде с глюкозой, но без азота. Это делается для того, чтобы дать возможность клеткам использовать оставшиеся растворимые соединения азота. Через несколько часов добавляют пенициллин и сульфат аммония и проводят инкубацию (на этот раз продолжительностью до 24 ч.). Прототрофные родительские клетки растут, и пенициллин их убивает, тогда как ауксотрофные мутанты, нуждающиеся в определенной аминокислоте, не растут, и это позволяет им уцелеть. Затем суспензию освобождают от пенициллина промыванием или добавлением пенициллиназы и высевают на агаризованную среду, содержащую аминокислоты. Среди вырастающих в таких условиях бактерий процент ауксотрофных клеток оказывается более высоким (помимо них растут также прототрофные клетки, выдержавшие обработку пенициллином). Если бактерии устойчивы к пенициллину, то с той же целью можно применить другие антибиотики (новобиоцин, циклосерин, колистин, канамицин). Для избирательного уничтожения растущих клеток используют и такое явление, как летальный синтез . [c.451]

Транспозоны-это последовательности ДНК, которые способны встраиваться во многие участки генома и могут перепрыгивать с плазмиды на бактериальную хромосому, на другую плазмиду или на умеренный фаг. Транспозоны содержат гены, определяюпще внешне распознаваемые признаки, а именно устойчивость к таким антибиотикам, как пенициллин, тетрациклин или канамицин. В связи с этим их легче обнаружить, чем IS-элементы. По обе стороны от генов устойчивости, находящихся внутри транспозона, расположены две одинаковые последовательности, которые могут идти в одном и том же или в противоположных направлениях. Эти повторяющиеся последовательности оснований ДНК частью идентичны с IS-элементами. Расположение этих фланкирующих отрезков ДНК можно определить путем электронномикроскопического исследования гетеродуплексов (рис. 15.13). [c.455]

Механизм устойчивости к антибиотикам, определяемой К-факторами, может быть не таким, как в случае ее хромосомного наследования. Наглядным примером этого служит резистентность к стрептомицину. Если она зависит от хромосомного гена, то она связана с изменением субъединицы 30S рибосомы, так что бактерия не имеет мишени для воздействия стрептомицина (разд. 2.2.2). В отличие от этого устойчивость, обусловленная ii-фактором, основана на инактивации антибиотика в результате его аденилирования под влиянием фермента. Ферментативная химическая модификация антибиотиков часто бывает причиной устойчивости к ним, обусловленной плазмидами например, хлорамфеникол ацетилируется, канамицин и неомицин подвергаются фосфорилирова- [c.463]

Бумажную хроматографию применяли также при изучении стабильности антибиотиков [175]. Определяли кнслотоустойчи-вость и устойчивость к действию пенициллиназ различных пенициллинов [65, 384, 551, 616, 635, 636] (см. рис. 25 и 35), изучали процессы распада производных канамицина [244], рифамицина В [208, 627, 638], производных тетрациклиновых антибиотиков [95, 629, 640]. [c.67]

Механизм антибиотического действия канамицина изучен еще очень мало. Установлено, что канамицин подавляет образование адаптивных энзимов (в частности, катализирующих окисление Ph OgH), но это подавление, очевидно, осуществляется не таким путем, как в случае стрептомицина, поскольку у бактерий, сделавшихся устойчивыми к одному из этих антибиотиков, другой антибиотик по-прежнему остается способным подавлять рассматриваемый процесс . Имеются указания 6 , что основной процесс метаболизма, угнетаемый канамицином, связан с окислительным обменом чувствительных к нему бактерий это подтверждается наблюдением, что кислоты цикла Кребса подавляют действие антибиотика. [c.733]

Бактерии несут разные гены устойчивости, которые ученые научились использовать в генной инженерии. Так, ген устойчивости к колорадскому жуку, который защищает ГМ-картофель от вредителя, выделен из бактерии Ba illus thuringiensis, живущей на листьях картофеля и в почве и абсолютно безвредной для человека, а ген устойчивости к антибиотику канамицину (используемый для отбора ГМ-растений) — из всем известной кишечной палочки. [c.82]

Так, ген пр1П, обеспечиваюш ий устойчивость к канамицину и ряду других антибиотиков, часто используют в ГМ-растениях как маркер — ген, непосредственно не определяюш ий какой-либо признак, но позволяющий судить о его передаче. При оценке гипотетических рисков передачи этого гена от ГМ-растений бактериям необходимо учитывать, насколько широко он распространен в природе (найден в бактериях из стоков, навоза, речной воды, почв, кишечного тракта человека и животных), где вполне возможен его перенос из одних бактерий в другие. [c.83]

В связи с возможной трансформацией бактерий желудочно-кишечного тракта вернемся к гену прШ, вызываюш ему устойчивость к антибиотику, пусть и устаревшему. Вероятность его передачи из пиш и микробам желудочно-кишечного тракта оценивается примерно так же, как и вероятность ГПГ от растений к бактериям почвы (правда, пока пиш у готовят и переваривают, молекулы ДНК испытывают много разрушающих воздействий механические, термические, ферментативные, так что в итоге уцелеть перенесенному гену в желудке трудно). Тем не менее в ряде руководств и правил, действующих в генной инженерии, учитывают как возможный перенос генов в микроорганизмы желудочно-кишечного тракта, так и свойства белков — продуктов этих генов. Так, в руководстве Использование устойчивых к антибиотикам генов-марке-ров в трансгенных растениях , выпущенном в 1998 г. специальным ведомством США, оценивающим пищевую безопасность продуктов, указано, что продукт гена прШ (фермент неомицин-фосфотрансфераза) нетоксичен и не вызывает аллергии и что употребление в пищу сырых ГМ-томатов, содержащих этот ген, не влияет на терапию с применением канамицина или хожих антибиотиков, например, неомицина (исследование проводили на томатах, но результаты применимы и, скажем, к картофелю — если кто-то любит картошку сырой). Там же отмечено, что наличие упомянутого фермента в кормах безопасно для скота. В итоге сделан вывод о том, что присутствие в ГМ-растениях гена устойчивости к канамицину и вырабатываемых под его контролем белков не вызывает опасений с точки зрения эпидемиологии. Аналогичные выводы содержатся и в подготовленном в 2001 г. докладе Европейской федерации по биотехнологии. [c.85]

Впервые транспозоны были обнаружены, когда оказалось, что некоторые гены устойчивости к антибиотикам связаны с инфекционными факторами устойчивости. Общая структура факторов устойчивости изображена на рис. 8.13, Б. При исследовании гетеродуплексной ДНК, образованной ДНК F-фактора, и фактора устойчивости обнаружена гомология по всей области tra-генов, что свидетельствует об эволюционном родстве этих структур. Последовательность ДНК, кодирующая устойчивость к тетрациклину, tet, обрамлена элементами IS 3 и встроена в область гомологии фактора устойчивости и F-фактора. В негомологичной области карты локализованы гены, кодирующие резистентность к ампициллину (атр), сульфонамиду (sul), стрептомицину (str), хлорамфе-николу (ст[) и канамицину (кап). Эти гены устойчивости порознь или группами обрамлены IS элементами или другими инвертированными повторами (указаны стрелками на рис. 8.13, Б). Отдельные гены устойчивости например, tet или атр, могут переноситься в другие эписомы или плазмиды, а также в хромосомы фагов и бактерий, почему и возник термин транспозон. [c.244]

Рис. 20-72. Схема получения трансгенного растения. Интересующий нас ген кодирует бактериальный белок, токсичный для насекомых. Чтобы ген экспрессировался в растительной клетке, его 5 -конец соединяют с растительным промотором, а З -конец с сайтом полиаденилирования. Модифицированный ген токсина встраивают в плазмиду, содержащую кроме него и маркерный ген (например, ген устойчивости к канамицину), по которому можно проводить селекцию. Плазмида сконструирована таким образом, чтобы и ген токсина, и маркерный ген были окружены особыми повторами, размером 25 нуклеотидных пар, которые в норме окружают Т-ДНК. Плазмиду из клеток Е. oli переносят в Agroba terium, где на отдельной плазмиде присутствуют гены вирулентности. Если такую Agroba terium культивировать вместе с листовыми дисками, продукты генов вирулентности узнают повторы в Т-ДНК и перенесут ДНК, содержащую маркер и гены гоксина в хромосому растения. Все клетки листового диска затем заставляют делиться, помещая экспланты на соответствующую питательную среду, однако способность делиться и образовывать каллус сохранят лишь те клетки, которые содержат ген селективного маркера. Из каллуса затем получают трансгенные растения, которые экспрессируют

Допустим, что у Вас имеется устойчивый к ми-томицину (А), тетрациклину (В), канамицину (С) и нистатину (Д) штамм Ba illus subtilus № 2 и чувствительный штамм № 1, из которого получен штамм № 2. Можно экстрагировать ДНК из штамма № 2 и трансформировать ею штамм № 1. Затем, высеяв обработанные ДНК клетки штамма № 1 на агар, содержащий различные комбинации антибиотиков. Вы, предположим, получили следующие результаты (цифры обозначают число колоний, выросших на чашке) среда без антибиотиков — 10000 митомицин — 1156 тетрациклин—1148 канами-цин —1161 нистатин—1139 митомицин + тетрациклин —46 митомицин -f канамицин — 64Ю митомицин + + нистатин —942 тетрациклин + канамицин —51 тетрациклин + нистатин —49 канамицин + нистатин —786. Какие гены сцеплены и в каком порядке они располагаются в молекуле ДНК [c.116]

Смотреть страницы где упоминается термин Канамицин-устойчивости ген: [c.142] [c.407] [c.146] [c.148] [c.149] [c.256] [c.282] [c.284] [c.290] [c.324] [c.362] [c.385] [c.390] [c.484] [c.159] [c.64] [c.175] [c.15] [c.730] [c.732] [c.733] [c.734] [c.240] [c.36] [c.55] [c.60] [c.159]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология