Антитело контроль качества

Таблица 2.1. Стратегия получения антител и контроля их качества

В практическом отношении антитела преимущественно применялись для решения проблем идентификации и количественного определения веществ. Здесь имеется в виду использование белков как природных маркеров некоторых сырьевых материалов с целью распознавания их в продуктах питания для контроля качества. С этой целью изготовлены специфические иммунные сыворотки этих белков. Так, например, методы преципитации в геле послужили для обнаружения в пшеничной муке примесей ячменной муки [76] или в муке из твердой пшеницы примесей муки из мягкой пшеницы [90, 91]. Они могут быть использованы также для проверки отсутствия клейковины в кормовых рационах [7]. В такой стране, как ФРГ, где законодательство разрешает использовать в производстве пива только солод из ячменя и хмель, исключая особенно зерно риса и кукурузы как более дешевые источники крахмала, для контроля поступающего в продажу пива применили метод иммунохимической идентификации [98]. Иммунохимический подход (метод преципитации и RIA) также использовали для контроля запрещаемых законом в некоторых странах добавок в пиво препаратов протеаз как средства стабилизации [32]. В этих двух последних случаях проблема распознавания сложна, поскольку изготовление пива предусматривает вспенивание сусла при перемешивании, пастеризацию при стерилизации, т. е. происходит в условиях денатурации белков. Задача распознавания денатурированных бел- [c.112]

Контроль качества клеточные линии и препараты антител [c.146]

Исключительно важен иммуноферментный анализ при производстве препаратов медицинского назначения, в том числе из животного сырья и донорской крови. Примеси сопутствующих веществ или вирусных антигенов могут оказаться исключительно вредными для организма. Так, например, актуальной является проблема обнаружения в донорской кр.ови, используемой для переливания или получения медицинских препаратов, вируса гепатита В. Наличие белковых примесей в препаратах инсулина, который, как известно, длительно вводится в организм, приводит к выработке антител, в результате чего эффективность его действия резко снижается. Именно поэтому необходим эффективный контроль за наличием примесей, которые не должны превышать 10 %. Иммуноферментный анализ позволяет обеспечить соответствующий контроль качества препаратов инсулина. [c.122]

Биохимические метйды, используемые в стандартизации и контроле качества лекарств. Для стандартизации и контроля качества лекарств используют три группы методов. 1. Физические методы — спектрофотометрия, флюоресцентный анализ, масс-спектрометрия и др. 2. Химические методы неорганического, коллоидного и органического анализа состава лекарств и их метаболитов. Эти группы физико-химических методов позволяют установить структуру вещества и лишь сделать предположение о его биологической активности. 3. Биохимические исследования с использованием субклеточных фракций, клеток, тканей, органов и организмов позволяют оценить биологическую активность лекарств. Применение биохимических методов обеспечивает стандартизацию лекарств и контроль качества на этапах производства и хранения. Широкое распространение получило использование свойства специфического взаимодействия белков в системах фермент—субстрат , лекарство—рецептор , антиген-антитело . На основе этого фундаментального свойства белков созданы специфичные и высокоточные методы радиоиммунно-го, иммуноферментного, хемилюминесцентного анализа, аффинной хроматографии и др. [c.478]

Полуколичественная оценка /50 на ранних стадиях культивирования гибридом может быть осуществлена методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. В лунки платы для миКро-титрования, покрытые антигеном, использованным для получения моноклональных антител, помещают по 25 мкл растворенного в фосфатно-солевом буфере с тритоном перекрестно реагирующего антитела, концентрацию которого варьируют от 1 10 до 1 10 М. Затем в каждую лунку добавляют 25 мкл среды культивирования гибридом, разведенной в 2 раза буфером, содержащей моноклональные антитела. Аналогичным образом параллельно титруют исходный антиген, к которому были получены моноклональные антитела. В качестве контроля титрование сходного и перекрестно реагирующего антигенов осуществляют в присутствии 25 мкл разведенной в 2 раза среды культивирования гибридом, не содержащей моноклональных антител. Контрольные и опытные образцы инкубируют 1 ч при 37°С, а затем обрабатывают планшеты по методике для проведения непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. [c.173]

Если титр и специфичность антител удовлетворительны, их можно стандартизировать по отношению к данному антигену и окончательно испытывать в широком спектре иммунологических методов, в которых они могут найти применение. В табл. 2.1 обобщена стратегия получения антител и контроля их качества. [c.34]

Контроль качества антител [c.31]

После начальной проверки специфичности и титра этапы контроля качества могут включать абсорбцию посторонних антител как альтернативу аффинной хроматографии. Лучше всего ее осуществлять с помощью нерастворимых антигенных полимеров или бус, поскольку жидкостная абсорбция приводит к формированию растворимых иммунных комплексов с нежелательными свойствами. [c.34]

Развитие сельскохозяйственной биотехнологии на современном этапе направлено на решение таких глобальных проблем, как повышение плодородия почв, урожайности и качества сельскохозяйственной продукции рекультивация сельскохозяйственных угодий улучшение экологической обстановки, способствующей восстановлению биоценоза почв повышение качества кормов и др. В области медицины весьма перспективной является разработка новых технологий использования молекулярных антител в области диагностики и лечения заболеваний, направленного транспорта лекарственных средств, трансплантологии органов, тканей, клеток, формирования нового класса медицинской техники — индивидуальных биотехнологических систем для контроля состояния организма. [c.204]

При оценке внутримолекулярной конкуренции, впрочем, как и межмолекулярной, необходимо учитывать генетический контроль за ответом на используемые детерминанты. Так, например, если у мышей линии СзН/Не7 определять антитела к искусственной детерминанте фенилаланин-глутамин (Фен-Глу) при сенсибилизации сополимерами, в которых в качестве носителя включают пролин-лизин (Про-Лиз) или аланин-лизин (Ала-Лиз), можно прийти к ложному выводу о внутримолекулярной конкуренции при введении (Фен-Глу)-Про-Лиз и об отсутствии таковой при введении сополимера (Фен-Глу)-Ала-Лиз. На самом же деле антителогенез к детерминанте (Фен-Глу) в первом случае будет слабее не в результате конкуренции детерминант, а благодаря генетически [c.51]

Серологическое исследование. Серодиагностику проводят при отрицательных результатах других исследований. Для этого начиная со 2 —3-й недели заболевания можно исследовать сыворотку крови в РСК или РА. В связи с массовым проведением прививок, приводящих к появлению в крови здоровых людей специфических антител, необходимо исследовать парные сыворотки. Нарастание титра антител в динамике заболевания подтверждает диагноз. Антигеном в серологических реакциях служит взвесь живых культур бордетелл. В качестве дополнительного контроля рекомендуется при проведении реакций использовать коклюшную и паракоклюшную иммунные сыворотки. Диагностическим титром у непривитых и ранее не болевших считается разведение сыворотки 1 80. [c.135]

В процессе иммунизации изменяется также аффинность и соотношение между различными фракциями антител. Такая вариабельность качества антисывороток по специфичности антител, их физико-химическим свойствам и концентрации является следствием популяционной природы иммунного ответа. В связи с этими обстоятельствами на практике необходимо вести непрерывный контроль за качеством получаемых антисывороток. [c.150]

Определение соотношения P/N. При использовании ИФА в клинической практике необходимо стремиться к методической простоте и однозначности трактовки результатов анализа. В связи с этим широкое применение находит путь, основанный на измерении исследуемой сыворотки в одном разведении. Параллельно в том же разведении измеряют входящие в состав набора положительную и отрицательную контрольные сыворотки. В качестве критерия наличия антител используют отношение регистрируемых параметров для исследуемой (Р) и контрольной отрицательной (N) сыворотки. P/N, превышающее единицу, свидетельствует о наличии специфических антител. С учетом ошибок анализа и регистрирующего прибора обычно исследуемую сыворотку считают положительной при P/N 2. Относительный уровень содержания антител оценивают по приближению P/N к соответствующей величине положительного контроля. [c.263]

В качестве меток для контроля реакции антиген - антитело рекомендовались [c.11]

ПОЛУЧЕНИЕ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ И КОНТРОЛЬ ИХ КАЧЕСТВА [c.33]

Первыми веществами, рекомендованными Департаментом по контролю за качеством пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств (США) для использования в качестве иммуносупрессоров при пересадке органов у человека, были моноклональные антитела мыши ОКТЗ. За отторжение органов отвечают так называемые Т-клетки - лимфоциты, дифференцирующиеся в тимусе. ОКТЗ связываются с рецептором, находящимся на поверхности любой Т-клетки, который называется СОЗ. Это предупреждает развитие полного иммунного ответа и отторжение трансплантированного органа. По- [c.212]

Реагенты этой товарной позиции представлены либо на подложке, либо в форме препаратов и содержат более одной составляющей. Например, они могут содержать примеси из двух или более реагентов или единичных реагентов, растворенных в растворах, кроме воды. Они могут также быть представлены в форме бумаги, пластиков или других материалов (используемых в качестве подложки или основы), пропитанных или покрытых одним или более диагностических или лабораторных реагентов, таких как лакмусовая, pH или pole-finding бумага (бумага для определения полярности) или предварительно покрытые иммуно-контрольные пластинки. Реагенты этой товарной позиции могут также быть упакованы в виде наборов, состоящих из нескольких компонентов, даже если один или более компонентов являются отдельными химически определенными соединениями группы 28 или группы 29, синтетическим красящим веществом товарной позиции 3204 или любым другим веществом, которое будучи представленным отдельно классифицируется в другой товарной позиции. Примерами таких наборов являются такие, которые используются для контроля глюкозы в крови, кетонов в моче и т.п., или такие, которые основаны на ферментах. Однако диагностические наборы, имеющие основные свойства продуктов товарной позиции 3002 или 3006 (например, основанные на моноклональных или поликлональных антителах), исключаются из этой товарной позиции. [c.391]

Получение поликлональных антител и контроль их качества 39 [c.39]

С целью преодоления недостатков вышеуказанного метода для оценки чистоты мембранных фракций удобнее использовать не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, антител, В том случае, если мембрана имеет четкие морфологические признаки, в качестве критерия применяют метод электронной микроскопии. Если хорошо изучен химический состав определенного типа мембран, то для контроля чистоты мембранных структур используют анализ белкового и липидного состава (например, методом электрофореза в ПААГ в присутствии ДСН или путем определения содержания холестерина). [c.223]

II. Антитела. Обычный тест на определение специфичности антисывороток (рис. 6.12,Л). В качестве контроля эффективны антисыворотки против суммарного пула сывороточных белков. [c.217]

Работа с антителами зачастую требует от исследователя самостоятельного получения реагентов, в связи с чем в первую очередь возникает задача получения иммуногена. В случае растворимых простых иммуногенов для достижения хороших результатов молекулы должны быть как можно лучше очищены. Поэтому первый рассматриваемый метод — это оценка чистоты антигенного препарата. После сбора антисыворотки необходимо оценить ее качество. В зависимости от характера тест-системы, используемой на заключительном этапе, сыворотку необходимо проверить на специфичность, титр и параметры связывания. Это требует знания процедур контроля качества, в некоторых случаях включающих в себя определение изотопического спектра антител. На заключительном этапе важен правильный выбор теста (табл. 1.2)—.например, выбор между иммунофлуоресцентным и иммунопероксидазным методами в случае тканевых и клеточных антигенов либо между агглютинацией, ELISA, РИА и реакциями преципитации в случае растворимых антигенов. При использовании некоторых тест-систем может потребоваться очистка антител для последующего мечения либо получение и мечение антиглобулинового реагента. К оценке преимуществ и недостатков тест-систем следует подходить осторожно. [c.30]

Прогревают антнсыворотку при 56 °С в течение 30 мин для инактивации содержащегося в ней комплемента. Во все лун ки панели вносят 1По/50 мкл БГР (см. разд. 3.2).. Затем проводят двойную (параллельную) раститровку антител во всех восьми рядах (А—Н) вплоть до вертикального ряда II (1 2048). Вертикальный ряд 12 оставляют свободным от антител в качестве контроля (добавляют только антиген). [c.267]

В качестве маркеров применяют также ферменты. Основгшная на этом принципе специальная аппаратура для высокочувствительного ферментативного иммунохимического анализа выпускается серийно. В этом случае определяемый компонент метят ферментом. С антителами взаимодействуют как свободные, так и связанные с ферментом соединения, причем активность фермента при образовании комплексов АГ-АТ. как правило, подавляется (иногда усиливается). Концентрацию исследуемого вещества определяют путем измерения активности фермента по отношению к соответствующему субстрату. Чем больше концентрация немаркированного соединения, тем меньше фермента связьшается антителами и тем выше его активность. При этом достигается высокая чувствительность определений, характерная для ферментативных методов анализа. Использование ферментов-маркеров для контроля за ходом иммунохими- [c.299]

Разработка метода определения опиатов на основе латексной агглютинации. На основе полученных реагентов - антител к опиатам и конъюгата морфина меченого латексом, был разработан метод для выявления опиатов в биологических жидкостях организма с использованием латексной агглютинации. Для этого непосредственно перед работой разводили латексный конъюгат до 1% концентрации буферным раствором. Специфичные антитела против опиатов разводили в плашке, используя серию двойных последовательных разведений. Для проведения опыта в микрокамеры с коническими лунками вносили по 10 мкл сыворотки каждого разведения и быстро добавляли равную аликвоту раствора латекса, модифицированного морфином или конъюгатом морфин-овальбумин. В качестве контроля использовш1и лунку, в которую не добавляли антитела. Интенсивность реакции агглютинации оценивали через 1 час по 4-крестовой схеме [2]. Из полученных результатов выбра1ш условия для проведения реакции ингибирования. Для этого использовали концентрацию антигена на латексе 100 мкг/мл и 50 мкг/мл, а разведения сыворотки соответствовали 1 16, 1 32 и 1 64, Морфин вносили в лунки после серии пятикратных разведений в интервале концентраций от 500 мкг/мл до 200 нг/мл, В каждую лунку вносили 7 мкл антиопиатной сыворотки, 7 мю1 раствора морфина соответствующей концентрации и 7 мкл раствора латекса. Контрольные [c.202]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология