Мышь источник антител

Еще с прошлого столетия известно, что моча больных, страдающих этим заболеванием, часто содержит необычные белки, названные белками Бенс-Джонса по имени английского врача, который их впервые описал. Однако только в 1950-х годах выяснилось, что эти белки представляют собой свободные L-цепи иммуноглобулина. Первоначально детальная структура антитела была определена путем изучения миеломных белков из мочи или крови больных или же белков от мышей, у которых были целенаправленно индуцированы аналогичные формы рака. Впоследствии появилась возможность делать В-клетки, секретирующие антитела, бессмертными путем их слияния с клетками миеломы, не секретирующими антитела. Образующиеся гибридомы стали удобным источником моноклональных антител, которые можно получить против любого желаемого антигена в неограниченном количестве (разд. 4.5.4). [c.238]

Второе весьма существенное различие между технологиями получения МКА человека и мыши касается источника клеток, синтезирующих иммуноглобулины. Единственный практически доступный источник В-клеток человека — это периферическая кровь. Иногда можно использовать клетки лимфатических узлов, удаленных у больных раком. Периферическая кровь, как известно, очень бедна плазматическими клетками, следовательно, для получения предшественников клеток, образующих антитела, необходимо разработать новые подходы. [c.154]

Как упоминалось выше, генов гораздо меньше, чем генов V . Так, у мышей имеется, ио-видимому, только 2 гена Однако соответствующих этому гену последовательностей аминокислот обнаружено намного больше. Представляется вероятным, что разнообразие легких цепей Л возникает в результате соматических мутаций. В целом, как мы видим, природа использует каждый из трех обсуждавшихся выше (разд. 33.19) источников разнообразия -большой набор генов клеток зародышевого пути, соматические рекомбинации и соматические мутации в итоге возникает тот богатейший набор антител, который необходим для защиты организма от вторжения чужеродных веществ. [c.255]

Миеломные клетки мыти оказались чрезвычайно удобными для изучения биохимии продукции иммуноглобулинов и дали очень многое для понимания структуры, механизмов секреции и их функции. Однако миеломная система как источник антител к большинству антигенов не оправдала надежды исследователей — не удавалось иммунизировать животных, а затем получать мышиные миеломы, продуцирующие антитела к иммунизирующему антигену. Из тысяч миеломных опухолей, индуцированных > мышей, лишь единичные вырабатывали иммуноглобулины, которые реагировали с известными антигенами (М. Potter и сотр., [c.92]

Большая часть наших представлений о природе иммунного ответа получена в исследованиях, проведенных с помощью мышей и крыс. Эти животные подходят для интенсивного использования в лаборатории, доступны в виде инбредных линий, представляющих интерес для иммунологов, а также сходным образом отвечают на любой антиген, благодаря чему могут служить надежным источником антител. Не менее важно другое обстоятельство в ходе инбридинга аллельные различия полиморфных молекул фиксируются в генотипе данной линии, что создает уникальную возможность для изучения аллельных систем, таких как комплекс генов гистосовместимости, аллотипы и изоэнзимы. Межлинейная перекрестная имму- [c.40]

Значительным успехам в понимании детального строения антител способствовал тот факт, что у больных с опухолями лимфатической системы (например, при опухоли костного мозга — множественной миеломе) была обнаружена секреция огромных количеств гомогенных иммуноглобулинов или их фрагментов. В скором времени подобные опухоли были найдены у мышей, которые стали источником экспериментального материала. Оказалось, что белки Бенс-Джонса, секретируемые в мочу у больных миеломой, представляют собой легкие цеп имлгуноглобулннов. Определение аминокислотной последовательности показало, чго у каждого больного белок Бенс-Джонса гомогенен, однако не было обнаружено даже двух больных, секретирующих один л тот же белок. Позже были получены также интактные гомогенные миеломные глобулины и макроглобулины (IgM). [c.382]

Прн иммунохимическом анализе внеклеточных участков рецепторов, снятых с клеточной поверхности с помощью трипсина, был установлен, на первый взгляд, удивительный факт. Оказалось, что в составе протеолитических фрагментов клеточных белков содержатся такие продукты, которые взаимодействуют не только с иммобилизованными лигандами, но и с иммобилизованными антителами к тем же лигандам. В описываемых экспериментах клетки культивировали в среде, содержащей меченую аминокислоту. Источником клеток служили либо покоящиеся макрофаги из брюшной полости, либо костно-мозговые фнбро-бласты кролика, подвергнутые клонированию in vitro. Ряд ключевых экспериментов выполняли на клетках макрофагоподобиои линии Р388 Di (мышь). [c.79]

В случае специфичности к идиотипу связывание ограничено только молекулой антитела, вызвавшего ответ, аитисыворотка не связывается с другими антителами. Обычно источником идиотипического иммуиогена (и тест-антигспа) служат гомологичные, аффинно очищенные антитела (к углеводам), миеломный белок или (у мышей, крыс, человека) моноклональные антитела. Реакцию идиотип-анти-идиотип (и титры сывороток) проверяют методом Ухтерлони, ИГЛ (эритроциты, нагруженные идиотипом), ЕЫЗА/ИРМА или РИЛ. [c.96]

Во-первых, в зависимости от области применения существует возможность выбора наиболее подходящего и удобного источника получения моноклональных антител культуральной или асцитной жидкости. При использовании препаратов асцитной жидкости возникают определенные трудности при интерпретации полученных результатов, обусловленные примесью естественных мышиных антител к моноклональным антителам (высокие фоновые уровни). Однако в 1 мл асцитной жидкости содержится несколько мг МКА. Поэтому, когда используют разведение 1 1000 или более, значительная часть посторонних мышиных антител удаляется разбавлением. Иногда необходимо полностью удалить из препарата примесь естественных иммуноглобулинов (например, при использовании моноклональных антител для выделения и очистки небольшого количества белкового антигена с целью биохимического анализа). В последнем случае предпочтительно выделять моноклональные антитела из культуральной жидкости. При использовании в иммунологических реакциях асцитной жидкости следует иметь в виду присутствие посторонних фоновых антител. В некоторых случаях в организме мыши может существовать высокий титр природных антител, реагирующих с антигеном, специфически распознаваемым моноклональными антителами. При использовании асцитной жидкости возникают и проблемы неспецифического характера. Например, культуральная жидкость дает более ясное и точное окрашивание образца в иммуногистологических исследованиях. [c.148]

В исследованиях применяли ксеногенную иммунизацию, т.е. крыс иммунизировали клетками лимфом мышей, поскольку при внутривидовой иммунизации трудно ожидать образования антител, распознающих клетки этого же вида животных как чужеродные. Для описанных здесь методических подходов антигенным материалом служили пре-В-клеточные лимфомы, однако это не означает, что данные подходы применимы к анализу только таких клеток. И нам, и еще ряду исследователей удавалось успешно использовать другие В-клеточные трансформированные линии для индукции образования антител к детерминантам их плазматических мембран. Клонированные популяции клеток лимфом являются идеальным источником антигенного материала в силу целого ряда причин. 1) Если при ксеногенной иммунизации в качестве антигена используют живые клетки лимфом, то обычно получают сильные ответы, которые легко воспроизводятся. 2) Иммунизация клонированной клеточной популяцией, такой как пре-В- или плазматические клетки, дает возможность направить ответ против гомогенного клеточного источника антигена в нормальных тканях клетки такого типа могут присутствовать в очень малых количествах. 3) Иммунизируя животных и анализируя эффекты иммунизации в соответствии с описанными здесь методиками, можно практически гарантировать получение антител против детерминант клеточ- [c.176]

С-2-23 против мыши 14-4-4). Выбор именно этих антител определяется тем, что при иммобилизации на чашках Петри они не активируют В-клетки. Антитела разводят до концентрации 5 мкг/мл в трис-буфере (0,05 М трис-НС1, 0,15 М Na l, pH 9,5). В каждую чашку наливают 10 мл раствора антител, осторожными вращениями чашки равномерно распределяют раствор по дну и инкубируют 40 мин при комнатной температуре. После этого раствор выливают, а поверхность чашек промывают 4 раза ЗФР и один раз ЗФР, содержаш,им 17о СПК инактивированной нагреванием (ЗФР — СПК). Наконец, в каждую чашку добавляют 3 мл ЗФР, содержащего 5% СПК и 5-10 клеток, и выдерживают 70 мин при 4 С, время от времени перемешивая. Осторожно вращая чашки, сливают всю жидкость, в которой находятся неприкрепившиеся клетки. В чашки добавляют 5 мл холодного ЗФР — СПК (5%), осторожными вращательными движениями смывают оставшиеся клетки и объединяют эту жидкость с первым объемом. Выход клеток на каждом этапе адсорбции варьирует от 30 до 50%. Собранные клетки используют как источник предшественников для получения культур зрелых В-клеток. [c.247]

Получение mAb. Ключевая идея, лежащая в основе получения mAb (Г. Колер и С. Мильштейн, 1975 г.), как и всё гениальное, очень проста сделать бессмертным В-лимфоцит, который исходно синтезирует антитела одного вида и специфичности, но сам по себе может совершать в культуре лишь ограниченное число делений в течение 10-14 дней культивирования. Практически это достигается путем слияния первичных В-лимфоцитов, секре-тирующих антитела, с опухолевыми миеломными клетками, которые данной способностью не обладают, но могут неограниченно долго делиться в культуре. В результате образуются гибридные клетки (гибридомы), которые приобретают от одной из исходных клеток способность продуцировать антитела требуемой специфичности, а от другой - способность к продолжительному росту и делению в культуре. Реализация данной схемы начинается с иммунизации экспериментальных животных, как правило мышей, антигенами, против которых предполагается получать антитела. Иммуногенами могут быть препараты очищенных макромолекул, их различные смеси, а также целые клетки или субклеточные структуры. После достижения антителами в сыворотке крови мышей необходимого титра селезенку иммунизированных животных используют в качестве источника В-клеток, продуцирующих искомые антитела. [c.404]

Выращенные таким образом в небольшом количестве культуры гибридных клеток проверяют на способность секретировать в питательную среду специфических антител и далее рассевают до отдельных клеток методом последовательных разведений. В результате, каждая клетка потенциально может стать родоначальницей клона, продуцирующего mAb требуемой специ-<4 ичности. Поскольку синтез антител в ряде случаев может быть токсичным для клетки-продуцента, вместо культивирования in vitro на этой стадии параллельно используют культивирование in vivo в виде асцитных опухолей у мышей. Отмечено, что непродолжительное культивирование in vivo в дальнейшем способствует стабилизации клеточных линий, продуцирующих mAb. Полученные таким образом, охарактеризованные клоны гибридом являются источником неограниченного количества mAb данной специфичности, которые можно получать, культивируя гибридомы в искусственной питательной среде или асцитной жидкости организма мышей. [c.405]

В развивающихся куриных В-лимфоцитах происходит перестройка единственного интактного V-гена и образование функционального вариабельного V(D)J-rena. Затем к нему добавляются фрагменты разной длины (5-100 оснований) расположенных выше V-псевдогенов. Этот процесс называют генной конверсией. Разные результаты генной конверсии в разных В-клетках приводят к образованию большого репертуара У(В)1-последовательностей. Такой источник разнообразия функциональных антител так же эффективен, как у мышей и человека, но требует гораздо меньшего (1/20) количества ДНК зародышевой линии [12]. [c.157]

Нужно ли соматическое мутирование современным позвоночным Конечно, соматическое гипермутирование можно продемонстрировать экспериментально. Однако в некоторых экспериментах с инбредными мышами и патогенными вирусами (гл. 3) показано, что в ходе антивирусного ответа соматические мутации или не происходят, или, если происходят, ничего не добавляют к иммунному ответу. В самом деле, в настоящее время соматическое гипермугирование само по себе кажется почти неуместным. Существующее в зародышевой линии разнообразие генетических элементов, кодирующих тяжелые и легкие цепи антител, и комбинаторные возможности соматических клеток, которые обеспечивают быстрое образование большого репертуара антител, достаточны для ответа на неожиданности. Поэтому у ныне живущих позвоночных соматическое гипермугирование, должно быть, излишне. Тем не менее, возможно, оно до сих пор дает селективное преимущество как источник новых успешных открытых рамок считывания, возвращающихся в зародышевую линию. Его действие может уменьшать вредный эффект случайного генетического дрейфа, который потенциально направлен на уменьшение репертуара У-генов зародышевой линии в результате появления стоп-кодонов в кодирующих участках из-за точковых мутаций или вставок/потерь нуклеотидов. Короче, роль обратной связи сомы и зародышевой линии у современных позвоночных, возможно. [c.165]

Проблему гетерогенности антисыворотки удалось преодолеть в 1976 г. после разработки нового метода, который произвел революцию в исследовании внутриклеточных процессов с помощью антител. Этот метод включает клонирование В-лимфоцитов, секретирующих только один определенный тип антител, что обеспечивает получение однородных антител в большом количестве. Время жизни В-лимф оцитов в культуре обычно весьма ограничено. Поэтому от иммунизированных мышей получают В-лимфоциты, секретирующие отдельные виды антител, и осуществляют их слияние с бессмертными клетками из опухоли В-лимфоцитарного происхождения. В результате образуется гетерогенная смесь гибридных клеток, из которых отбирают гибриды, способные размножаться в культуре и синтезировать антитела определенного вида. Эти так называемые гибридомы клонируют по отдельности и получают клоны, каждый из которых является постоянным источником моноклональных антител одного типа (рис. 4-59). [c.226]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология