Антитела оценка качества

Поскольку индольная флуоресценция триптофана наиболее интенсивна среди природных аминокислот, она в основном ответственна за флуоресценцию большинства белков и находит различные применения в биологии и медицине, например в качестве пробы для выяснения структурных и конформационных изменений в белках, оценки совместимости антител в иммунологии и выяснения механизма действия ферментов [136, в, 15]. Примером, в частности, может служить гидролаза — лизоцим, содержащий шесть остатков триптофана, в том числе три, по-видимому, ассоциированы с активным участком. Присоединение субстрата приводит к голубому смещению в эмиссионном спектре на 10 нм, от 335 к 325 нм, сопровождающемуся повышением квантового выхода. Такое поведение интерпретируется как указание на взаимодействие между карбоксильными и индольными группами активного центра, которое исчезает при присоединении к субстрату [16]. [c.494]

С целью преодоления недостатков вышеуказанного метода для оценки чистоты мембранных фракций удобнее использовать не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, антител, В том случае, если мембрана имеет четкие морфологические признаки, в качестве критерия применяют метод электронной микроскопии. Если хорошо изучен химический состав определенного типа мембран, то для контроля чистоты мембранных структур используют анализ белкового и липидного состава (например, методом электрофореза в ПААГ в присутствии ДСН или путем определения содержания холестерина). [c.223]

Чрезвычайно широкий спектр применений имеет иммуноанализ для определения как самого факта присутствия, так и измерения количества антигенов, в том числе гаптенов, т.е. низкомолекулярных соединений, к которым можно получить антитела, как правило, путем иммунизации животных конъюгатом гаптена с высокомолекулярным носителем, способным вызывать иммунный ответ. Иммуноанализ нашел широкое применение для анализа содержания различных гормонов, что имеет огромное значение для оценки состояния эндокринной системы человека и животных. Важное значение для оценки состояния окружающей среды, в первую очередь качества питьевой воды и пищевых продуктов, приобретает иммуноанализ содержания пестицидов. В связи с интенсивным развитием гибри-домной техники для анализа определенных антигенов всё более широкое применение находят моноклональные антитела. [c.257]

Полуколичественная оценка /50 на ранних стадиях культивирования гибридом может быть осуществлена методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. В лунки платы для миКро-титрования, покрытые антигеном, использованным для получения моноклональных антител, помещают по 25 мкл растворенного в фосфатно-солевом буфере с тритоном перекрестно реагирующего антитела, концентрацию которого варьируют от 1 10 до 1 10 М. Затем в каждую лунку добавляют 25 мкл среды культивирования гибридом, разведенной в 2 раза буфером, содержащей моноклональные антитела. Аналогичным образом параллельно титруют исходный антиген, к которому были получены моноклональные антитела. В качестве контроля титрование сходного и перекрестно реагирующего антигенов осуществляют в присутствии 25 мкл разведенной в 2 раза среды культивирования гибридом, не содержащей моноклональных антител. Контрольные и опытные образцы инкубируют 1 ч при 37°С, а затем обрабатывают планшеты по методике для проведения непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. [c.173]

Носителями в данном случае чаще всего служат ацетат целлюлозы [26] и гели агарозы [4]. Разрешающая способность таких систем очень низка из-за чрезмерного диффузионного размывания зон. Применение в качестве носителя крахмального или полиакриламидного геля значительно повышает разрешающую способность прежде всего благодаря молекулярно-ситовому эффекту. Иммуноэлектрофорез [56] является одной из разновидностей зонного электрофореза при постоянном значении pH после разделения белки диффундируют навстречу специфическим антителам и их взаимодействие приводит к образованию дуг иммунопреципитации. Полуколичественную оценку каждого антигенного компонента можно выполнить методом электроиммунодиффузии [57]. После разделения методом зонного электрофореза антигенные белки электрофоретически мигрируют в направлении, перпендикулярном прежнему пути, в гель, содержащий равномерно распределенные антитела. Высота образующихся пиков преципитации является мерой относительной концентрации белков в смеси. [c.120]

ОЦЕНКА КАЧЕСТВА АНТИТЕЛ И КЛЕТОЧНЫХ РЕЦЕПТОРОВ [c.11]

Оценка качества антител и клеточных рецепторов 13 [c.13]

При оценке внутримолекулярной конкуренции, впрочем, как и межмолекулярной, необходимо учитывать генетический контроль за ответом на используемые детерминанты. Так, например, если у мышей линии СзН/Не7 определять антитела к искусственной детерминанте фенилаланин-глутамин (Фен-Глу) при сенсибилизации сополимерами, в которых в качестве носителя включают пролин-лизин (Про-Лиз) или аланин-лизин (Ала-Лиз), можно прийти к ложному выводу о внутримолекулярной конкуренции при введении (Фен-Глу)-Про-Лиз и об отсутствии таковой при введении сополимера (Фен-Глу)-Ала-Лиз. На самом же деле антителогенез к детерминанте (Фен-Глу) в первом случае будет слабее не в результате конкуренции детерминант, а благодаря генетически [c.51]

В. Оценка количества и качества антител [c.443]

Перспективным методом и самым быстрым для обнаружения фекальных стрептококков группы D в воде является комбинация техники мембранных фильтров и флуоресцирующих антител. Время анализа — 10—12 ч (Pugsley, Evison, 1975). Значение быстрой идентификации фекальных стрептококков с помощью флуоресцирующих антител в оценке качества воды подчеркнуто Pavlova с соавт. (1973). [c.176]

Антисыворотки, полученные даже от одного животного, значительно различаются по своей способности связывать антиген. Для сравнительной характеристики и оценки качества антисывороток проводят их тестирование, которое позволяет решить следуюш,ие две важные задачи во-первых, произвести отбор цменно тех сывороток, которые по своим свойствам (специфичности, аффинности, авидности и концентрации присут-ствуюш,их в них специфических антител) удовлетворяют требованиям иммунохимического. анализа во-вторых, осуш,ествить стандартизацию антисывороток при их промышленном. производстве для иммуноферментных наборов. [c.157]

Применение аффинной хроматографии в качестве метода изучения взаимодействий находится еще на ранней стадии развития, несмотря на то что количественная аффинная хроматография была введена уже десять лет назад [1—3]. Действительно, количество исследований, касающихся методологических аспектов аффинной хроматографии, примерно равно количеству сообщений по применению этого метода в конкретных экспериментальных системах. Большинство этих исследований способствовало применению аффинной хроматографии для оценки равновесия с участием ферментов и модификаторов, ингибиторов или субстратов [1—12], но метод был также использован и для характеристики взаимодействий белок — лекарственный препарат [13], система антиген — антитело [14] и, в меньшей степени, белок-белковых взаимодействий [15, 16]. По существу метод заключается в иммобилизации биоспецифической реагирующей группы X на инертной хроматографической матрице (например, часто на сефарозе) и определении средневзвешенных величин объема элюирования Уа распределяющегося растворенного вещества А в ряде хроматографических экспериментов, в которых растворенное вещество мигрирует в присутствии различных концентраций лиганда 5, также специфически взаимодействующего с А и/или X, В некоторых примерах различные изменения значения Уа отражали конкуренцию между растворенными и иммобилизованными реагентами за одно и то же положение в А [2—5, 7—14] в других изменения в величинахГд были обусловлены наличием взаимодействия иммобилизованного реагента X с бинарным А5-комплексом, образованным растворенным веществом и растворимым лигандом [1, 6]. Цель количественной аффинной хром ографии — объяснить возникновение изменений в величинах Га в предложении существования тех или иных равновесий. Поскольку положение равновесия зависит от концентрации (в соответствии с законом действия масс), точное определение состава смеси реагентов, к которой относится Га, обеспечивает применение фронтальной хроматографии [3, 4]. [c.192]

Гаптен-амидннироваииые антитела к поверхностным антигенам клетки вместе с усиливающими антигаптеновыми антителами в качестве второго слоя были использованы для повышения чувствительности и специфичности прн выявлении разнообразных мышиных аллоантигенов (1а, H-2K и Thy-1.2), пометить которые с помощью обычных реагентов трудно. Для оценки специфичности окраски проводились 0 пыты с лимфоцитами мышей из линий, обладающих пли не обладающих данным маркером. [c.179]

Работа с антителами зачастую требует от исследователя самостоятельного получения реагентов, в связи с чем в первую очередь возникает задача получения иммуногена. В случае растворимых простых иммуногенов для достижения хороших результатов молекулы должны быть как можно лучше очищены. Поэтому первый рассматриваемый метод — это оценка чистоты антигенного препарата. После сбора антисыворотки необходимо оценить ее качество. В зависимости от характера тест-системы, используемой на заключительном этапе, сыворотку необходимо проверить на специфичность, титр и параметры связывания. Это требует знания процедур контроля качества, в некоторых случаях включающих в себя определение изотопического спектра антител. На заключительном этапе важен правильный выбор теста (табл. 1.2)—.например, выбор между иммунофлуоресцентным и иммунопероксидазным методами в случае тканевых и клеточных антигенов либо между агглютинацией, ELISA, РИА и реакциями преципитации в случае растворимых антигенов. При использовании некоторых тест-систем может потребоваться очистка антител для последующего мечения либо получение и мечение антиглобулинового реагента. К оценке преимуществ и недостатков тест-систем следует подходить осторожно. [c.30]

Реакция преципитации не принадлежит к числу чувствительных реакций определения антител (антигена). Если концентрация антител в пробе ниже 0,5 мг/мл, преципитат образуется медленно. Для полноты осаждения комплекса пробы приходится оставлять на холоду на несколько суток. При низкой ко1щентраини антител преципитат вообще не выпадает. Однако агрегация антител антигеном все же идет и, чтобы ее оценить, прибегают к технике нефелометрии. Прибор основан на оценке степени рассеивания света, в качестве источника которого [c.252]

Книгой Антитела. Методы , первый том которой вы держите в руках, издательство IRL Press продолжает свою чрезвычайно популярную серию руководств по биологии Практические подходы , охватывая при этом область иммунологических исследований. Специфичность и антигенсвязывающие свойства антител используются в практике с начала нынешнего века, но за последние 20 лет популярность антител значительно возросла. Среди лабораторий, занимающихся изучением живых систем и биомолекул на физиологическом биохимическом уровне, едва ли найдутся такие, где еще не оценили антитела и не поняли, что это самый удобный, а часто и незаменимый инструмент идентификации, количественной оценки и изучения структуры и биологических свойств различных молекул. Диапазон применения антител чрезвычайно широк с их помощью изучают гормоны животных и растений, ферменты, клеточные рецепторы и маркеры дифференцировки, сывороточные белки, тканевые и клеточные антигены, опухолеспецифи-ческпе, бактериальные и паразитарные антигены и др. Для того чтобы эффективно использовать антитела при решении столь широкого круга задач, необходимо обладать компетентностью в двух тесно связанных областях, а именно уметь приготовить препараты высокоспецифичных антител с воспроизводимыми свойствами, а также выбрать и осуществить необходимый метод, основанный на использовании этих антител. В этой книге оба методологических аспекта сведены вместе. Она посвящена тому,. как получить антитела, проверить их качество, а также как с ними работать. В ней собран богатейший опыт и глубокие знания нескольких моих коллег по отделу иммунологии в Бирмингеме некоторые главы написаны специалистами из других центров. [c.6]

Описанная ниже методика представляет собой простой и эффективный способ титрования антиглобулиновых реагентов (анти-IgM или анти-IgG, а также антиглобулинов смешанной с п ецифичности). Необходимость в таком титровании возникает, например, при стандартизации пробы Кумбса или при сравнении антиглобулиновых титров сыворотки для оценки ее Качества. При этом используют эритроциты, предварительно нагруженные субагглютинирующей дозой специфических антител. IgM и IgG можно разделить хроматографическим путем, как описано в гл. 2 (разд. 3.2.3), а зате м использовать для сенсибилизаций клеток. [c.254]

В качестве примера рассмотрим кварцевый волновод (и = 1,46), находящийся в контакте с оптически менее плотной водной средой ( 2 = 1,34). Для этой системы 0 равно 66° (см. уравнение (33.1)). В соответствии с (33.3) при 0 = 70° и = 500 нм глубина проникновения света в раствор d составляет приблизительно 270 нм. Оценка размеров молекулы IgG (антитела) дает приблизительно 10 нм х 6 нм [1]. Таким образом, образующийся па поверхности иммунный комплекс сандвич-типа из трех слоев IgG имеет средний диаметр около 25 нм. На таком рассюянии напряженность поля еще составляет 91% Ef, (см. уравнение (33.2)). Однако при удвоении или утроении этого расстояния напряженность поля экспоненциально падает соответственно до 83 и 76%. [c.521]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология