Мутации температурочувствительные

Первый тип-это температурочувствительные мутанты (ts). Боль-щинство фагов способно инфицировать хозяина и размножаться в широком интервале температур. Температурочувствительные мутанты многих фагов Е. соИ способны размножаться при 30°С (пермиссивные условия), но теряют эту способность и обнаруживают свой мутантный фенотип при температуре 40-42°С (непермиссивные условия). При такой температуре негативные колонии не образуются. Известны также мутанты, чувствительные к холоду ( s). Появление температурной чувствительности почти всегда свидетельствует о том, что в каком-то участке ДНК, кодирующем некоторый белок, произошла мутация, повлекшая за собой аминокислотную замену. В результате белок становится нестабилен при непермиссивной температуре и утрачивает активность. [c.194]

Как, располагая температурочувствительной мутацией, блокирующей синтез бактериальной ДНК при рестриктивной температуре, определить, затрагивает ли она процесс элонгации цепи ДНК в репликативной вилке или инициацию синтеза ДНК на участке ori [c.129]

Изобразите предполагаемую кинетику включения Н-тимина в ДНК до и после изменения температуры от 30° до 42° при культивировании температурочувствительных мутантов Е. соН, содержащих мутации (а) в гене dna Л и (б) в гене dna Е. Известно, что рифампицин ингибирует РНК-полимеразу. Изобразите ожидаемый кинетический профиль включения Н-тимина в ДНК до и после добавления рифампицина к культуре Е. соН дикого типа. [c.129]

Фаги Т4, содержащие температурочувствительную мутацию в гене ли-газы, характеризуются повышенной частотой рекомбинации различных маркеров в ходе скрещивания при пермиссивных температурах. Ультрафиолетовое облучение родительского фагового штамма также повышает частоту рекомби- [c.165]

Причинами, вследствие которых ген проявляется у одних особей и не проявляется у других, а также имеет варьирующую экспрессивность, могут быть влияние внешней среды и (или) генотипа. Роль среды в проявлении гена очевидна в случае ауксотрофных мутаций и других условных деталей. Сальмонелла, несущая мутацию гена, кодирующего ИГФ-синтетазу, неспособна расти на минимальной среде, однако растет при добавлении в среду индола. Дрозофилы, несущие некоторые температурочувствительные летальные мутации, обладают нормальной жизнеспособностью при 20°С, но при 29° они или теряют подвижность, или погибают. Внешняя среда также оказывает влияние на экспрессивность [c.336]

Если нужно получить мутант, генетический дефект которого нельзя компенсировать добавками питательных веществ (например, дефекты ферментов, участвующих в репликации ДНК и РНК, дефекты в каком-либо элементе белоксинтезирующего аппарата), его следует искать среди условно летальных мутантов, которые жизнеспособны лишь при определенных условиях. Примерами таких мутантов могут служить температурочувствительные мутанты и штаммы, несущие супрессорные нонсенс-мутации. В табл. 13.1 приведены свойства мутаций различных типов она может служить ключом для выбора наиболее подходящего типа мутанта в соответствии с определенной целью. [c.10]

КОЙ частотой получать мутации в генах, определяющих температурочувствительные дефекты в некоторых жизненно ва.жных функциях, причем за эти функции ответственны гены, соседние с аллелем, по которому ведется отбор. [c.100]

Этап 2) суспензию фага следует обрабатывать мутагеном так, чтобы сохранялось всего лишь около 0,1% бляшкообразующих единиц. Так как при этом практически все мутации, имеющиеся в популяции, были индуцированы мутагеном в свободных фаговых частицах, то все выявленные в скрещиваниях трансдуктанты с мутациями могут считаться результатом независимых актов мутагенеза. В этом эксперименте мы исходим из того, что температурочувствительные мутанты будут образовывать колонии при 30°С, но не будут [c.34]

Селективный маркер Супрессорчувствительные мутации Температурочувствительные мутации Трехфакторное скрещивание Физическая карта [c.222]

Ряд рибосомных белков был идентифицирован благодаря изменениям в их структуре у температурочувствительных мутантов. Температурочувствительные мутации приводят к тому, что при повышенной температуре рост бактерий замедляется-эффект, обусловленный каким-то повреждением в рибосомном белке, функция которого при непермиссивной температуре, по-видимому, нарушается. СЗбщий характер таких мутаций не дает ключа к выяснению и функции данного белка. [c.111]

ГтЛуВ таблице представлены результаты Гмплементационного теста между различными температурочувствительными фаговыми мутантами ч- означает присутствие негативных колоний при непермиссивной температуре. Распределите мутации по группам комплементации. [c.222]

Температурочувствительные мутации широко используются и в генетике бактерий. Необходимые для нормального существования (существенные) гены, которые невозможно выявить посредством ауксотрофных мутаций, обычно могут быть идентифицированы с помощью температурочувствительных мутаций. Примерами жизненноважных функций могут служить функции, связанные с синтезом белков или нуклеиновых кислот из молекул-предшественников-аминокислот или нуклеотидов (подробное обсуждение мутаций, затрагивающих синтез ДНК, содержится в главе 13). [c.229]

Известны температурочувствительные мутации гена su3 Е. соН. Предложите метод обнаружения таких мутаций. По аналогии с известными температурочувствительными белками предложите интерпретацию феномена чувствительности к повышенной температуре этих тРНК -мутантов. [c.102]

Первые указания на то, что в системе репликации ДНК участвует целый ряд важных генетических функций, были получены благодаря выделению широкого набора условно-летальных температурочувствительных мутантов Е. соН (dna ), комплементационный анализ которых позволил соотнести их с мутациями в ряде различных генов. Среди них можно выделить два класса мутантов, которые при рестриктивной температуре (1) немедленно прекращают синтез ДНК или (2) в течение относительно протяженного временного интервала постепенно прекращают синтезировать ДНК (рис. 13.5). Первый фенотип связан с нарушением процесса синтеза ДНК в репликативной вилке, а второй-с исчезновением способности инициировать новый цикл репликации хромосомы. (В несинхронизированной культуре индивидуальные клетки мутантов второго класса, находящиеся на различных стадиях репликации, начавшейся еще при пермиссивной температуре, не прекращают синтезировать ДНК после повышения температуры до полного завершения цикла репликации хромосомы.) После сопоставления выделенных мутаций с определенными белками, на которых сказываются эти мутации, можно начать изучение функциональной роли этих белков in vivo. Локализация генов, ответственных за репликацию ДНК, на хромосоме Е. соИ показана на рис. 13.6. [c.112]

На первый взгляд казалось, что это наблюдение свидетельствует о функциональной заменимости ДНК-полимеразы I. Однако дальней-щие исследования показали, что мутация pol А не затрагивает 5 З -экзонуклеазной активности Pol I. Удалось получить добавочные температурочувствительные мутации гена polA, подавляющие 5 -> З -экзонуклеазную активность и летальные при рестриктивной температуре. На основании этих данных был сделан вывод о том, что 5 З -экзонуклеазная активность Pol I является жизненно важной функцией, необходимой для удаления РНК-затравок при репликации, т.е. для обеспечения нормального синтеза полноценной отстающей цепи ДНК (рис. 13.3). В действительности для исходного ро/Л-мутанта было показано, что фрагменты Оказаки встраиваются в протяженные участки цепи ДНК с некоторым запаздыванием, и это свидетельствовало о возможном участии ДНК-полимеразы I в заполнении пустот, возникающих после удаления РНК-затравок из отстающей цепи. В то же время эту функцию Poll нельзя назвать жизненно важной, поскольку в polA-мутантном штамме с ней вполне успешно справляется фермент Pol 1П. [c.116]

Совместная инфекция Е. oli двумя фагами, несущими различные летальные температурочувствительные мутации, при пермиссивной температуре приводит к возникновению рекомбинантов дикого типа. Предложите эксперимент, который позволил бы выяснить, имеют ли эти фаги свою собственную систему рекомбинации. [c.166]

Клетки Е. соН, несущие профаг X с температурочувствительной мутацией в гене с1 [ . соН жизнеспособны [c.204]

Самки, гомозиготные по температурочувствительной мутации йаидЫег1ез8, откладывают яйца при пепермиссивпой температуре, при которой клетки XX (хромосомный набор самки) погибают. Только яйца, [c.262]

Данные, подтверждающие существование гипотетического репрессора, получены при исследовании мутаций гена extra sex ombs (es ). Ген es был впервые идентифицирован благодаря рецессивной мутации с частичной потерей функции, которая приводит к замене пар ног сегментов Т2 и ТЗ на пары ног сегмента Т1. Однако мутационный анализ, приведенный Штрулем, выявил аллели с полной потерей функции es ), а также температурочувствительный аллель (es ). Исследование этих мутаций показало, что ген es действует в течение первых нескольких часов эмбриогенеза, инициируя активность комплекса ВХ-С сегмент-специфическим образом. Мутация es приводит к тому, что все эмбриональные сегменты развиваются по типу А8, т.е. имеет фенотип, ожидаемый для мутации, инактивирующей репрессор генов ВХ-С. [c.273]

Ауксотрофы способны к росту на обогащенной среде, но не могут развиваться на минимальной среде. Мутации, вызывающие устойчивость к стрептомицину, полезны бактерии лищь в присутствии стрептомицина. Хорошо изученным примером зависимости адаптивных свойств высших организмов от условий обитания могут служить температурочувствительные летальные мутации у дрозофилы. При температурах ниже определенной критической гомозиготные по этим аллелям мухи живут и размножаются более или менее нормально, но при повышении температуры эти мухи погибают, тогда как мухи дикого типа способны нормально существовать. [c.29]

Мутация Aaml8 сказывается на структуре продукта гена В, вызывая замену Ala -> Val, которая, однако, не оказывает заметного влияния на функционирование белка, продукта гена В. Замена еще одного нуклеотида проявляется в аминокислотной замене Glu -> -> Gln, которая придает белку В температурочувствительность, и в то же время сопровождается удалением терминаторного кодона в гене А, приводящем к образованию полностью функционального белка А. [c.284]

В приводимом ниже описании метода осуществляющий общую трансдукцию фаг Р1 Е. oli подвергают мутагенезу обработкой гидроксиламином, химическим агентом, который производит транзиции типа G —v-AT. После этого фаг используют для трансдукции реципи-ентного штамма, имеющего генетический дефект на одном из ранних этапов биосинтеза ароматических аминокислот (агоЕ). Трансдуктанты проверяются затем на наличие новых мутаций либо в одном из близко расположенных генов устойчивости к лекарственным препаратам (стрептомицин или спектиномицин), либо в различных генах рибосомных белков. Последние мутации легко выявляются как температурочувствительные условно летальные мутации [14]. [c.44]

Ввиду того что фаг Я обычно включается в хромосому Е. соИ между генами gal и Ыо, в норме этим фагом трансдуцируются генетические признаки, детерминируемые именно этими генами [4, 18, 22]. Трансдукцию можно продемонстрировать, взяв нелизогенный реципиентный штамм с мутацией в гене gal, например штамм 6 (табл. 14.1) и штамм донора gal+, например штамм 5 (табл. 14.1), подвергаемый лизогенизации фагом Я с1857. Последний несет мутацию, делающую температурочувствительным репрессорный белок, необходимый для наступления и поддержания лизогенного состояния бактериальный штамм остается лизогениым, пока растет при 30 °С, но индуцируется и лизируется с высвобождением фага, если выращивается при 37°С. [c.84]

Рис. 11-15. Клетки, трансформированные in vitro ретровирусом, несущим температурочувствительную мутацию в онкогене. Микрофотографии получены с помощью сканирующего электронного микроскопа. А. Округленная форма трансформированных клеток, наблюдаемая при более низкой температуре (34°С). Б. Те же клетки приобретают нормальную морфологию, когда продукт онкогена инактивируется повьппением температуры до 39°С. (С любезного разрешения G. Steven Martin.)

Для идентификации вирусных онкогенов используются различные методики. Удобным генетическим подходом является получение мутаций в онкогене, ведущих к его инактивации при повышенной температуре. У таких температурочувствительных мутантов можно включать или выключать данный ген, просто повьппая или понижая температуру. При более низкой температуре (34°С) чувствительные клетки, содержащие вирусный онкоген, будут обладать опухолевым фенотипом и, например, расти в отсутствие некоторых факторов, в которых они нуждались ранее (табл. 11-1). Если затем экспрессию онкогена подавить, повысив температуру до 39°С, то клетки быстро (обычно через несколько часов) вернутся к нормальному фенотипу (рис. 11-15). Подобный цикл изменений фенотипа можно повторять многократно. Эти изменения доказывают, что температурочувствительный ген вируса-это и есть ген, ответственный за неопластическую трансформацию клеток, и, следовательно, его можно считать онкогеном. [c.153]

Результаты, полученные при изучении расхождения поверхностных маркеров (фаговых рецепторов, жгутиков) у температурочувствительных (ts). мутантов Е. сой. и Вас. subtilis, лучше всего соответствуют представлениям о полуконсервативном способе сегрегации, однако данные о разбавлении меток свидетельствуют в пользу диснерсивного механизма. Возможно, что мутации, приводящие к темнературочувствительности синтеза маркеров клеточной поверхности, некоторым образом влияют и на способ сегрегации поверхностных слоев нри повышенной температуре. [c.67]

Высевайте по 5-10 клеток на чашку. Инкубируйте при 32°С, так как помощник интеграции несет температурочувствительную мутацию с1857. Высевайте на чашки также по отдельности гибриды фага "к, фаг kgi4-la S и клетки His , чтобы выявить наличие загрязнения или ревертантов. [c.44]

Рассейте штамм NK337 до отдельных колоний, проверьте его температурочувствительность. (Чувствительность к температуре свидетельствует о наличии профага с мутацией 2ts.) Чувствительность к температуре проверяют, сравнивая эффективность образования колоний при 30 и при 42°С. [c.67]

В. Обычная схема выделения амбер-мутаций в генах фага включает высев мутагенизированного фага на чашку с газоном SU+ при 30°С и перекалывание образовавшихся бляшек на три чашки с газоном su (которую инкубируют при 40°С), с газоном su+ (которую инкубируют при 40°С) и еще на одну чашку с газоном sm+ (которую инкубируют при 30°С). Следуя такой схеме, можно выделить и амбер-мутантов, и температурочувствительных мутантов. [c.75]

Смотреть страницы где упоминается термин Мутации температурочувствительные: [c.250] [c.253] [c.253] [c.312] [c.312] [c.209] [c.224] [c.230] [c.128] [c.130] [c.317] [c.284] [c.244] [c.139] [c.21] [c.75] [c.190] [c.110] [c.113] [c.33] [c.37] [c.43]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология