Определение фруктозо-1,6-дифосфата

Первый раздел Практикума должен помочь студентам освоить методические приемы и основы аналитической биохимии. Он содержит описание основных принципов и методов концентрационного анализа, принятых в биохимии (спектрофотометрического, колориметрического, манометрического), в частности, для количественного определения гликогена, глюкозы, неорганического фосфата, фосфорных эфиров углеводов, молочной и пировиноградной кислот. В раздел включены работы, посвященные анаэробному превращению углеводов. Каждая задача, выполняемая студентом, предусматривает анализ чистоты исходного препарата углевода или его фосфорного эфира, получение ферментного препарата (гомогената или экстракта ткани), постановку биохимического эксперимента, количественную оценку результатов. Количественное определение веществ проводится несколькими методами, результаты сопоставляются. Так, выполняя задание по теме Превращение фруктозо-1,6-дифосфата в молочную кислоту , студент анализирует фруктозо-1,6-дифосфат по фруктозе и по фосфату, молочную кислоту определяет спектрофотометрическим и колориметрическим методами. Подобным образом выполняются работы, связанные с превращением других фосфорных эфиров углеводов, гликогена, глюкозы. [c.5]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФРУКТОЗО-1,6-ДИФОСФАТА [c.41]

Реактивы для определения фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе (с. 42). [c.55]

Активность альдолазы может быть измерена двумя методами химическим, основанным на определении концентрации продуктов реакции — фосфотриоз (по нарастанию щелочнолабильного фосфорл), и энзиматическим, в сопряженной системе, содержащей помимо альдолазы и фруктозо-1,6-дифосфата также НАД+ и глицеральдегид-З-фосфат-дегидрогеназу или НАДН и глицерол-З-фосфатдегидрогеназу. Скорость альдолазной реакции определяют по нарастанию или убыли НАДН. [c.246]

Анализ чистоты препарата фруктозо-1,6-дифосфата. Изучение его ферментативного расщепления. Определение константы равновесия реакции. Влияние температуры и времени инкубации. [c.503]

Определение фруктозо-1,6-дифосфата может быть проведено пс фосфату после 3-часового гидролиза при 100°С в 1 н. растворе H i или после гидролиза при 100°С в течение 10 мин в 0,2 н. растворе NaOH (с. 496). Определение фруктозодифосфата может быть проведено также по фруктозе. [c.41]

Субстратная смесь для определения альдолазы, содержащая фруктозо-1,6-дифосфат. Готовят следующие запасные растворы [c.288]

Недавние исследования показали, однако, что иногда холостые циклы могут происходить и в физиологических условиях, имея при этом вполне определенный биологический смысл-производство тепла. Любопытный пример подобного холостого цикла обнаружен у некоторых насекомых. В холодную погоду шмель не может летать до тех пор, пока он не прогреет свой мотор температура мышц должна подняться у него примерно до 30°С и поддерживаться на этом уровне за счет холостого цикла с участием фруктозо-6-фосфата и фруктозо-1,6-дифосфата и последующим гидролизом АТР, который служит источником тепла. Полагают также, что холостые циклы, генерирующие тепло, имеют место, возможно, и у некоторых животных, пробуждающихся после зимней спячки, т. е. в период, когда температура тела животного бывает гораздо ниже нормы. [c.612]

Препарат натрий-ДФФ получил широкое применение в клинико-лабораторной практике для определения активности альдолазы крови, что имеет особенно большое значение при диагностике инфекционного гепатита (болезни Боткина), когда наблюдается повышение активности альдолазы. Вслед за СССР производство натриевой соли о-фруктозо-1,6-дифосфата было налажено в Италии и некоторых других странах. [c.99]

Концентрация фруктозо-1,6-дифосфата поддерживается на строго определенном уровне при посредстве сложного комплекса регуляторных процессов снижается под действием фруктозо-1,6-дифосфатазы (М = 140000, 4 X 35 ООО) и возрастает под влиянием фосфофруктокиназы. Однако активность первой тормозится, а второй—побуждается в присутствии фруктозо-2,6-дифосфата, который, в свою очередь, синтезируется в печени при посредстве 6-фосфофрукто-2-фосфокиназы. Более того, последняя реакция цАМФ-зависима, а сам этот фермент в печени бифункционален один его домен ускоряет синтез, а другой—распад фруктозо-2,6-дифосфата (рис. 112). В дрожжах 6-фосфофрукто-2-фосфокиназа и фруктозо-2,6-дифос-фатаза не образуют бифункционального фермента и являются самостоятельными энзимами. [c.342]

Лиазы являются катализаторами отщепления от субстратов негидролитическим путем определенных групп с образованием двойной связи или с присоединением группы к двойной связи. Одни из них катализируют отщепление воды, другие — углекислоты или аммиака. Фермент альдолаза катализирует расщепление фруктозо-дифосфата на две молекулы фосфотриоз. Многие из них принимают участие в реакциях цикла Кребса. [c.120]

Осваивая методы определения фруктозо-1,6-дифосфата, полезно определить чистоту препарата его бариевой соли. Навеску, соответствующую 30 мкмоль, растворяют в 5 мл 0,1 н. раствора НС1. 1 мл раствора отбирают для определения фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе. Оставшиеся 4 мл солянокислого раствора бариевой соли фруктозодифосфата используют для получения натриевой соли, хорошо растворимой в воде (см. ниже). Раствор натриевой соли фруктозо-1,6-дифосфата нейтрализуют, доводят водой до 15 мл. В полученном растворе определяют содержание фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе и по фосфату в микромолях, рассчитывают чистоту препарата по фруктозе и по фосфату, сопоставляют данные. Определяют процент потери фрук-тозо-1,6-дифосфата при переводе бариевой соли в натриевую. [c.43]

Заполнение проб проводят следующим образом. Во все пробиркт наливают раствор фруктозо-1,6-дифосфата и буфер. Первые три пробирки оставляют при 20°С, а четвертую помещают в термостат при 60°С на 5 мин. Одновременно в тот же термостат помещают небольшое количество приготовленного диализованного экстракта. Большую часть экстракта оставляют при комнатной температуре. Через 5 мин во вторую и третью пробирки добавляют экстракт, стоящий при 20°С, а в четвертую экстракт, стоящий при 60°С. Содержимое пробирок перемешивают и проводят инкубацию по схеме. Затем во все пробы добавляют равный объем 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и осадок белка удаляют центрифугированием или фильтрованием. В безбелковом растворе проводят определение трио-зофосфатов (в пробах, взятых на анализ, предварительно нейтрализуют трихлоруксусную кислоту) и фруктозо-1,6-дифосфат. [c.64]

Очевидно, что в дополнение к регуляторным механизмам, которые можно предсказать на основании законов химической кинетики интегрированной системы, живая природа разработала специфические механизмы ферментативного контроля. Прежде чем перейти к обсуждению таких механизмов, отметим, что скорость определенной последовательности реакций будет зависеть от доступности субстратов и кофакторов соответствующих ферментов. Как мы видели, изучение процесса гликолиза началось с наблюдения, что распад глюкозы под действием дрожжевого сока быстро замедлялся и прекращался совсем, но потом возобновлялся, если в реакционную смесь добавляли ортофосфат. В другом случае гликолиз не протекал дальше образования фруктозо-1,6-дифосфата без добавления АДФ именно таким способом Гарден и Йонг впервые обнаружили АДФ. [c.53]

Сплошные стрелки указывают те реакции цикла восстановления углерода, которые были выяснены Кальвином и его сотрудниками. Прерывистая линия изображает гипотетическую реакцию восстановительного карбоксилирования (подробности см. в тексте). Двойными стрелками отмечены некоторые биосинтетические пути, ведущие свое начало от промежуточных соединений цикла. Звездочками указана относительная степень включения метки (приближенно) после нескольких секунд фотосинтеза, определенная методом химической деградации, как указано в тексте. Сокращения Р — РОзН- РДФ — рибулозо-1,5-дифосфат ФДФ — фруктозо-1,6-дифосфат СГДФ — седогептулозо-1,7-дифосфат ТПФ — тиаминпирофосфат ГФ — глюкозо-6-фосфат ФЕП — фосфоенолпировиноградная кислота. Цифры у стрелок —это номера уравнений реакций, приведенных в тексте римские цифры при структурных формулах те же, что ив тексте. [c.545]

В методах, основанных на определении фосфата, освобождающегося под действием фермента, можно использовать любой субстрат, позволяющий обнаруживать специфические фосфата- зы. Так, например, в одной из работ [929] субстратом служид фруктозо-1,6-дифосфат. [c.299]

Если бы обе реакции протекали неконтролируемым образом с одинаковыми скоростями, то суммарный поток между фруктозо-6-фосфатом. и фруктозо-1,6-дифосфатом оказался бы равным нулю, однако при этом должен был бы происходить непрерывный гидролиз АТФ, что неминуемо ведет к смерти. Подобная совокупность реакций названа бесполезным циклом . Воспрепятствовать протеканию бесполезного цикла можно либо пространственным разделением двух процессов, либо обеспечением такого контроля, при котором активность одного из ферментов возможна только при подавлении активности другого. В какой-то степени контроль достигается компартментализацией, однако в таких тканях, как почка и печень, где может происходить и гликолиз и глюконеогенез, подобный путь невозможен, и поэтому здесь необходим определенный контроль активности фосфофруктоки-назы и фруктозодифосфатазы. [c.163]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология