Сорбенты уравновешивание

Хроматография в объеме уступает в эффективности колоночной хроматографии (даже в статическом варианте), но зато проще и удобнее для больших количеств вещества. Кроме того, не возникает проблемы сжатия и деформации обменника при любых изменениях pH и ионной силы элюента. Хроматография в объеме начинается с уравновешивания обменника в исходном буфере для сорбции препарата. Затем раствор последнего добавляют к суспензии обменника и время от времени осторожно перемешивают в течение часа. Сорбент промывают на фильтре исходным буфером и переносят обратно в стакан, где точно так н е осуществляют элюцию — периодическим перемешиванием в элюирующем растворе с последующей промывкой на фильтре. [c.285]

В литературе часто можно встретиться с утверждением, что уравновешивание силикагеля подвижной фазой требует пропускания через колонку значительных ее объемов, прежде чем будет достигнута стабильность времен удерживания. Из-за этого сущ,ественного недостатка рекомендуется предпочтительное использование обращенно-фазовых систем. По нашему мнению, утверждение о медленной стабилизации режима на силикагеле сильно преувеличено. Если только подвижная фаза содержит достаточное количество полярных компонентов для образования адсорбированной фазы, силикагель уравновешивается так же быстро, как химически модифицированные сорбенты. Бинарные элюенты, содержащие свыше 1,% полярного растворителя, почти всегда удовлетворяют этому условию. [c.132]

Скорость поглощения. Вполне естественно, что скорость достижения равновесия сильно зависит от вида растворителя, от характерного для него давления пара и от относительного насыщения парами (см. рнс. 178), от толщины слоя сорбента и от типа используемого закрепителя слоя. Продолжительность насыщения может оказываться равной нескольким минутам или нескольким дням. Для достижения степени насыщения паром, приближающейся к 100%, обычно нужно от нескольких часов до нескольких дней (до достижения равновесия). Кратковременное "уравновешивание" в [c.94]

При достижении капиллярного насыщения обеспечивается максимальная (и конкретная) степень насыщения слоя сорбентов молекулами растворителя (т.е. процесс капиллярного насыщения представляет собой также и процесс элюирования). Это не означает, что во всех случаях все виды молекул будут равномерно распределены по слою. Употребляемое нами определение для состояния капиллярного насыщения не учитывает механизмы, за счет которых оно обеспечивается (влияние пористости, поверхностного натяжения и т.д.), и факт существования фронтального градиента (см. разд. II, А, 2). Для полной ясности необходимо добавить, что хотя подъем фронта жидкости действительно приводит к капиллярному насыщению, даже в том случае, когда состояние такого насыщения достигнуто, из этого не обязательно следует, что достигнуто равновесие между смоченным слоем и атмосферой камеры. Однако на обычный процесс тонкослойной хроматографии не влияет такой теоретически длительный этап уравновешивания (на которое может уйти целый день), поскольку элюирование обычно заканчивается, когда фронт растворителя достигает заведомо определенной линии (хг), [c.95]

Методика разделения оптических изомеров. Колонку уравновешивают соответствующей подвижной фазой. Поскольку сорбент реагирует довольно медленно на изменение подвижной фазы, для получения полностью воспроизводимых параметров удерживания требуется достаточное время для уравновешивания. В большинстве примеров для этого достаточно 1 ч. В процессе уравновешивания и хроматографического разделения целесообразно поддерживать скорость потока, равной 1,0- [c.147]

После описанной обработки ионит уравновешивают буферным раствором, в котором осуществляют сорбцию белков на ионообменнике (исходный буферный раствор). Эту процедуру можно проводить как на колонке, так и пне ее. Обработку исходным буферным раствором осуществляют до тех пор, пока не произойдет выравнивания pH элюата на выходе из колонки (или жидкости, в которой суспендируют ионит) с pH исходного буферного раствора. Уравновешивание — процесс медленный. Для его ускорения ионит можно сначала обработать раствором того же состава, что и исходный, но с большей концентрацией, а после достижения нужного значения pH уравновешивание продолжают исходным раствором. Другой способ уравновешивания заключается в том, что ионит суспендируют в исходном буферном растворе до получения достаточно жидкой суспзнзии. Добавлением раствора, содержащего соответственно кислый или основной компонент исходного буфера, доводят pH (на рН-метре) до нужного значения. Затем сорбент уравновешивают исходным буферным раствором. Во всех случаях конечное состояние равновесия (величину pH) необходимо контролировать. [c.110]

Выбор сорбента и колонки для ГВЭЖХ также имеет свои особенности. Прежде всего, колонка должна быстро приходить в равновесие с растворителем постоянно изменяющегося состава как в процессе градиентного элюирования, так и при возвращении к исходному составу растворителя при подготовке колонки к новому анализу. Если для старых колонок в жидкостной хроматографии, работавших однократно, градиент формировался и использовался один раз, после чего сорбент в колонке заменялся свежим, и это позволяло применять силикагель и оксид алюминия, то для ГВЭЖХ эти сорбенты не подходят, так как уравновешивание их со слабым растворителем после градиента слишком длительно. Однако современные обращенно-фазные и другие привитые сорбенты достаточно быстро приходят в равновесие с исходным растворителем после окончания градиентного элюирования, что позволяет успешно использовать их для этих целей. Время, необходимое для уравновешивания колонки, для каждого сорбента устанавливается экспериментально по достижению постоянства времени удерживания веществ, входящих в анализируемую смесь. Это время различно как для разных сорбентов, так и для разных по составу растворителей, и может колебаться от десятков до нескольких сотен минут. [c.66]

Алкилнитрильную, алкиламинную и алкилдиольную привитые фазы можно использовать в разных вариантах хроматографии. Прежде всего они могут быть применены для работы с неполярными растворителями типа гексан — изопропанол, где они проявляют свойства, близкие к свойствам силикагеля без привитой фазы. Однако их селективность отличается от селективности силикагеля, что позволяет подобрать наилучший сорбент для каждого анализа. Кроме того, их преимуществом перед силикагелем является более быстрое уравновешивание с растворителем, и это позволяет использовать их при работе с изменением состава растворителя в процессе анализа, т. е. с градиентом растворителя. Они также менее чувствительны к влиянию воды. [c.98]

Поскольку взаимодействие макромолекул с иммобилизованным аффинантом — процесс, зависящий от времени, на него влияет скорость потока в колонке и время установления равновесия. Во многих случаях адсорбционное равновесие достигается очень медленно. Для взаимодействия макромолекул с иммобилизованным аффинантом недостаточно простых столкновений молекул, а необходимы также точная ориентация связывающих участков или их конформационная подстройка. В табл. 5.3 показано влияние времени уравновешивания на эффективность колонки с №-(6-аминогексил)-б -АМР — сефарозой [21]. Если глицерокииаза и лактатдегидрогеназа уравновешены с сорбентом, то обе величины, [c.82]

Из сопоставления ВЭТТ можно сделать важные практические выводы, а именно найти аффинный сорбент, характеризующийся не только хорошей связываемостью, но и лучшей избирательностью. Очевидно, таким образом Олсон и др. [28] обнаружили, что необходимо прекратить поток раствора в колонке за несколько часов перед специфическим элюированием. Время уравновешивания не влияет на связываемость лактатдегидрогеназы на иммобилизованном NAD+ или на связываемость глицерокиназы на иммобилизованном АТР, если перед элюированием ферменты в течение 1,5 и 20 ч соответственно оставлять в контакте с иммобилизованными нуклеотидами [19]. Этот факт можно использовать для хранения ферментов, устойчивость которых зависит от присутствия субстратов или кофакторов. [c.83]

При проведении аффинного элюирования необходимо учитывать некоторые аспекты взаимодействия лиганд — макромолекула. Увеличение концентрации соли может значительно уменьшить биоспецифическое взаимодействие, но может также ослабить последующее взаимодействие со свободным лигандом при аффинном элюировании. Увеличение концентрации соли уменьшает неспецифические ионные взаимодействия, но может также усиливать гидрофобные взаимодействия, особенно при наличии на сорбенте полиметиленовых вставок. Если важную роль при связывании играют гидрофобные взаимодействия, то более эффективным может быть уменьшение концентрации соли. Кроме того, можно использовать изменение pH или введение агентов, уменьшающих поверхностное натяжение (для ослабления гидрофобных и вандерваальсовых взаимодействий). В качестве последних могут применяться неионный детергент, такой, как тритон Х-100 до 1%-ной (об./об.) концентрации в буфере, зтиленгликоль [10—50% (об./об.)] или относительно небольшие количества этанола [до 5% (об./об.)]. Маловероятно, чтобы эти вещества могли вызывать изменения константы ассоциации с заряженными лигандами. После предварительного уравновешивания колонки указанным буфером в него вводят лиганд для аффинного элюирования. Очевидно, могут быть использованы также аллостерические модифицирующие агенты или ингибиторы взаимодействия лиганд — макромолекула, причем приведенное выше обсуждение по применению свободного лиганда полностью относится и к указанным агентам. [c.114]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология