Единица ферментов

Удельная активность. Выражается а) в единицах фермента иа 1 мг белка или б) числом молей продукта, образовавшихся за 1 мин на 1 мг белка. Суммарная активность определяется как произведение удельной активности на обш ее количество фермента. [c.169]

Следует иметь в виду, что во. всех случаях определения ферментативного действия определяется не количество фермента, а его каталитическая активность, выражаемая тем или иным способом через скорость ферментативной реакции. Активность же фермента зависит не только от его весового количества, но, при прочих равных условиях, и от наличия или отсутствия активаторов и ингибиторов и состояния самой катализируемой реакции. Поэтому единицы ферментативного действия характеризующие активность фермента и обозначаемые часто терминами единица фермента или энзимная единица , лишь с известными оговорками могут служить мерой количества фермента. [c.68]

Международного биохимического союза рекомендован единый условный способ выражения абсолютных количеств фермента. За единицу количества фермента (Е) принимается такое его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата в 1 мин в стандартных условиях действия фермента (температура 25°, оптимальная концентрация субстрата и оптимальное значение pH). Производными единицами являются кило-Е (1000 Е) и милли-Е (0,001 Е). Содержание фермента в биологическом материале и в выделяемых ферментных препаратах может быть выражено числом единиц фермента на 1 мг веса или 1 мг белкового азота. Эта величина носит название удельной активности фермента. Сам по себе этот термин нельзя признать вполне удачным, поскольку здесь идет речь о содержании фермента в материале. Термин активность правильнее относить к свойствам фермента (см. ниже раздел Активность ферментов ). [c.10]

Ход выделения и очистки ферментных белков контролируется чаще всего по двум основным показателям определению активности и определению количества белка в системе. Иными словами, за ходом очистки следят по возрастанию удельной активности материала, которое выражается числом единиц фермента в 1 мг белка. Кроме того, на каждом этапе определяют общую (сум- [c.138]

Удельная активность ферментного препарата выражается в единицах фермента на один миллиграмм белка. [c.99]

Содержание ферментов в ферментных препаратах определяется числом единиц фермента на 1 мг или 1 г препарата или на 1 мг белкового азота. Данная величина называется удельной активностью фермента, являющейся весьма произвольной величиной. [c.27]

Правила, рекомендованные в 1961 г. Комиссией по ферментам, позволяют унифицировать величины, в которых выражается количество ферментов. Согласно этим правилам, за единицу любого фермента принимается то количество его, которое катализирует превращение 1 микромоля субстрата в минуту при оптимальных условиях. Удельная или специфичная активность ферментного препарата выражается числом единиц фермента на 1 мг белка, а концентрация фермента в растворе — числом единиц фермента на 1 мл. [c.135]

Возможен расчет активности фермента в растительных тканях в стандартных единицах фермента на 1 г веса сырых растений, а также удельной активности на 1 мг белка. [c.138]

Мерой адсорбции служит число биологических единиц фермента, адсорбируемых при определенных условиях одним граммом сорбента. Определяя показатель адсорбции, можно для очистки фермента выбрать наиболее активный сорбент. Чаще всего применяют каолин и окись алюминия, а также таннин, холестерин и др. . [c.164]

Принятая в монографии номенклатура ферментов и коферментов основана на предложениях Комиссии по ферментам Международного биохимического союза [204]. При этом используются только тривиальные (рабочие) названия ферментов, образованные согласно предложенным этой Комиссией правилам. С теми же правилами согласованы единицы ферментов, терминология их образования и символы кинетики. [c.33]

За единицу фермента (Е) принимают такое его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль вещества за 1 мин. Число единиц фермента в тканях определяют по формуле [c.84]

При очистке ферментов и выделении их в кристаллическом состоянии сила их действия, естественно, увеличивается. Активность фермента, или единицу фермента, определяют как то количество его, которое при заданных условиях катализирует превращение одного микромоля субстрата в минуту. Микромоль — это одна миллионная часть веса грамм-молекулы вещества. Активность фермента или его удельная активность выражается числом единиц фермента на 1лг белка молекулярная активность выражается числом единиц фермента на 1 микромоль фермента при оптимальной концентрации субстрата. Для сравнения относительной активности разных ферментов используют так называемое число оборотов оно выражается числом молей субстрата, превращаемого одним молем фермента за одну минуту при определенной температуре. Числа оборотов варьируют в пределах приблизительно от 10 ООО до 5 ООО ООО самой высокой активностью обладает фермент ката-лаза. [c.332]

Используют также понятие молярной активности, которая указывает, сколько молекул субстрата превращается одной молекулой фермента за 1 мин. Молярная активность численно равна отношению числа единиц фермента в образце к количеству фермента, выраженному в микромолях. Например, в растворе фумаразы обнаружено 240 ед. фермента (в мкмоль/мин), а его содержание составляет 0,002 мкмоль, тогда молярная активность фумаразы будет равна 240/0,002 = 12 Ю мин . Значения молярной активности некоторых ферментов представлены ниже [c.113]

Номенклатура ферментов. Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также по единицам ферментов и символам кинетики ферментов. М., 1979, 321 с. [c.141]

Здесь количество фермента и измеряется в единицах, определенных так, что в спектрофотометрической кювете с 3 мл того же раствора субстратов одна единица фермента вызывает изменение абсорбции на 0,01 за минуту (при длине оптического пути 1 см) п — скорость вращения ротора в об/мин 5(5) — коэффициент седиментации фермента в сведбергах. Если принято решение ограничиться в опыте изменением оптической плотности менее чем на 1,0, то надо соответственно уменьшить и. [c.184]

Часто находят удельную активность фермента она равна числу единиц фермента в образце, деленному на массу белка (в мг) в этом образце. Например, если в 1 г ткани печени содержится 140 единиц лактатдегидрогеназы и 200 мг белка, то удельная активность лактатдегидрогеназы в печени равна 140/200=0,7 (мкмоль/ мин)/мг. Удельной активностью особенно часто пользуются при очистке ферментов по мере удаления посторонних белков доля выделяемого фермента в препарате увеличивается, следовательно, возрастает удельная активность (табл. 2.4 см. также табл. 1.9). По возрастанию удельной активности оценивают эффективность отдельных стадий очистки. [c.84]

Единицы активности. Согласно рекомендации комиссии по ферментам Международного биохимического союза за единицу активносги фермента (Е) принимают то его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в минуту при заданных условиях определения. Рекомендуемая температура 30° С (или указывают фактическую температуру, при которой проводилось определение). Остальные условия (pH, концентрация субстрата, кофакторов и др.) должны быть оптимальными. При бимолекулярной реакции Ач-Б = В + Г за единицу фермента принимают то его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль А или Б, или 2 мкмоль А, если Б = А, за 1 мин. Если фермент атакует более чем одну связь, например при действиц на полимерную молекулу, расчет ведется на 1 мк-экв затронутых реакцией групп. [c.206]

Активность лейцинаминопептидазы, выражаемая числом молей субстрата, расщепляемых в минуту весовой единицей фермента, значительно выше активности карбоксипептидазы, которая в свою очередь активнее папаина—одной из наиболее эффективных протеиназ [297]. Вследствие высокой активности лейцинаминопептидазы даже менее чувствительные связи в полипептидных цепях могут гидролизоваться с заметной скоростью. Кроме того, специфичность действия лейцинаминопептидазы не ограничивается остатками определенного типа, как в случае карбоксипептидазы. Так, фермент освобождает полуцистиновые остатки из пептидных связей. Пролин и аминокислоты с полярными боковыми группами также отщепляются, хотя скорости гидролиза могут быть небольшими. В некоторых случаях подобный широкий спектр активности выгоден, но он увеличивает трудности при попытках установить последовательность сцепления аминокислот на основании данных о скорости отщепления аминокислот при разрыве пептидных связей [149]. [c.236]

Часто бывает необходимо выражать активность фермента не в расчете на объем раствора, а в расчете на содержание белка (см., например, работу 25 по очистке аргиназы). Так получают удельную активность, которая выражается в единицах фермента на 1 мг белка (Е/мг). Если в 0,5 мл экстракта, содержащего 8 Е аргиназы, обнаружено 20 мг белка, то это означает, что удельная ар-гиназная активность экстракта равна 8 20=0,4 Е/мг. [c.45]

Единица ферментов (Е) — количество фермента,, которое катализирует превращение одного мйкромоля субстрата в минуту при заданных условиях. Если субстратом служит белок, полисахарид или молекула, в которой фермент атакует более одной связи, то вместо микромоль субстрата следует учитывать микроэквивалент затронутых реакцией групп . За меру скорости реакции принимается число расщепленных пептидных или гликозидиых связей, а не общее число подвергшихся превращению молекул. [c.104]

Единица ферментов представляет собой абсолютную величину, позволяющую сопоставлять активность различных ферментов. Однако разные ферменты сильно различаются по активности. Во избежание несоразмерно малых или больших единиц допускается применение миллиединицы (мЕ = 0,001 Е) и килоединицы (кЕ = 1000 Е). [c.104]

За единицу фермента принято количество, необходимое для включения 1 нмоля Р за 30 мин. Другой способ анализа, предложенный Сцекели и Сенгером ( Szekely, Sanger, 1969), отличается от описанного выше тем, что в нем в качестве субстрата вместо гидролизата нуклеиновой кислоты используют димеры. [c.286]

После 10 мин инкубации при 37°С реакцию прекращают добавлением 1 мл 1Л/ НСЮ4. Смесь охлаждают, центрифугируют и измеряют поглощение при 260 нм (АО 250 ) по сравнению с контрольным образцом, приготовленным добавлением 1 мл 1М НС1О4 раствору РНК. Одна единица фермента за 10 мин вызывает повышение поглощения при 260 нм на 1,0. Эта единица активности сравнима с используемыми в случае панкреатической и Т -РНК-аз при определении условий полного или частичного гидролиза нуклеиновой кислоты. [c.296]

Осадок растворяют в 50 мкл буфера Б и прибавляют 50 мкл раствора панкреатической РНК-азы в буфере Б (1 единицу фермента на каждые 20 мкг Р-РНК). Реакционную смесь инкубируют 4 ч при 40 С. Для адсорбции нуклеазы прибавляют бентонит (примерно 2 мкг бентонита на каждую единицу фермента). Смесь охлаждают несколько часов и центрифугируют при 17 OOOg в течение 30 мин для осаждения комплекса бентонит-нуклеаза. Надосадочную жидкость отделяют микропипеткой, смешивают с двумя объемами концентрированного NH4OH, выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем лиофилизуют. Остаток растворяют в 5-20 мкл воды для проведения двумерного электрофореза. [c.297]

Ферменты, которые подробно рассматриваются в следующей главе, представляют собой высокоспецифические катали засторы белковой природы Их важнейшая особенность — способность ускорять строго определенный тип превращений. Как правило, эту специфическую особенность ферментов и кладут в основу их определения. Обычно их определение ведут путем измерения или количества вещества, которое изменяется под влиянием фермента (т, е. субстрата фермента), или количества вещества, образующегося под его влиянием Чистота препаратов фермента определяется, как правило, числом условных единиц фермента в 1 мг исследуемого препарата. Например, за единицу амилазы — фермента, расщеп-Лйющего крахмал, принимают такое количество его, которое расщепляет 1 мл однопроцентного водного раствора растворимого крахмала (до стандартного уменьшения окраски с йодом) за 30 мин при 40°. Наиболее чистые образцы фермента, полученного из сенной палочки (Ba illus sub-tilis), содержат 27000—27500 таких единиц на 1 жг белка. [c.16]

Предложено новое определение международной единицы фермента — катал (кат), соответствующее количеству фермента, способному вызывать превращение 1 моля субстрата в продукт за 1 с (1 моль/с). 1 Е = 16,67 нкат. Удельная активность — катал на 1 кг активного белка (кат/кг). Рекомендуется проведение измерений единиц фермента при 25 °С, оптимуме pH и концентрации субстрата, превышающей концентрацию насыщения. В этом случае скорость соответствует нулевому порядку реакции в отношении субстрата и будет зависеть только от концентрации фермента. [c.81]

Транспортные АТФазы, функция которых заключается в энергетическом обеспечении активного транспорта ионов, в нативной мембране также представлены олигомерными конструкциями. Это было достоверно показано с помощью метода радиоинактивации (метод молекулярной мишени). Принцип его заключается в определении кинетики инактивации фермента в нативной мембране после ее облучения потоком высокоэнергетических электронов. Используя эмпирическое уравнение зависимости скорости инактивации от дозы радиации (она пропорциональна размерам функциональной единицы фермента в мембране), можно найти эти размеры и соотнести их с молекулярной массой протомера. Для Ыа, К-АТФазы получено, что фермент в мембране представляет собой молекулярную мишень, по крайней мере вдвое превышающую размеры молекулы. Аналогичные результа- [c.49]

Принято думать, что ДНК-полимеразы обладают ДИК-синтезирующей активностью однако вопрос о том, существует ли в виде дискретной единицы фермент ДНК-репликаза, остается спорным. (Мы уже обсуждали в главах 10 и 13 подобный вопрос в отношении РНК-полимеразы.) У бактерий может быть идентифицирован комплекс с активностью ДНК-репликазы, но он выделяется в виде отдельных (перекрывающихся) агрегатов из различных субъединиц. Не ясно, какая из них может рассматриваться как компонент самой репликазы, а какая служит вспомогательным фактором, необходимым для нормальной работы этого фермента. В процессе нормальной репликации ДНК-синтезирующая активность представляет только одну из нескольких взаимбсвя- [c.409]

М a lg и доводят pli до 5,5. После прибавления 50 единиц (замечания см. ниже) кристаллической или высокоочищенной нейраминидазы из Vibrio holerae и капли толуола смесь инкубируют в течение 8 час при 37°, после чего добавляют еще 50 единиц фермента инкубирование продолжают 18 час. К смеси прибавляют из пипетки 1,1 мл 1 н. серной кислоты и нагревают на водяной бане при 70° в течение 50 мин. После охлаждения 1,1 мл смеси анализируют на аммиак, выделившийся при предварительной обработке, с помощью осаждения фосфовольфрамовой кислотой и последующей отгонки из щелочного раствора, как описано в разделах а,2 и а,5. [c.162]

NaOH и в колориметре измеряют оптическую плотность гидразона при 416 нм. Строят калибровочную кривую, отражающую зависимость между оптической плотностью и концентрацией натриевой соли а-кетобутирата в условиях эксперимента. За единицу фермента принимают такое его количество, которое катализирует образо вание 1 мкмоля а-кетобутирата в 1 мин в указанных условиях. [c.402]

Так 1как деградация РНК под действием рибонуклеазы осуществляется в два этапа (вначале расщепляется фосфодиэфирная связь в РНК и образуется ци <лический диэфир, а на второй стадии пиримидин-2 , З -циклическая фосфатная связь гидролизуется донуклеотид-З-фосфата), то, используя РНК в качестве субстрата, можно исследовать общую реакцию, а с помощью цитидин-2 , 3 -циклофосфата — только вторую реакцию. Одинаковую инактивацию облученной РНКазы наблюдали при использовании обоих субстратов (рис. П1-1), т. е. в равной мере поражаются обе функциональные единицы фермента. [c.60]

Детали использования рестриктаз приведены в разд. 5.2. В данном случае препараты ДНК готовили с помощью СТАВ-буфера (разд. 4.2.3) и содержание ДНК определяли в реакции с дифениламином (разд. 4.6). Таким образом, обработку рестриктазами известного количества ДНК можно проводить достаточно уверенно. Кроме того, в этом случае можно точно рассчитать копийность в исходных препаратах ДНК. В целом в связи с большой сложностью организации ДНК растений (по сравнению с ДНК фага X или pBR322, используемых для проверки активности рестриктаз) и с тем, что в неочищенных препаратах могут содержаться примеси, снижающие активность рестриктаз, обычно используют 5—10 единиц фермента на 1 мкг ДНК растений, а обработку проводят по меньшей мере 2 ч. [c.321]

Не вызывает сомнения, что функциональная единица фермента может иметь несколько нуклеотидсвязывающих участков с раз- [c.67]

Умножив для удобства величину к на 1000, получаем общее количество единиц гликогенфосфорилазы в инкубационной смеси, 0,0021-1000=2,1 ед. Чтобы рассчитать количество единиц фермента в 1 мл раствора, взятого для анализа, результат должен быть умножен на 10. Поскольку в нашем опыте исходный раствор фермента был разведен в 400 раз, следовательно, активность гли-когенфосфорилазы в исходном растворе фермента равна 8400 ед/мл. Для вычисления удельной активности фермента определяют концентрацию белка в исходном растворе одним из общепринятых методов и делят полученное число единиц в мл на концентрацию белка в мг/мл. В нашем случае концентрация белка была 7 мг/мл, следовательно, удельная активность препарата гликогенфосфорилазы 8400 7=1200 ед/мг. Введя 30% поправку на неоптимальное значение pH 6,0, получим 1560 ед/мг вместо 1200 ед/мг. Удельная актив-йость кристаллических фосфорилаз а и б из скелетных мышц кролика, определенная при pH 6,8, составляет соответственно 2200 и 1600 ед/мг белка (Hedri k, Fis her, 1965). [c.104]

Таким об,разом, количество фермента рр, необходимое для того, чтобы скорость сопряженной реакции достигла аа 1 мин 98% истинной скорости, можно найти из приведенного выше уравнения. Величина Vmax, выраженная в мкмоль-мл- -мин , — это число единиц фермента в одном миллилитре раствора, а Кш — константа Михаэлиса в отношении Р. Следовательно, необходимое число единиц фермента решающим образом зависит от ед.-мл-1 = 3,9 м были сделаны некоторые до- [c.301]

Выполнив эти расчеты и оценив число необходимых тестов, следует поставить вопрос — имеется ли в наличии или можно ли приобрести достаточное количество сопрягающих ферментов В случае, рассмотренном выше, когда в пробе объемом 1 мл должно содержаться 2 ед. мл пируваткиназы и 5 ед.-мл лактатдегидрогеназы, расходы на приобретение ферментов будут незначительными. С другой стороны, ферменты, обладающие низкой удельной активностью, стоят намного дороже в расчете на одну единицу активности, а если к тому же они имеют высокие значения Кы, потребуется еще большее число единиц фермента. Таким образом, некоторые превосходные методы обходятся настолько дорого, что использовать их в текущей работе оказывается невозможно. Другая сторона гЪго же вопроса— это доступность ферментов (что необходимо выяснить в самом начале), связанная не столько с их ценой, сколько с тем, имеются ли вообще в продаже такие препараты, а если нет, то можно ли получить их в лаборатории. Возьмем для примера ферменты метаболического пути Энтнера — Дудорова. Чтобы тестировать фермент 6-фосфоглюконатдегидрогеназу, необходим следующий фермент этого метаболического пути — [c.303]

Согласно современным представлениям цитохром с ок-оидаза является типичным интегральным мембраносвязанным белком, который, подобно другим компонентам дыхательной цепи и митохонд]жальному АТФазному комплексу, локализован на внутренней мембране митохондрий [ 106, 160, 210, 212, 213, 363, 598]. Функциональная единица фермента состоит из четырех одноэлектронных центров двух гемов (цитохромы а и аз) и двух атомов меди. У одного из атомов меди ( видимая медь )—низкий потенциал (.Ем=0,245 В), у второго ( невидимая медь ) — высокий ( м=0,34 В). Находится он в тесной функциональной и структурной связи с цитохромом аз [210, 363, 598, 599). Сильные гем—гем-взаимодействия делают возможным рассматривать весь комплекс как единое целое. Однако (согласно классическим представлениям) цитохром а и цитохром аз не только функционально, яо и структурно различаются [327]. Первый не является аутооксидабель-ным и взаимодействует с восстановленной формой цитохрома с. Цитохром с локализован на внешней стороне митохондриальной мембраны и является исключительно донором электронов при физиологических pH, когда он находится в связанной с митохондриальной мембраной форме [205,600]. [c.90]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология