Фосфоглюкомутаза

Одним из наиболее токсичных металлов является бериллий. Оказалось, что в случае многих ферментов, в том числе фосфоглюкомутаз и фосфатаз, Ве + конкурирует с Mg + за связывание со специфическими центрами. [c.130]

Фосфоглюкомутаза катализирует внутримолекулярный перенос фосфата между С] и Се в глюкозе. Равновесная смесь содержит 95% глюкозо-6-фосфата. Реакция осуществляется в присутствии иона Mg и кофермента — глюкозо-1,6-дифосфата. Молекула фосфоглюкомутазы [c.226]

Получение препарата фосфоглюкомутазы из мышц. В качестве источника фермента можно использовать мышцы крысы, кролика или голубя. В маленькой фарфоровой чашке взвешивают 15 г мышц (получение см. на с. 49), тщательно измельчают ножницами, переносят в ступку, добавляют двойной объем холодной дистиллированной воды и растирают пестиком до получения гомогенной массы с добавлением небольшого количества промытого кварцевого песка. Экстрагируют ткань в течение 30 мин. Все процедуры осуществляют на холоде, реактивы и необходимая посуда должна находиться в кювете со льдом. [c.60]

Кинетические параметры (измеренные по ферментативной активности) при варьировании концентрации глюкозо-1,6-дифосфата и глю-козо-1-фосфата зависят от соотношения концентраций этих компонентов. Величина Кт для глюкозо-1-фосфата изменяется от 2,4-10 М до 4,8-10 М. для глюкозо-1,6-дифосфата — от 8,3-10 М. до 7,6-10 М. Кинетические параметры зависят также от того, находится ли фермент в активированном или неактивированном состоянии. Активацию фосфоглюкомутазы проводят путем предварительной инкубации в среде, содержащей ионы Mg + и имидазол (или гистидин). [c.227]

Фосфоглюкомутаза обладает широкой субстратной специфичностью, но превращение изомерных форм а- )-глюкозы катализирует со значительно меньшей скоростью. В присутствии глюкозо-1,6-дифос- фата фермент ингибируется фруктозо-1,6-дифосфатом и 2,3-дифосфо-глицератом. [c.227]

Определение активности фосфоглюкомутазы [c.227]

Фосфоглюкомутаза, активированная в присутствии 1 мМ Mg " и 30 мМ гистидина или имидазола). [c.227]

Выделение и очистка фосфоглюкомутазы из скелетных мышц [c.228]

Глюкозо-1,6-дифосфат может быть ферментативно синтезирован с помощью фосфоглюкомутазы в присутствии фруктозо-1,6-дифосфата. Фосфоглюкомутаза катализирует реакцию [c.231]

Мд(СНзСОО)2 0,5 мМ фруктозо-1,6-дифосфат 10 ед/мл фосфоглюкомутазы. Реакцию начинают добавлением 2 мМ глюкозо-1-фосфата. Инкубируют при 38° С в течение 10—15 мин. Останавливают реакцию нагреванием в течение 15 мин при 100° С. Белок удаляют центрифугированием. В супернатанте определяют количество образовавшегося глюкозо-1,6-дифосфата. Для этого глюкозо-1,6-дифосфат превращают в глюкозо-6-фосфат 10-минутным гидролизом в 0,1 н. растворе НС1 при 100° С. Раствор нейтрализуют и определяют в нем глюкозо-6-фос-фат с помощью дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата или после щелочного гидролиза. [c.232]

При подготовке к разрыву цепи свободная глюкоза фосфорилируется молекулой АТР при участии гексокиназы (реакция 1). В тканях имеется несколько гексокиназ некоторые из них относительно неспецифичны и катализируют также фосфорилирование других сахаров, например маннозы и галактозы (гл. 6, разд. Е,2 гл. 7, разд. Д,6). Продукт фосфорилирования, глюкозо-6-фосфат, может образовываться и без затраты АТР путем отщепления глюкозильных остатков от гликогена, осуществляемого гликогенфосфорилазой (реакция /а), с последующим действием фосфоглюкомутазы [реакция 1б см. также уравнение (7-26)]. Последний фермент переносит фосфорильную группу от кислорода при С-1 на кислород при С-6. [c.336]

Фосфоглюкомутаза (КФ 2.7.5.1) катализирует обратимое превращение глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат. Равновесие реакции сильно сдвинуто в сторону образования глюкозо-6-фосфата и устанавливается, когда около 95% фосфогексоз находится в форме глюкозоб-фосфата. Фермент относительно термостабилен и не инактивируется при нагревании до 65°С. Б задаче предлагается проследить за превращением глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат, используя мышечный экстракт, в котором предварительной термообработкой инактивирована глюкозофосфатизомераза. [c.60]

Определение белка. Для определения концентрации фосфоглюкомутазы используют метод Лоури (см. с. 81). При спектрофотометрическом измерении регистрируют оптическую плотность при 278 нм, учитывая, что Л °А1см=7,0. [c.228]

Мышечный гомогенат центрифугируют 10 мин в центрифуге с охлаждением при 12 000 g. Для инактивации глюкозофосфатизомера-зы проводят тепловую обработку. Мутный экстракт из центрифужных пробирок сливают в стеклянный стакан, доводят его pH до 5,0, добавляя по каплям 1 н. СНзСООН при постоянном перемешивании стеклянной палочкой. Проводят тепловую обработку стакан с экстрактом помещают в водяную баню, нагретую до 85—90°С, и нагревают экстракт, поддерживая указанную температуру в бане, до тех пор, пока его температура достигнет 65° (экстракт постоянно перемешивают). По окончании тепловой обработки стакан с экстрактом помещают в ледяную баню и охлаждают его до 4°С. Осадок денатурированных белков отделяют центрифугированием или фильтрованием. Центрифугат (фильтрат) хранят в рефрижераторе и используют его как источник фосфоглюкомутазы. Так как ферментативная активность сохраняется в течение нескольких недель, экстракт можно использовать при проведении повторных экспериментов. [c.60]

Активность фосфоглюкомутазы может быть определена двумя ме-т-одами химическим, основанным на определении убыли субстрата реакции, и энзиматическим — в сопряженной системе, содержащей помимо фосфоглюкомутазы и глюкозо-1-фосфата также НАДФ и дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата. Последний фермент используется в избытке, и скорость реакции, катализируемой фосфоглюкомутазой, определяют по нарастанию НАДФН. [c.227]

Для определения активности (при любом методе) препарат фермента подготавливают для работы, активируя его в среде, содержащей 1 мМ. Mg ls и 30 мМ. гистидин (или имидазол). Смесь инкубируют 10—20 мин при 0° С. Предварительно растворы фосфоглюкомутазы л сопрягающего фермента (дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата) обессоливают на колонке с сефадексом G-25 (тонкий). [c.227]

В спектрофотометрическую кювету объемом 3 мл помещают следующие компоненты (указаны конечные концентрации) 40 мМ трис-НС1 буфер (pH 7,5), 2 мМ глюкозо-1-фосфат, 1 мкМ глюкозо-1,6-дп-фосфат, 0,2 мМ НАДФ, 10 мМ M.g l2, 0,5 ед/мл дегидрогеназы глюко-зо-6-фосфата (в объеме 50 мкл) и 0,02 ед/мл (в объеме 50 мкл) фосфоглюкомутазы. Реакцию начинают добавлением фосфоглюкомутазы. Смесь перемешивают и регистрируют нарастание оптической плотности при 340 нм. [c.228]

Фракционирование сульфатом аммония, Супернатант доводят аммиаком до pH 7,0 и медленно добавляют сухой сульфат аммония до 45%-ного насыщения. Перемешивают еще 30 мин и центрифугируют 20 мин при 20 ОООg. Осадок отбрасывают. К супернатанту добавляют сульфат аммония до 75%-ного насыщения при постоянном перемешивании, Осадок, содержащий фосфоглюкомутазу, собирают центрифугированием и растворяют в 1 мМ растворе Na2HP04, pH 6,8, содержащем 0,1 мМ ЭДТА. Раствор диализуют в течение ночи против того же буфера. После диализа центрифугируют и супернатант разводят до концентрации белка 5—8 мг/мл доводят pH раствором аммиака до 7,8, [c.230]

Существует группа фосфотрансфераз, катализирующих перенос фосфатных групп из одного положения молекулы субстрата в другое. Примером может служить фосфоглюкомутаза реакция, катализируемая этим ферментом, протекает с промежуточным образованием фосфофермента. Фосфатная группа в фосфоферменте присоединена к реакционноспособному остатку серина и может переноситься либо в положение 6, [c.131]

Ферменты (в скобках даны кодовые номера) I - гексокиназа (2.7.1.1) или глюкокиназа (2.7.1.2) IА -гликоген-фосфорилаза (2.4.1.1) 1В - фосфоглюкомутаза (2.7.5.1) 2 - глюкозофосфатизомераза (5.3.1.9) 3 - фосфофруктокиназа (2.7.1.11) 4 - фруктозобисфосфатальдолаза (4.1.2.13) 5 - триозофосфатизомераза [c.78]

Особое значение индуцированное соответствие имеет для целого ряда ферментов, переносящих ацильные или фосфорильные группы из одного нуклеофильного центра в другой. Ацилхимо-трипсины служат примером случая низкой специфичности в отнощении нуклеофила. Ацетил- [114] и фуроилхимотрипсин [62] легко реагируют, наравне с водой, со всеми типами спиртов, перенося ацильную группу на КОН с образованием сложного эфира. Неспецнфич еский ацильный перенос такого рода, очевидно, неприемлем в тех случаях, когда целью действия фермента является перенос ацильной группы на специфический рецептор, но, поскольку размер молекулы любого спирта превышает размер молекулы воды, полностью удалить последнюю из активного центра невозможно. В этой ситуации фермент должен выбрать между КОН и НОН путем гарантирования того, что НОН в реакцию не вступит, и индуцированное соответствие обеспечивает механизм специфичности этого типа. Ярким примером такой специфичности является перенос фосфорильной группы на глюкозу, катализируемый фосфоглюкомутазой и гексокиназой. [c.517]

Для измерения константы равновесия и величины свободной энергии какой-либо химической реакции, например реакции взаимопревращения глюкозо-1-фосфата в глюкозо-6-фосфат, катализируемой ферментом фосфоглюкомутазой, определяют количество глюкозо-6- и глюкозо-1-фосфата при достижении химического равновесия. В состоянии равновесия содержание глюкозо-6-фосфата оказывается в 19 раз больше количества глюкозо-1-фосфата. Отсюда константа равновесия Кравна 19. Подставляя эту цифру в уравнение, получаем ДО = -7329 Дж/моль. Это означает, что при превращении 1 моля глюкозо-1-фосфата в 1 моль глюкозо-6-фосфата при температуре 25°С происходит уменьшение свободной энергии системы на 7329 Дж. [c.134]

Прежде всего глюкоза подвергается фосфорилированию при участии фермента гексокиназы, а в печени-и глюкокиназы. Далее глюкозо-6-фосфат под влиянием фермента фосфоглюкомутазы переходит в глюкозо-Ьфосфат [c.322]

Образовавшийся в результате фосфоролитического распада гликогена глюкозо-1-фосфат превращается под действием фосфоглюкомутазы в глюкозо-6-фосфат. Для осуществления данной реакции необходима фосфорилированная форма фосфоглюкомутазы, т.е. ее активная форма, которая образуется, как отмечалось, в присутствии глюкозо-1,6-бисфосфата . [c.326]

В настоящее время установлено, что в каталитическом центре активной формы молекулы фосфоглюкомутазы присутствует фосфорилированный остаток серина. Во время катализа эта фосфорильная группа, вероятно, переносится на гидроксильную группу прп С-6 глюкозо-1-фосфата с образованием глюкозо-1-бпсфосфата. Далее фосфорильная группа указанного промежуточного продукта переносится на остаток серпна в активном центре. В результате происходят образование глюкозо-6-фосфата и регенерпрованпе фосфорюн-рованного фермента. [c.326]

Жирными стрелками указан путь распада, тонкими - путь синтеза. Цифрами обозначены ферменты 1 - фосфорилаза 2 - фосфоглюкомутаза 3 - глюкозо-6-фосфатаза 4-гексокиназа (глюкокиназа) 5-глюко-30-1-фосфат-уридилтрансфераза 6- гликогенсинтаза. [c.327]

Как отмечалось, процесс анаэробного распада гликогена получил название гликогенолиза. Вовлечение О-глюкозных единиц гликогена в процесс гликолиза происходит при участии 2 ферментов — фосфорилазы а и фосфоглюкомутазы. Образовавшийся в результате фосфоглюкомутазной реакции глюкозо-6-фосфат может включаться в процесс гликолиза. После образования глюкозо-6-фосфата дальнейшие пути гликолиза и гликогенолиза полностью совпадают [c.334]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.336 ]

Общая органическая химия Т.10 (1986) -- [ c.517 , c.551 ]

Биологическая химия Изд.3 (1998) -- [ c.322 , c.326 , c.334 ]

Химия углеводов (1967) -- [ c.366 , c.367 , c.385 ]

Микробиология Издание 4 (2003) -- [ c.210 ]

Биологическая химия (2002) -- [ c.149 ]

Биохимия (2004) -- [ c.279 ]

Установление структуры органических соединений физическими и химическими методами том 2 (1967) -- [ c.417 , c.418 ]

Биохимия растений (1966) -- [ c.64 , c.121 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.244 , c.410 , c.456 , c.458 , c.612 ]

Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков (1974) -- [ c.368 ]

Метаболические пути (1973) -- [ c.14 ]

Биологическая химия Издание 3 (1960) -- [ c.252 ]

Биологическая химия Издание 4 (1965) -- [ c.266 ]

Основы биологической химии (1970) -- [ c.198 , c.280 , c.281 , c.285 ]

Биохимия растений (1968) -- [ c.125 ]

Химия и биология белков (1953) -- [ c.186 , c.288 ]

Загрязнение воздушной среды (1979) -- [ c.127 ]

Загрязнение воздушной среды (копия) (1979) -- [ c.127 ]

Биохимический справочник (1979) -- [ c.137 ]

Неорганическая биохимия Т 1 _2 (1978) -- [ c.478 , c.479 , c.480 , c.634 , c.635 ]

Курс органической и биологической химии (1952) -- [ c.377 ]

Катализ в химии и энзимологии (1972) -- [ c.43 , c.54 ]

Химия биологически активных природных соединений (1976) -- [ c.65 , c.68 ]

Начала органической химии Кн 2 Издание 2 (1974) -- [ c.700 ]

Начала органической химии Книга 2 (1970) -- [ c.772 ]

Курс физиологии растений Издание 3 (1971) -- [ c.107 ]

Углеводы успехи в изучении строения и метаболизма (1968) -- [ c.89 ]

Биохимия Издание 2 (1962) -- [ c.194 , c.200 , c.270 , c.272 , c.289 , c.484 ]

Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.2 , c.5 , c.7 , c.90 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.189 , c.190 , c.191 , c.206 , c.209 , c.210 ]

Генетика человека Т.3 (1990) -- [ c.283 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.189 , c.190 , c.191 , c.206 , c.209 , c.210 ]

Основы ферментативной кинетики (1979) -- [ c.138 , c.141 ]

Основы биохимии (1999) -- [ c.339 , c.340 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.118 , c.362 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология