Константа диссоциации комплекса ферментах

Гидролиз этилового эфира К-ацетил-Ь-тирозина, катализируемый а-химотрипсином, изучали методом остановленной струи в условиях [8 о2>[Е]о ло вытеснению профлавина из комплекса его с ферментом [7] (константа диссоциации комплекса фермент-профлавин в условиях эксперимента равна 4,4-10-5 М). Уменьшение оптической плотности раствора (А,=465 нм) во времени подчинялось кинетике первого порядка (табл. И). Из кинетических [c.197]

Здесь Е — Са—АТФаза, Ь — лиганд (АТФ или АДФ) /С д — кажущаяся константа диссоциации комплекса фермент — лиганд (ЕЬ), а к1 — константа скорости инактивации фермента. Считая, что скорость образования комплекса ЕЬ значительно выше скорости инактивации фермента, убыль немодифицированной формы фермента мож но описать следующим уравнением [c.364]

Ингибиторы, структурно аналогичные субстрату, способны связы- аться с субстрат-связывающим центром. В случае истинного конкурент-.ного ингибирования должна иметь место конкуренция между субстратом и ингибитором за связывание с одним и тем же центром, а кроме того, связывание одного из этих лигандов должно исключать связывание другого. Сродство ингибитора к ферменту количественно выражается константой ингибирования Ki, которая представляет собой константу диссоциации комплекса фермента с ингибитором Е1 [c.27]

Величину К = [Е] 1] / [ЕТ], которая представляет собой константу диссоциации комплекса фермента с ингибитором, называют константой ингибирования. Таким образом, при конкурентном ингибировании увеличивается константа Михаэлиса, а максимальная скорость ферментативной реакции остается неизменной. [c.226]

Как уже говорилось, ферментативная реакция складывается из узнавания субстрата или субстратов с их размещением должным образом относительно активного центра фермента и самого акта катализа. Долгое время существовало представление, что узнавание, т.е. сродство субстрата к ( ерменту, может характеризоваться константой Михаэлиса, которая приближенно равна константе диссоциации комплекса фермент—субстрат, во всяком случае если величина кат имеет тот же порядок или меньше, чем величина к-1 [см. уравнение (6.6)]. Это представление, качественно не подвергающееся сомнению, оказалось недостаточным, когда началось систематическое количественное рассмотрение вопроса о специфичности ферментов. [c.224]

Константа ингибирования К, при обратимом ингибировании — это константа диссоциации комплекса фермент-ингибитор [c.182]

Комплекс фермент-металл обратим. Его диссоциацию можно вызвать диализом и подавить повышением концентрации иона металла. Для лейцинаминопептидазы, у которой к каждому активному центру присоединен один ион марганца, при 40°С и рН=8,0 константа диссоциации комплекса фермент-металл равна 4- 10 моля. Связь в комплексе координационного типа. Соединение иона марганца и фермента идет медленно —в продолжение нескольких часов. [c.264]

Подход к измерению константы продукта может быть двояким. Продукт реакции вводится заранее в систему фермент — субстрат, после чего измеряется зависимость начальной стационарной скорости реакции в ряду концентраций субстрата и продукта. Этот способ фактически ничем не отличается от способа исследования обычных обратимых ингибиторов. Он позволяет выяснить характер ингибирующего действия продукта реакции, т. е. установить, является ли он конкурентным, неконкурентным или смешанным, и измерить константу диссоциации комплекса фермент -г- продукт. [c.99]

При анализе действия обратимых ингибиторов мы рассмотрели взаимосвязь между величиной /во и рациональной мерой реакционноспособности этих ингибиторов — константой диссоциации комплекса фермент — ингибитор. При этом было установлено, что величина /бо лишь в случае чисто неконкурентных ингибиторов совпадает с Кг- Уже для конкурентных обратимых ингибиторов при переходе от Ьо к Кг необходим учет величин константы Михаэлиса и концентрации субстрата, поскольку в системе устанавливается равновесие между Е, 3 и I (стр. 87). Что касается необратимых ингибиторов, то в этом случае использование /во для оценки их реакционноспособности без учета времени реакции не имеет никаких оснований. [c.113]

При исследовании обратимых ингибиторов определение зависимости константы ингибитора (константы диссоциации комплекса фермент — ингибитор Кд от температуры позволяет рассчитать А/ , АЯ и А5 для взаимодействия ингибитора с ферментом. При этом используются те же уравнения термодинамики, которые применяются для анализа реакции с субстратом. Таким образом, для реакции образования комплекса Е1 [c.135]

Конкурентное ингибирование проще всего можно распознать экспериментальным путем, определив влияние концентрации ингибитора на зависимость начальной скорости реакции от концентрации Субстрата. Для выяснения вопроса о том, по какому типу-конкурентному или неконкурентному-происходит обратимое ингибирование фермента (дополнение 9-3), весьма удобно преобразовать уравнение Михаэлиса-Ментен в линейную форму. Чаще всего для этой цели используют метод двойных обратных величин. Из графиков, построенных в двойных обратных координатах, можно определить также значение константы диссоциации комплекса фермент-ингибитор. Для реакции диссоциации [c.246]

Равновесный диализ является обычным методом измерения связывания малых молекул (лигандов) с макромолекулами. В ходе диализа лиганд проходит через мембрану в отделение, содержащее макромолекулы, и его концентрация снижается за счет связывания с последними [87, 101, 102]. По уменьшению концентрации лиганда (например, НАД) и по известной концентрации макромолекул (например, фермента) можно рассчитать число связывающих участков и константу диссоциации комплекса фермент — кофермент. Объемы внутреннего и внешнего отделений аппарата для диализа должны быть очень точно известны и проверены на удобной контрольной системе. Этот метод был использован, например, при исследовании связывания НАД+ с глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой мышц кролика [90]. [c.408]

Снова напомним, что определяется через различные константы скорости, тогда как представляет собой просто константу диссоциации комплекса фермента с А. [c.138]

ТОГО, если данный комплекс важен при катализе, то константы диссоциации, измеренные при изучении связывания, должны приближаться к константам, определенным при изучении начальной скорости реакции в целом, хотя различие в используемых концентрациях белка может вызвать в некоторых случаях трудности при интерпретации. Необходимые константы могут быть получены из изучения начальной скорости для иона металла Ка) и для лиганда, если он является ингибитором Кг). Однако константы диссоциации комплексов фермент — субстрат и фермент — продукт не так легко получить, пока не сделаны допущения относительно скоростьопределяющей стадии реакции и (или) порядка присоединения субстрата (или отщепления продукта). Следовательно, утверждение о кинетической важности таких комплексов, наиболее интересных с точки зрения изучения механизма действия металлоферментов, связано с большими сложностями. [c.450]

Константа диссоциации комплекса фермент—ингибитор (i ) выражается уравнением [c.232]

В случае фермента химотрипсина в качестве конкурентных ингибиторов часто выступают оптические антиподы асимметрических субстратов. Разница между оптическими изомерами подразумевает взаимодействие между ферментом и субстратом в трех точках, как это изображено схематически на рис. 123, на котором группы Р и р субстрата присоединены к поверхности молекулы фермента группами А и В, а па чувствительную связь К воздействует группа С. В случае оптического антипода субстрата взаимодействующие группы Р и Q точно так же могут быть соединены с группами А и В, однако группа В теперь слишком далеко удалена от воздействующей на нее функциональной группы С. Согласно этой модели, можно было ожидать, что константы диссоциации комплексов фермент-субстрат и фермент-ингибитор почти одинаковы. Поскольку экспериментально доказано, что константы диссоциации многих комплексов фермент-ингибитор соответствуют значениям субстрата, в этом случае можно [c.326]

В этом разделе описываются этапы аффинной элюции. Образец уравновешивают в соответствующем буфере и наносят на ионообменную колонку, заполненную, например, КМ-целлюлозой. Нужный фермент полностью адсорбируется колонку с нанесенным образцом промывают небольшим количеством исходного буфера. Если эффект аффинной элюции значителен, то pH исходного буфера может быть тем же, что и pH буфера для элюции. Однако чаще pH в колонке повышают до соответствующего значения, при ротором нужный фермент только начинает двигаться, например когда а = 0,95—0,90 (рис. 4,23 и 4.24). Затем на колонку наносят раствор лиганда, концентрация которого должна превышать по величине константу диссоциации-комплекса фермент — лиганд, и если фермента много, то общее количество лиганда, выраженное в молях, должно быть больше количества (в молях) центров связывания. С другой стороны,, концентрация лиганда не должна существенно изменять ионную-силу буфера. Максимальное количество используемого лиганда часто определяется соображениями стоимости, но если константа диссоциации его комплекса с белком достаточно высока и требуемые концентрации лиганда приводят к повышению ион-ной силы буфера, то может потребоваться введение стадии вымывания подставным лигандом . В этом случае на этапе, предшествующем элюции, используют соединение, имеющее.л от же заряд, что -И лиганд, но не связывающееся с ферментом. Все-белки, которые выходят из колонки при повышении ионной си- [c.139]

Значение а=-—- будет корнем кубического уравнения с известными коэффициентами Кр, Кг., Юр, I (= концентрации 1), тпг и ри Наоборот, зная величины Кр, Юр (исходя из оо, 0.1 рис. 4.27), /, пц р/, можно из зависимости а от / определить KL, константу диссоциации комплекса фермент — лиганд. Следует отметить, что / — концентра- [c.141]

Уо К [ + PjК ) + конкурентное ингибирование продуктом. (2.379) Здесь — константа диссоциации комплекса фермент-ингибитор [c.317]

В работе [8] было показано, что а-кетоглутарат является конкурентным ингибитором реакции окисления Ы-метил-Ь-глутама-та, катализируемого Ы-метилглутамат-дегидрогеназой. Определить константу диссоциации комплекса фермент-ингибитор, исходя из данных табл. 9. [c.89]

При изучении кинетики анаэробной реакции р-хлоралани-на с оксидазой В-аминокислот было найдено, что цианид-анионы ускоряют реакцию гидрирования фермента при окислении субстрата [16]. Исходя из данных табл. 18, найти значение константы диссоциации комплекса фермент-активатор и величину максимальной скорости ферментативной реакции при избытке цианид-ионов. [c.97]

Гидролиз метилового эфира N-aцeтил-L-фeнилaлaнинa, катализируемый а-химотрипсином, изучали методом остановленной струи, используя методику вытеснения профлавина из комплекса его с ферментом [6]. Было найдено, что уменьшение оптической плотности раствора при длине волны 465 нм (соответствующей максимуму поглощения комплекса фермент-профлавин) описывается кинетикой первого порядка (табл. 12). Из независимых экспериментов нашли, что константа диссоциации комплекса фермент-профлавин при условиях опыта равна 1 - Ю- М. Значение каталитической константы, найденное в стационарном режиме проведения реакции ферментативного гидролиза, равно 0,03 сек-. Найти значения индивидуальных констант 2, кз и /Сз (схема 9.7) при условии к2 >кз для изучаемой реакции. [c.197]

При первоначальных исследованиях константа Михаэлиса, о чем уже говорилось выше, воспринималась как константа диссоциации комплекса фермент — субстрат и, естественно, по аналогии с константами диссоциаций в других обратимых реакциях была предложена для оценки сродства субстрата к ферменту. Этот термин взят в кавычки, хотя и применяется широко в энзимологической литературе, по той причине, что он не вполне точен с точки [c.45]

Соотношение между кинетическими параметрами ферментативной реакции уравнения (13) в прямом и обратном направлениях дается уравнением Хелдена [уравнение (14)], в котором Kg и Кр — константы диссоциации комплексов фермент-субстрат и фермент-продукт соответственно. [c.245]

В этом случае зависимость в координатах Лайнувера—Берка имеет вид пучка прямых, пересекающихся в точке на оси ординат (табл. 2.5). В этом уравнении К1 — константа конкурентного ингибирования, т. е. константа диссоциации комплекса фермент — ингибитор (Е1) которая отражает срод- [c.115]

Смотреть страницы где упоминается термин Константа диссоциации комплекса ферментах: [c.258] [c.259] [c.154] [c.198] [c.210] [c.230] [c.238] [c.184] [c.18] [c.52] [c.52] [c.406] [c.427] [c.259] [c.261] [c.238] [c.283] [c.318] [c.303] [c.116]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология