Ферменты выход

В-третьих, многие компоненты обладают очень низкой устойчивостью. Часто задача состоит в том, чтобы выделить тот или иной биополимер в нативном, т.е. сохраняющем биологическую активность, состоянии. Между тем многие белки и высокополимерные нуклеиновые кислоты при умеренных температурах и незначительных изменениях pH среды подвержены необратимому изменению конформации — денатурации, которая обычно сопровождается потерей биологической активности — инактивацией. Кроме того, в клетках часто находятся ферменты, способные разрушать те или иные вещества. В первую очередь это относится к белкам и нуклеиновым кислотам, так как клетки обычно содержат ферменты, способные катализировать гидролиз этих биополимеров, — протеазы и нуклеазы. В неповрежденных клетках эти ферменты преимущественно сосредоточены в специальных гранулах — лизосомах. Однако при разрушении клеток или тканей, которое всегда предшествует началу работ по выделению интересующих исследователя веществ, лизосомы обычно разрушаются, ферменты выходят наружу, что приводит к быстрому разрушению биополимеров уже в исходной биомассе. [c.231]

Один из ферментов расщепляет молекулу тростникового сахара (сахарозы) на 1 молекулу виноградного сахара (глюкозы) и 1 молекулу фруктового сахара (фруктозы). Однако, в то время как субстрат — так называют вещество, на которое действует фермент (в нашем случае это тростниковый сахар), — существенно изменяется в результате этой реакции, фермент выходит из нее нетронутым и вследствие этого может тут же начать расщепление следующей молекулы тростникового сахара. Следовательно, одна молекула фермента может разложить гораздо большее количество субстрата по сравнению со своей собственной массой. На рис. 2 мы попытались наглядно изобразить работу двух ферментов фермент 1 обрабатывает древесный ствол, отрезая от него кругляши, а фермент 2 разрезает далее каждый из них на две половинки. Производительность ферментов огромна о некоторых ферментах клетки известно, что каждая их молекула (молекулы ферментов очень велики) в течение одной минуты способна разложить до 5 миллионов молекул субстрата, и это при 0° [c.23]

С этой точки зрения определенного интереса заслуживает вопрос о том, почему в организме человека и высших животных половина аминокислот создается самим организмом (эндогенно), а другая часть должна быть получена с пищей. Просмотр соответствующих реакций показывает, что для биосинтеза девяти эндогенных аминокислот требуется 14 ферментов, а для биосинтеза остальных 11 аминокислот (незаменимых) требуется уже 60 ферментов. Выходит, что незаменимые аминокислоты выгоднее получать с пищей, чем синтезировать, и это позволяет клетке избежать излишних затрат на постройку ферментных систем. [c.238]

Этим методом получают конъюгаты большинства гаптенов. Однако даже при 20—30-кратном избытке гаптена относительно фермента выход конъюгата не превышает 20—30%. Реакцию обычно проводят с добавлением основания (триэтиламин, трибутиламин) для удаления образуюш,ейся НС1. [c.193]

Эти методы служат для разрушения клеток и выделения ферментов в раствор. Если фермент локализован в органеллах, метод может быть использован только при условии, что органеллы также разрушаются. С другой стороны, может понадобиться предварительное выделение самих органелл, что позволит избавиться от загрязнения цитоплазматическими ферментами перед экстракцией фермента из органелл. Для этого требуется менее сильное воздействие. Предварительное растворение поверхностных коллагеновых и целлюлозных структур препаратами гидролитических ферментов позволяет в дальнейшем разрушать клетки более мягкими способами, сохраняя целостность органелл. Примером подобной методики служит получение препаратов митохондрий из таких тканей, как скелетная или сердечная мышцы, под действием протеолитических ферментов [6]. Однако эта методика применима только для получения препаратов в небольших масштабах и больше подходит для. метаболических исследований органелл, чем для очистки ферментов. Выход очищенных органелл может быть очень низким, поэтому во многих случаях лучше сначала разрушить всю ткань, а затем уже приступить к выделению нужного фермента из сложной смеси белков в экстракте. Таким образом, ферменты митохондрий и хлоропластов часто получают из тканевого гомогената, а не из выделенных органелл. [c.42]

В случае выделения гомогенного препарата рестриктазы Всп I ГС была использована для хроматографического фракционирования грубого экстракта продуцента этого фермента. В результате было достигнуто 150-ти кратное увеличение удельной активности целевого фермента, выход которого составил более 50% [196]. ГС в опытах по выделению функционально очищенных препаратов рестриктаз применяется не так уж и, часто. Приведенные выше данные, иллюстрирующие высокую эффективность этого сорбента в отношении очистки рестриктаз, убеждают о перспективности ГС для получения функционально очищенных препаратов специфических эндонуклеаз. [c.169]

На рис. 2.84 представлены теоретические кривые зависимости Е/Е, от времени при различных дозах необратимого ингибитора. Из (2.180) и рис. 2.84 видно, что при -> остаточная относительная активность фермента выходит на постоянный предельный уровень. [c.226]

Со временем относительное изменение концентрации фермента выходит на новый стационарный уровень [c.328]

Ока и Морихара [352], а также Семенов и Мартинек [466] описали синтезы с применением растворимых протеаз, при этом продукты синтеза не выпадали в осадок. В качестве катализатора для синтезов пептидов применялась также термитаза (Кёнек, Якубке [443]), хотя из-за высокой эстераз-ной активности фермента выходы бывали не всегда удовлетворительны. [c.169]

Ионообменная хроматография целлобиогидролаз и целлобиаз протекает, как правило, с высокими выходами ферментов по активности (50-90%). Иная картина наблюдается при очистке эндоглюканаз в режиме сорбции фермента с последующей его элюцией путем увеличения ионной силы. Как уже отмечалось, для этого требуется нанесение фермента при pH 7-8,5, что наряду с длительностью процесса (особенно при использовании мягких носителей типа сефадекс) приводит к значительным, до 90%, потерям активности фермента. Выходом из этого положения является применение более жестких носителей на основе сферона, трисак-рила, методов ВЭЖХ. Как будет показано ниже, это позволяет значительно увеличить разрешающую способность методов при практически полном сохранении активности фермента за счет быстрого проведения процесса. [c.125]

Аффинный сорбент А, приготовленный путем привязки ингибитора — л-аминофенил-р- о -тиогалактопиранозы — непосредственно к сефарозе, не связывает и не задерживает фермент в заметной степени. Прикрепление ингибитора через короткую ножку (- 10 А) дает сорбент Б, который очень мало задерживает фермент во время его пропускания через колонку. Для освобождения фермента из комплекса нет необходимости в изменении состава буферного раствора, п фермент выходит из колонки сразу же за неактивным белком. Только когда между ингибитором и поверхностью носителя помещена длинная ножка ( -21 А), образующийся сорбент В способен сильно связывать р-галак-тозидазу из различных бактериальных источников. Элюирование фермента происходит только после замены буферного раствора. Этот сорбент часто приводится в качестве примера очень эффективного специфического сорбента, приготовленного из ингибитора с относительно высокой константой ингибирования (5-10 моль/л) при относительно низкой концентрации аффинанта (0,6 ммоль/л). О Карра и др. [26] приготовили сорбенты, ана- [c.71]

Аланин-трансаминаза (называемая также глутамат-пируват—трансаминазой, ГПТ) и аспартат-трансаминаза (называемая также глута-мат-оксалоацетат—трансаминазой, ГОТ) играют важную роль в диагностике заболеваний сердца и печени. Тромбоз какой-либо из ветвей коронарной артерии вызывает местную аноксию и в конечном итоге отмирание одного из участков сердечной мышцы, так называемый инфаркт миокарда. При этом заболевании аланин-трансаминаза и аспар-тат-трансаминаза вместе с другими ферментами выходят из поврежденных клеток миокарда и попадают в кровоток. Определение в сыворотке крови концентрации этих двух трансаминаз и еще одного фермента миокарда, креатинкиназы, может дать ценную информацию о степени тяжести и о стадии повреждения сердечной мышцы. Креа-тинкиназа-первый фермент миокарда, появляющийся в крови после приступа ишемической болезни. Он также быстро исчезает из крови. Во вторую очередь появляется ГОТ, а затем ГПТ. Из поврежденных клеток миокарда или из клеток, испытывающих недостаток кислорода, выходит наружу и попадает в кровоток также и лактатдегидрогеназа. [c.575]

Для бактерий описаны как одно-, так и многоударные кривые летального действия. Мишени для фотодинамического удара в значительной мере определяются избирательностью накопления и сорбции красителей в различных структурах клетки. Например, акридиновые красители преимущественно концентрируются на хромосомах и вызывают их разрывы. Порфирины эффективно накапливаются в лизосомах и также повреждают их. Существенный вклад в фотосенсибилизированное повреждение клеток вносят и биологические мембраны. Еще в 1908 г. Спайксом был описан сенсибилизированный гематопор-фирином или хлорофиллом гемолиз эритроцитов. К настоящему времени фотодинамическое повреждение мембран, проявляющееся в нарушении их структуры и функции (проницаемость, активность ферментов), продемонстрировано в большом числе опытов. В частности, показана фотодинамическая деполяризация нервных и мышечных волокон, нарушение барьеров проницаемости мембран лизосом с их разрывом и выходом гидролитических ферментов, выход ионов К+ через плазматические мембраны клеток, разобщение дыхания и фосфорилирования в изолированных митохондриях. [c.349]

Недостаточность ферментов лизосом. Ферменты или ферментные системы обычно локализуются в одном определенном районе клетки. Например, ферменты системы транспорта электронов и окислительного фосфорилирования ADP, как и другие ферменты, окисляющие пируват, жирные кислоты и некоторые аминокислоты, локализуются в митохондриях. Многие гидролитические ферменты сконцентрированы в лизосомах [1128]. Если в результате разрушения мембраны лизо-сомы эти ферменты выходят в цитоплазму, вся клетка подвергается самоперевари- [c.29]

Причины того же характера приводят к появлению внутри-мембранных колебательных процессов. В качестве одного из примеров приведем катализируемый папаином, иммобилизованным в искусственной мембране, гидролиз этилового эфира N-бeнзoил-L-apгининa. Один из продуктов ферментативной реакции — аминокислота, накапливается в мембране (за счет ограничения диффузии) и тем самым сдвигает pH внутри мембраны в сторону более кислых значений. Это неизбежно уменьшает гидролитическую активность папаина, так как фермент выходит из своего рН-оптимума активности. В дальнейшем за счет более быстрой диффузии Н+ по сравнению с ОН возрастает значение pH внутри мембраны и активность папаина снова увеличивается. Таким образом, был получен микрореактор с периодом колебания 20 с. Изменением концентрации фермента в мембране, толщины мембраны и других параметров системы удается варьировать продолжительность одного колебания. [c.116]

Модифицированный метилалкантиосульфонатом антиген инактивирует люциферазу, связываясь с цистеиновым остатком ( ys 106 а-субъединицы) активного центра. На определенной стадии иммуноанализа, требующей количественного определения маркера, S — S-связь между модифицированным антигеном и активным центром фермента восстанавливается действием тиоловых = агентов, при этом реактивированный фермент выходит в раствор, где его активность легко измеряется. [c.130]

Trypanosoma ruzi Многие типы клеток Действие метаболитов 02, N0 и лизосомных ферментов Выход в цитоплазму, позволяющий избежать лизиса [c.358]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология