Мутанты клеток температурочувствительные

Трансформация клетки может быть вызвана одним геном. Температурочувствительные мутанты по гену v-sr из вируса саркомы Рауса были использованы для демонстрации того, что трансформирующий ген действует как переключатель в определенной точке клеточного цикла и в другое время не нужен для поддержания трансформированного состояния. [c.248]

Инициация репликации плазмиды R1 Е. сой регулируется белком-репрессором, кодируемым одним из генов R1. Были получены мутантные плазмиды, которые кодируют аномальный репрессор или же имеют несовершенный механизм регуляции его образования. Некоторые из этих мутантов т-температурочувствительные (репрессор неактивен при 43 °С). При 30 °С репликация идет нормально, и на клетку образуется 1—2 плазмидные копии, а при 43 °С репликация инициируется гораздо чаще, так что в клетке накапливается по нескольку сот плазмид. Небольшой сегмент R1, содержащий участок начала репликации и связанные с ними регулирующие элементы, был использован для создания плазмид-векторов, п-рименяемых при клонировании разнообразных генов. -Преимущество таких векторов заключается в том, что при повышенной температуре с их помощью можно получать множества копий клонируемого гена, а следовательно, и много белка, кодируемого этим геном. [c.306]

Рис. 13.5. А. Включение Н-тимина (черные кружки) и С-лейцина (цветные кружки) в клетки температурочувствительного мутанта (1паЕ при рестриктивной температуре. После температурного сдвига до 42,5° синтез ДНК практически немедленно прекращается, в то время как синтез белка продолжается с нормальной скоростью. Сравните это с поведением клеток температурочувствительного мутанта (1паА (включение Н-тимина-черные квадратики включение С-лейцина-цветные

Б. Характер репликации в бесклеточных экстрактах мутантов по существу не отличается от такового в интактных клетках. В экстрактах быстро останавливающихся мутантов при температуре 42 °С синтез ДНК прекращается сразу же, тогда как в случае медленно останавливающихся мутантов синтез ДНК продолжается в течение еще нескольких минут после повышения температуры до 42 °С. Предположим, что экстракты из мутанта, дефектного по температурочувствительной ДНК-геликазе, и из мутанта по температурочувствительной ДНК-лигазе были смешаны при 42 °С. Какой фенотип будет показывать смесь быстро останавливающийся , медленно останавливающийся или немутантный [c.27]

Время основного фосфорилирования гистона Н1 навело на мысль о том, что он может участвовать в митотической конденсации хромосом. Это согласуется с данными о необходимости гистона Н1 для образования нитей хроматина размером 30 нм (гл. 29). Некоторые температурочувствительные мутанты, дефектные по Н1-фосфори-лированию, не способны закончить репликацию ДНК и завершить деление клетки. Но такая корреляция не говорит ничего о том, является ли фосфорилирование причиной или сопутствующим событием митотической конденсации. [c.385]

С культивируемыми клеточными линиями млекопитающих можно проводить генетические эксперименты, используя подходы, аналогичные тем, которые применяются при генетическом исследовании микроорганизмов. Например, можно отобрать температурочувствительные мутанты, растущие при 34° С, но не при 40°С. При обработке мутагенами культуры клеток яичника китайского хомячка удалось получить целый ряд мутантных линий с фенотипом чувствительности к температуре. Клетки некоторых из этих линий не растут при 40°С из-за нарушения способности к синтезу белков. Этот же дефект проявляется и в опытах in vitro при 40°С. Однако мутантные клетки приобретают способность к росту при 40°С на среде с 10-100-кратным превышением концентрации одной из 20 содержащихся в обычной среде аминокислот. Для каждого типа мутантов спасительным оказывается избыток только одной определенной аминокислоты. На основании ваших знаний о механизме биосинтеза и об особенностях функционирования белков ответьте на вопрос [c.64]

Первые указания на то, что в системе репликации ДНК участвует целый ряд важных генетических функций, были получены благодаря выделению широкого набора условно-летальных температурочувствительных мутантов Е. соН (dna ), комплементационный анализ которых позволил соотнести их с мутациями в ряде различных генов. Среди них можно выделить два класса мутантов, которые при рестриктивной температуре (1) немедленно прекращают синтез ДНК или (2) в течение относительно протяженного временного интервала постепенно прекращают синтезировать ДНК (рис. 13.5). Первый фенотип связан с нарушением процесса синтеза ДНК в репликативной вилке, а второй-с исчезновением способности инициировать новый цикл репликации хромосомы. (В несинхронизированной культуре индивидуальные клетки мутантов второго класса, находящиеся на различных стадиях репликации, начавшейся еще при пермиссивной температуре, не прекращают синтезировать ДНК после повышения температуры до полного завершения цикла репликации хромосомы.) После сопоставления выделенных мутаций с определенными белками, на которых сказываются эти мутации, можно начать изучение функциональной роли этих белков in vivo. Локализация генов, ответственных за репликацию ДНК, на хромосоме Е. соИ показана на рис. 13.6. [c.112]

Используя температурочувствительные мутанты дрожжей, легко клонировать гены этого организма, ответственные за транспорт. Такой подход чрезвычайно плодотворен, т. к. позволяет напрямую выявить главные белки транспортного механизма, не зная даже, как происходит секреция. Один из дрожжевых генов, отвечающих за секрецию, который был выявлен таким образом - это ген se 4. Полагают, что он кодирует GTP-связывающий белок из семейства ras (см. разд. 12.3.11 и 13.4.6). Биохимические эксперименты на клетках млекопитающих свидетельствуют о ТОМ- что сходный GTP-связываюший белок участвует в везикулярном транспорте и у высщих эукариот Возможно, он регулирует раздевание неклатриновых окаймленных пузырьков перед их связыванием с мембранами. [c.84]

Для идентификации вирусных онкогенов используются различные методики. Удобным генетическим подходом является получение мутаций в онкогене, ведущих к его инактивации при повышенной температуре. У таких температурочувствительных мутантов можно включать или выключать данный ген, просто повьппая или понижая температуру. При более низкой температуре (34°С) чувствительные клетки, содержащие вирусный онкоген, будут обладать опухолевым фенотипом и, например, расти в отсутствие некоторых факторов, в которых они нуждались ранее (табл. 11-1). Если затем экспрессию онкогена подавить, повысив температуру до 39°С, то клетки быстро (обычно через несколько часов) вернутся к нормальному фенотипу (рис. 11-15). Подобный цикл изменений фенотипа можно повторять многократно. Эти изменения доказывают, что температурочувствительный ген вируса-это и есть ген, ответственный за неопластическую трансформацию клеток, и, следовательно, его можно считать онкогеном. [c.153]

Природа клегочного цикла прояснилась в результате изучения мутантных клеток, растущих и делящихся при низких температурах (34°С для клеток млекопитающих, 23°С для клеток дрожжей), но не растущих при высоких температурах (39 и 36°С соответственно). У таких температурочувствительных мутантов обычно имеется лишь один измененный белок, который функционирует только при низкой температуре. У большинства таких мутантов рост нарушается вскоре после повьш1ения температуры. Однако некоторые редкие мутанты перестают расти лишь тогда, когда клетка достигает определенной стадии цикла, напримф начала синтеза ДНК, деления ядра или цитокинеза (рис. 11-32). [c.169]

У штаммов дикого типа, Rel+ (т. е. со строгим аминокислотным контролем синтеза РНК), лишение клеток необходимой им аминокислоты быстро останавливает не только синтез белка, но и дальнейшее образование РНК- Оказалось, что решающее значение имеет отсутствие в клетках полного комплекта аминоацил-тРНК, т. е. активированных аминокислот. Так, синтез РНК прекращается, например, при тепловой инактивации мутантных температурочувствительных аминоацил-тРНК-синтетаз. У мутантов Rel (так называемых штаммов с ослабленным аминокислотным контролем синтеза РНК ) в аналогичных условиях образование РНК продолжается еше некоторое время после остановки синтеза белка. [c.27]

В качестве плазмидных векторов для доставки транспозонов используют температурочувствительные по репликации мутанты плазмид. Клетки, получившие такую плазмиду, содержащую транспозон, высевают на селективную среду и культивируют при повышенной температуре. В этих условиях плазмида элиминируется и устойчивость к антибиотику может возникать в результате перемещения транспозона в хромосому. Другой способ избавления от плазмидного вектора связан с использованием реципиента, несущего плазмиду той же группы несовместимости. В условиях, исключающих утрату клетками резидентной плазмиды, ведут отбор трансконъюгантов по признаку, детерминируемому транспозоном. Их появление может быть обусловлено перемещением Тп-элемента в хромосому бактерии. [c.111]

Недавно проведенные исследования температурочувствительных мутантов позволили сделать прямое сравнение нормальных и трансформированных фенотипов одних и тех же инфицированных клеток. В исследованиях Singer и соавт. (в частности, Ash et al., 1970 arroll et al., 1978) определены свойства, характерные для клеток, трансформированных в результате использования температурочувствительного мутанта вируса саркомы Рауса, где возникает меньше вариантов, связанных с проблемами селекции клеток. Изученные трансформированные клетки имели следующие свойства усиленный гликолиз, беспорядочное распределение внутриклеточных гладкомышечных миозиноподобных молекул, способность в этих клетках поверхностных молекул — рецепторов для КонА — формировать кластеры при обработке КонА. При изучении таких температурочувствительных мутантов наблюдали, что определенные структурные характеристики трансформированного фенотипа могут быть обратимы при введении ингибиторов синтеза белков в клетки, растущие при пермиссивной температуре. [c.163]

Синхронизировать рост клеток такого мутанта очень труда но вам хотелось бы как можно точнее установить, в какой тон клеточного цикла температурочувствительный продукт гена дол жен действовать, чтобы клетка завершила цикл. Критическа точка, где действует данный продукт,-это точка удара да мутанта. Один толковый приятель, у которого есть хорош микроскоп с нагревательным столиком и видеокамера для i раферной съемки, предлагает вам заснять клетки в поле зреш при повышении температуры и проследить таким способом з поведением отдельных клеток при остановке их роста. Посколы это неподвижный организм, то относительно легко наблюдать изменениями в индивидуальных клетках. Чтобы разобратье [c.242]

A. Точка удара для вашего температурочувствительного мутанта отмечена на рис. 13-15. После повышения температуры те клетки, которые находились в точке цикла, предшествующей точке удара, росли, достигая характерных размеров (landmark-морфология), но не делились. Клетки, находившиеся в момент повышения температуры в фазах цикла, следуюш 1х за точкой удара, делились и затем останавливались в ходе дальнейшего цикла, достигнув определенных размеров. [c.476]

Для всех клеток, за исключением клеток членистоногих, репликация тогавирусов является летальным событием. При этом в клетке почти полностью подавляется синтез макромолекул и очень быстро блокируется функционирование Na/K-АТРазы [29]. Однако известны многочисленные хорошо документированные случаи, когда устанавливается персистентная инфекция. Большинство из них характеризуется низким содержанием вируса или дефектными формами вирусного генома. Некоторые из дефектных вирусов фенотипически проявляются как температурочувствительные мутанты или мутанты по типу бляшек. Другие имеют свойства дефектных интерферирующих (ДИ) частиц [11, 95]. ДИ-частицы представляют собой обычный продукт большинства систем вирус—клетка они содержат делеционный вариант вирусного генома, в котором сохраняются участки, необходимые для репликации нуклеиновой кислоты и ее упаковки в вирионы. У большинства ДИ-частиц нормальные последовательности генома перетасованы, но в то же время определенные области сохраняются. У SFV и SIN последние состоят из З -конца и последовательности около 5 -кон-ца РНК [44, 55, 57, 82] (рис. 21.2). Наиболее интересная последовательность недавно обнаружена у двух ДИ-РНК SIN. На 5 -конце РНК этих ДИ-частиц последовательности практически идентичны тРНК Р клеток крысы [57]. Возможное значение этой структуры обсуждалось ранее в связи с репликацией РНК. В присутствии ДИ-РНК репликация нормальной вирусной РНК подавлена и репликация вируса оказывается угнетенной. При этом инфекция становится намного менее цитопатической и клетки могут выжить. Персистентная инфекция такого типа обычно оказывается временной она заканчивается либо полным излечением (т. е. потерей всей вирусной генетической информации), либо самопроизвольным кризисом с обильной продукцией вируса и цитопатическим действием. Эти состояния имитируют некоторые вирусные заболевания (хотя в последних важную роль в подавлении размножения вируса играют иммунные защитные механизмы), а иногда, возможно указывают на существование необычных типов патогенности. [c.360]

Топоизомераза типа И ковалентно связывается с обеими цепями двойной спирали ДНК и вноситв нее на время двухцепочечный разрыв. Ферменты этого типа активируются под действием тех участков на хромосомах, где перекрестились спирали. Присоединившись к такому перекресту, топоизомераза 1) обратимо разрывает одну из двух двойных спиралей, создавая тем самым для другой своего рода ворота , 2) вынуждает вторую двойную спираль пройти через этот разрыв и 3) сшивает обе разорванные цепи, а затем отделяется от Д Е1К. Действуя подобным образом, топоизомеразы типа П очень быстро разделяют две сцепленные кольцевые молекулы ДНК (рис. 5-53). Точно так же предотвращают они и спутывание молекул ДНК, которое в противном случае неизбежно создавало бы при репликации серьезную проблему. Известны температурочувствительные мутанты дрожжей, вырабатывающие топоизомеразу И, которая при 37°С инактивируется. Если нагреть эти дрожжевые клетки до такой температуры, то их хромосомы в процессе митоза остаются спутанными и не могут разойтись. Насколько необходим для распутывания хромосом такой инструмент , как топоизомераза П, поймет каждый, кто хоть раз пытался распутать безнадежно запутавшуюся леску, не имея под рукой ножниц. [c.299]

Смотреть страницы где упоминается термин Мутанты клеток температурочувствительные: [c.230] [c.244] [c.21] [c.223] [c.237] [c.187] [c.110] [c.43] [c.109] [c.164] [c.171] [c.184] [c.193] [c.253] [c.21] [c.237] [c.251] [c.252] [c.268] [c.244]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология