Седиментация белков

Ультрацентрифугирование позволяет, однако, на основании различной скорости седиментации белков, испытывать белковые препараты не однородность в отношении размеров их частиц. [c.396]

Молекулярная масса белка пропорциональна его коэффициенту седиментации, коэффициенту диффузии и плотности. Измерив в независимых опытах коэффициент диффузии и плотность, можно вычислить молекулярную массу Поскольку наибольшие трудности вызывает измерение коэффициента диффузии, нередко ограничиваются указанием только коэффициента седиментации белка, а также и других высокомолекулярных веш еств и частиц (208-белок, 608-частица, 188-РНК и т. д.). Эти величины позволяют оценить относительные размеры молекул и частиц, однако надо учитывать, что зависимость коэффициента седиментации от молекулярной массы нелинейная. [c.44]

Рис. 167. Седиментация белко (вре-мя между снимками — 5 мин)

Рис. 123. Седиментация белков (время между снимками — 5 мин)

Применение ультрацентрифуг, в которых ускорение в миллион раз превосходит ускорение силы тяжести, дало возможность изучить седиментацию белков и других высокомолекулярных соединений, а также вирусов. [c.319]

Значения коэффициентов седиментации белков лежат в интервале от 10 до 200- 10 з с. Величина 10 с носит название сведберг. [c.614]

Скорости седиментации синтетических полиэлектролитов, несущих большой заряд, исследованы далеко не так подробно, как скорости седиментации белков. Как и следовало предположить, константа седиментации существенно зависит от концентрации постороннего электролита вследствие хорошо известной зависимости эффективного объема от полного заряда [66, 108]. [c.57]

Ультрацентрифуга, разработанная Сведбергом, развивает центробежную силу, превышающую приблизительно в 500 ООО раз силу земного притяжения. Центробежная сила пропорциональна радиусу вращения и квадрату скорости вращения. Если на белковый раствор воздействовать очень большой центробежной силой, то процесс седиментации белка будет протекать гораздо быстрее, чем процесс диффузии. Первоначально белковые молекулы равномерно распределены в растворителе, но под действием центробежной силы они удаляются от оси вращения и между водой и белковым раствором образуется довольно четкая граница. В области границы заметно изменяется показатель преломления, и это позволяет следить зг движением границы во время центрифугирования с помощью различных, специально сконструированных оптических систем. При исследовании однородных молекул наблюдается одна-единствен-ная граница. Если же присутствуют два белка и они достаточно различаются по размерам молекул, то образуются две границы. Скорость движения границы выражается формулой [c.15]

Нужно заметить, что коэффициенты седиментации белков, подобно коэффициентам диффузии (см. стр. 412), зависят от свойств растворителя и обычно приводятся к стандартным условиям. При помощи уравнения (22-23) можно выразить к через О", а затем использовать уравнение (21-29), чтобы рассчитать стандартный коэффициент седиментации 5 Если символы без индексов относятся к растворителю, в котором были произведены измерения, а индекс з относится к стандартному растворителю, то можно написать [c.437]

Развиваясь, процесс коагуляции приводит к образованию настолько крупных частиц, что силы, удерживающие их в растворе, становятся недостаточными и происходит выпадение белкового вещества в осадок (седиментация). Белки, как лиофильные коллоиды, особенно чувствительны к катионам тяжелых металлов (Нд, РЬ, Ре, Си). Особенностью белков, как лиофильных коллоидов, является также то обстоятельство, что молекулы белка силь- [c.227]

Ультрацентрифуга сама но себе дает не молекулярный вес, а константу седиментации белка 8. По определению, это скорость движения макромолек л в поле с ускорением, равным единице [c.112]

Уравнение (II, 39) используется для определения молекулярных весов. Коэффициент седиментации белков обычно сек. В честь Т. Сведберга коэффициент седиментации 10 сек принят в качестве единицы и называется сведберг. [c.47]

Белки очищают методом диализа или ультрацентрифугированием. Молекулы одного чистого белка передвигаются в электрическом поле с одинаковой скоростью в одном и том же направлении (электрофорез) и дают один пик на диаграмме седиментации белка. 289 [c.289]

Было установлено, что наблюдаемые различия в скоростях седиментации достаточны для использования их в целях разделения компонентов смеси, однако ячейки, сконструированные для наблюдения за оседанием, не годились для препаративного разделения. В 1937 г. Сведберг [277] описал ячейку, позволявшую производить разделение небольших количеств белковой смеси в приборе с оптическим устройством для наблюдения. Поперек ячейки под прямым углом к направлению оседания помещалась пористая перегородка, покрытая плотной фильтровальной бумагой. Оптическое наблюдение показало, что такая перегородка существенно не затрудняет седиментацию белка, однако она предотвращает обратное смешивание в течение времени, доста- [c.65]

От чего зависит скорость седиментации белков а) от числа растворенных молекул б) от молекулярной массы белка в) от плотности растворителя разделяемых белков [c.23]

Существуют два главных явления, изучаемых при помощи ультрацентрифуги скорость седиментации и седиментационное равновесие вещества в растворе. Для изучения этих явлений необходима аппаратура двух типов, так как при сравнительно низких скоростях вращения—от 1000 до 20 ООО об/мин — скорость седиментации белков и высокополимерных соединений имеет тот же порядок величины, что и скорость диффузии, тогда как для того, чтобы преодолеть диффузию и получить пригодную для наблюдения перемещающуюся границу седиментации, необходимы чрезвычайно высокие скорости — до 75 ООО об/мин. Основными требованиями, предъявляемыми ко всем типам ультрацентрифуг, являются отсутствие вибрации и конвекции и, для оптической системы, четкость изображения. [c.488]

В опыте с альбумином яйца в буферном водном растворе (pH 6) в ультрацентрифуге было определено по изменению положения градиента показателя преломления со временем, что граница передвигалась на 6,3 мм за 105 мин. Скорость центрифуги 57000 об/мин. Расстояние от центра вращения 6,43 см. Показать, что коэффициент седиментации белка после умножения на 0,81 для поправки на плотность и вязкость равен 3,5-Ю сек. [c.627]

Объект коэффициент седиментации белки (число) РНК (коэффициент седиментации) коэффициент седиментации белки (число) РНК (коэффициент седиментации) [c.387]

ВИЯ негомогенности в 5. Эга система широко используется, особенно для определения коэффициентов седиментации белков . [c.288]

В эти годы созданы новые физ.-хим. методы аиализа. Были заложены основы хроматографич. методов (М. С. Цвет, 1906). В 20-х гг. Т. Сведберг предложил использовать для седиментации белков ультрацентрифугу, вскоре этим методом был выделен ряд вирусов. В 30-х гг. А. Тизе-лиусом заложены основы электрофореза, в 1944 А. Мартином и др. создана распределит, хроматография, для определения структуры прир. соед. впервые стал использоваться рентгеноструктурный анализ (Д. Кроуфут-Ходжкин, 40-е гг.). Благодаря использованию физ.-хим. методов в 50-х гг. достигнуты крупные успехи в изучении двух важнейших классов биополимеров-белков и нуклеиновых к-т Э. Чар-гафф провел детальный хим. анализ нуклеиновых к-т, открыта двойная спираль ДНК (Дж. Уотсон и Ф. Крик, 1953), определена структура инсулина (Ф. Сенгер, 1953), одновременно осуществлен синтез пептидных гормонов -окситоцина и вазопрессина (Дю Виньо, 1953), открыт один из элементов пространственной структуры белков- спираль (Л. Полинг, 1951). В эти годы Р. Замечником открыты рибосомы, что послужило стимулом для изучения механизма синтеза белка. [c.292]

Скорость седиментации белка в гравитационном поле (1х1й1 можно определить фотографическим методом, фиксируя положения максимума кон- [c.66]

Движущий механизм. Устройство воздушной турбины описано в работах Пикельса и сотрудников [49—51]. Применяются два ряда сопел один для поддержки н вращения турбины и ротора и ряд обратных сопел для быстрого торможения ротора. Применяемый ротор овальной формы может вращаться со скоростью до 60 ООО об/мин без опасной вибрации или конвекции, нарушающей нормальный ход седиментации белков и высокополимерных молекул. [c.504]

Рис. 5.2. Изменение концеитрации с белка (а) и градиента концентрации йс йк (б) в ячейке ультрацентрифуги на различных стадиях центрифугирования. Направление седиментации — слева направо. А — верх ячейки В — дно ячейки X—расстояние от оси вращения t — время. Перед началом центрифугнронання концентрация белка во всех точках ячейки одинакова, и d ldx=0. Через время /] происходит частичная седиментация белка, и его концентрация увеличивается в направлении ко дну ячейки в верхней части ячейки концентрация бе.пка близка к нулю. Изменение с и d /dx во времени при дальнейшем центрифугировании ил люстрируется соответствующими кривыми (<2, и <4).

Проблема состоит в том, что почти все уравнения, используемые в центрифугировании, выводятся при допущении, что система состоит только из двух компонентов — молекул растворителя и молекул, седиментационные свойства которых требуется изучить. Однако на практике обычно этого не бывает вследствие добавления проотивоионов. Реальная концентрация противоионов составляет от 0,01 до 1,0 М, тогда как концентрация изучаемых молекул—от 1,0 10 5 до 1,0 10 М. Обычно это осложнение игнорируют, так как при концентрации соли менее 0,05 М не отмечается никаких аномалий. Однако для 1 М Na l, служащего обычным растворителем для ДНК, должны быть введены некоторые поправки. Тем не менее, как правило, этого не делают, поскольку гидродинамическая теория седиментации ДНК еще до конца не разработана, так что эти поправки не вносят существенных различий. Однако проблема становится достаточно острой при седиментации белков в 5 М хлориде гуанидиния или 7 М мочевине. [c.298]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология