Суспензии клеток

На инициировании светом реакций полимеризации основан принцип действия установки, изображенной на рис.1. Растворы сополимеров полиакриламида, катализаторов, суспензия клеток подавались [c.167]

Есть хорошо известный эксперимент если губку, примитивное многоклеточное животное, расчленить до отдельных клеток, а затем оставить суспензию этих клеток в покое, то через некоторое время они вновь объединятся в многоклеточный организм. Если смешать суспензии клеток из губок двух различных видов, то при их объединении само- [c.155]

Среду для замораживания клеток получают смешиванием при 4°С 50% ростовой среды, 10% ДМСО и 40% сыворотки. Берут 50 мл суспензии клеток, осаждают их центрифугированием, удаляют супернатант. Клетки (5-10 —10 ) суспендируют в 1 мл среды для замораживания и переносят в специальные ампулы. Их выдерживают в течение часа при 4°С, затем помещают в коробку из пенопласта и переносят в холодильник на —70°С, где выдерживают в течение ночи. На следующий день ампулы с клетками помещают в жидкий азот. [c.314]

Для размораживания клеток ампулы извлекают из жидкого азота, помещают в водяную баню при 37 °С. После полного размораживания клетки стерильно переносят в пробирки и отмывают центрифугированием в 50 мл ростовой среды. Супернатант удаляют, клетки суспендируют в свежей порции ростовой среды (15—25 мл) и помещают в культуральный матрас. На следующий день 100 мкл суспензии клеток смешивают со 100 мкл трипанового синего и подсчитывают живые клетки в камере Горяева (трипановый синий окрашивает только поврежденные клетки). Жизнеспособность размороженных клеток обычно составляет не менее 80%. [c.314]

По методу, разработанному Солком, вирус полиомиелита размножают в тканевой культуре почек обезьяны. Для этого ткань коркового слоя свежих почек размельчают и суспендируют в специальной среде (№ 199). Затем размельченную ткань многократно обрабатывают по 20 мин 0,5%-ным раствором трипсина при pH среды 7,6, чтобы ферментативно гидролизовать ткани и отделись клетки одну от другой. Затем суспензию клеток центрифугируют и клетки суспендируют в той же среде с добавками плазмы телячьей крови или гидролизата лактальбумина. Суспензию клеток инкубируют 5 сут в особых сосудах, где за это время на стенках сосуда образуется однослойная пленка клеток. [c.126]

Для получения агарового нитрагина готовят отвар гороха нли бобов с добавлением 1,0% сахарозы и 1,5% агара. Стерильную среду заливают в пол-литровые бутылки, где она затвердевает. Посевной материал также размножают в гороховом или бобовом отваре и затем суспензией клеток заливают поверхность агара в бутылках. Бутылки помещают в термокамеру при 20°С на несколько суток, пока масса бактерий не покроет всю поверхность питательной среды. Готовый агаровый нитрагин хранят в прохладном (О —10°С), хорошо проветриваемом помещении. Для обработки семян препарат можно использовать в течение [c.129]

ПОЛИВИНИЛОВОГО спирта в дистиллированной воде. После полного растворения носителя путем подогрева и последующего охлаждения раствора в него вносили водную суспензию клеток, тщательно перемешивали и гомогенную суспензию затем разливали на чашки Петри. Пленку высушивали, измельчали на фрагменты размером 100—200 мм , промывали холодной водой 2 ч и использовали для трансформации гидрокортизона. Через 30 сут хранения высушенной пленки при 4°С активность 1,2-дегидрогеназы снижалась на 40%. Такая же активность фермента была обнаружена через 12 мес хранения. [c.207]

Для выделения клеток из больших объемов культуральной среды часто используют высокоскоростное центрифугирование. Для этого сконструированы специальные высокоскоростные центрифуги полунепрерывного действия. Суспензию клеток непрерывно подают в барабан работающей центрифуги, клетки концент- [c.363]

Ячмень Суспензия клеток, незрелые зиготические зародыши [c.381]

Иммобилизация клеток в виде монослоев. С помощью стерильной микропипетки с фиксированным объемом суспензию клеток вносят в лунки специальных полистирольных плат, используемых для культивирования в монослое иммобилизованных клеток-мишеней, добавляя гликопротеины сыворотки и факторы связывания (рис. 10.2). [c.319]

Опыты проводили с суспензиями клеток различных микроорганизмов на дистиллированной воде в качестве заполнителя использовали необработанный силикагель. Для большей четкости изображения брали окрашенные фуксином п метиленовым синим силикагель и дрожжи, а наблюдение вели в плоскости, проходящей через диаметр шариков заполнителя. [c.216]

В работах [156, 157] приведены данные о влиянии добавок большого числа разнообразных флокулянтов на степень концентрирования суспензии клеток Е. соИ, являющейся модельной бактериальной дисперсией и служащей показателем биологического загрязнения вод. Дисперсию [c.156]

При адсорбции главную роль ифают ионное и электростатическое взаимодействие носителя и поверхности клеток, поглощение пористой поверхностью, капиллярные явления. Однако сродство того или другого микроорганизма к адсорбенту во многих случа)Гх непредсказуемо. Сам метод технологичск. Суспензия клеток смешивается с носителем, перемешивается несколько часов на качалке, лучше выдержать ее затем при 4°С несколько часов, а затем тщательно отмыть носитель от невключившихся клеток. Положительными качествами метода адсорбции являются следующие относительная дешевизна носителей, отсутствие диффузионных затруднений и токсичного воздействия на микроорганизмы. Преимуществом неорганических адсорбентов, кроме того, можно признать устойчивость к воздействию микроорганизмов, стабильность объема при действии давлений и потока субстрата, высокую плотность. [c.164]

Препарат глюкозоизомеразы получают двумя способами клетки мицелия подвергают определенной обработке с целью фиксирования фермента внутри клетки и используют эту биомассу для изомеризации фермент выделяют обработкой водной суспензии клеток ультразвуком или просто экстракцией растворителями. Для очистки применяют диализ. [c.136]

Слияние клеток. Смешивают суспензии клеток миеломы и селезенки в соотношении 1 10 и центрифугируют в течение 8 мин при 800 об/мин. Супернатант полностью сливают. Осадок встряхивают и по каплям добавляют 1 мл 50%-ного раствора ПЭГ с ДМСО в течение 1 мин при постоянном встряхивании пробирки. Клетки центрифугируют в следующем режиме разгоняют центрифугу до 1000 об/мин и тут же выключают. После остановки центрифуги вынимают пробирку с осевшими клетками и суспендируют клетки встряхиванием в том же растворе ПЭГ. К суспензии клеток добавляют по каплям 1 мл бессывороточной среды в течение 1 мин, затем каждую последующую минуту удваивают объем, добавляя 2, 4, 8 и 16 мл соответственно при постоянном встряхивании пробирки до конечного объема 32 мл. Клетки центрифугируют в обычном режиме в течение 8 мин при 800 об/мин. Супернатант отбрасывают, клетки суспендируют в селективной среде ГАТ в концентрации 10 —5-10 клеток в 1 мл. Полученную суспензию клеток распределяют в 96-луночные микропланшеты по 200 мкл в лунку (5—10 микропланшетов). Микропланшеты помещают во влажный СОг-инкубатор с 5% СО2. [c.312]

В производстве антибиотиков используют вакуум-фильтры непрерывного действия с автоматической сменой операций фильтрации, мойки, сушки и снятия отфильтрованного слоя. Для улучшения хода фильтрации суспензию клеток обрабатывают кислотой, электролитами или термически, вызывая таким образом коагу- [c.94]

Биомассу дрожжей отделяют от культуральной жидкости, используя сепараторы, производительность которых 16—35 м ч. Сепарирование обычно идет в три этапа, при двукратной промывке суспензии клеток водой для удаления остатков среды, бактерий и примесей. Получают концентрат дрожжей, содержащий 80—120 г/л сухой биомассы. Его охлаждают до 8—10°С, фильтруют на вакуум-фильтрах или фильтр-прессах и получают дрожжевую пасту с 70—75%-ной влажностью. После кондиционирования пасты водой до стандартной (75%)) влажности, дрожжи форнуют в плитки массой 50, 100, 500, 1000 г и упаковывают. Хранят прессованные дрожжи при температуре О—4°С до 10 сут. Хлебопекарные дрожжи можно высушивать при температуре 30—40°С до влажности 8% и хранить до 6 мес. [c.106]

Культуру в объеме 5 л выращивали при 30 °С в присутствии ампициллина и канамицина, с тем чтобы обеспечить условия для сохранения обеих плазмид, а затем использовали в качестве посевного материала для инициации роста культуры без антибиотиков при 30 °С в реакторе с рабочим объемом 45 л. Суспензия клеток из 45-ли-трового ферментера в свою очередь служила посевным материалом для культивирования в биореакторе на 600 л, в котором клетки продолжали выращивать при 30 °С без антибиотиков (рис. 16.6). (Вообще говоря, для уменьшения стоимости процесса антибиотики при крупно- [c.362]

Еше один механический метод разрушения клеток — соударение. Клеточную суспензию большой вязкости направляют под давлением на неподвижную поверхность или навстречу потоку другой суспензии. В месте соприкосновения выделяется большое количество энергии, разрушающей клетки. Таким способом с помощью устройства под названием Mi roflmdizer за один прием была разрушена большая часть клеток Е. соИ в двух встречных потоках суспензии. Однако для разрушения клеток других микроорганизмов может понадобиться большее число раундов. В отличие от гомогенизаторов под высоким давлением и высокоскоростных шаровых мельниц, в которых, как правило, используются концентрированные клеточные суспензии, данное устройство пригодно для обработки любых суспензий. Как показали предварительные исследования, активность клеточных белков уменьшается при разрушении клеток по этой методике лишь незначительно, А если обработать суспензию клеток небольшим количеством лизоцима, а затем использовать устройство Mi rofluidizer в режиме пониженного по сравнению с обычным давления и при небольшой вязкости, то сохранится активность некоторых лабильных белков, инактивирующихся при высоком давлении. [c.366]

Б. В. Перфильев сконструировал специальный прибор — микроселектор наиболее существенной его частью является стеклянный микрокапилляр, имеющий прямоугольное сечение. Канал микрокапилляра хорошо просматривается под микроскопом даже с иммерсионным объективом. Стерильный капилляр заполняют исследуемой суспензией клеток и при большом увели- [c.79]

Для анализа клубеньковых бактерий в нитрагине на стерильное часовое стекло стерильной ложкой берут 10 г нитрагина, переносят его в колбу емкостью 250 мл со 100 мл стерильной водопроводной воды и встряхивают колбу в течение 5 мин. Получают разведение 10 . Затем готовят последующие разведения (10-2 10-3 10- 10- 10 10- и 10 ). Для этого из предшествующего разведения после минутного встряхивания стерильной моровской пипеткой переносят 10 мл в колбу с 90 мл воды. Из последних трех разведений берут 2 раза по 1 мл суспензии клеток и переносят в две параллельные чашки Петри. Чашки заливают 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С бобового агара или манпитно-дрожжевого агара. [c.188]

Второй тип ксилоглюкаиов был выделен из культуральной суспензии клеток сикомора и фасоли, муки из семян рапса, оболочек семян рапса, бобов сои, культуральной суспензии клеток соевых бобов и других растений. Этот тип ксилоглюкаиов признан как компонент клеточных стенок. Он содержит фукозу в сочетании с глюкозой, ксилозой и галактозой. В то время как Структуры кси-логлюканов двудольных были исследованы детально, ксилоглюканы однодольных изучены недостаточно. [c.105]

Очевидно, что в рассматриваемом случае ну кно отобрать те 14летки, в которые проникли плазмиды со встроенным геном. Такие клетки должны сохранить способность расти на среде, содержащей тетрацГи лип, ген которого остался неповрежденным, и утерять способность расти на среде, содержащей ампициллин, поскольку его ген испорчен введенной вставкой. Поэтому разбавленную суспензию клеток, обработанную описанной с гесью Д1П, наносят на плоские чашки, в которые залит агаровый гель, содерлсащий все компоненты, необ.чодимые для [c.303]

Культура растительных клеток является искусственно созданной биологической системой, функционирующей in vitro и сохраняющей многие черты, присущие интактному растению. Имеется два варианта функционирования таких систем в виде каллуса, образовавшегося в процессе поверхностного культивирования, а также в виде суспензии клеток в результате глубинного культивирования. Каллус — весьма гетерогенное образование (рис. 31.2). Он представляет собой совокупность недифференцированных клеток, способных синтезировать некоторые метаболиты, присущие целому растению. [c.496]

Суспензия клеток более гомогенна, чем каллус, и проявляет способность к более быстрому росту и адапта-Рис. 31.2. Каллус Перевод клеток в культуру является сильным стрес- [c.496]

Тест на ростовые трубки С. albi ans. Материал из колонии грибов деревянной палочкой-аппликатором переносят в 0,5 мл стерильной сыворотки теленка (сыворотку можно хранить до 6 мес в замороженном состоянии). После приготовления суспензии клеток в сыворотке пробирки помещают в термостат при 37 1 °С на 2,5 —3,0 ч. Затем из смеси готовят препарат раздавленной капли и микроскопируют с объективом 40х. В качестве положительного [c.321]

Рис. 143. Использование тка-ни-"няньки" (суспензионная культура) при выращивании колоний из одиночных клеток кукурузы или протопластов (схема) 1 — качалоч-ная колба, 2 — колония, возникшая из отдельной клетки, 3 — фильтровальная бумага, 4 —металлическая сетка, 5 — суспензия клеток "кормящего слоя", 6 — подложка (пенополиуретан), 7 — питательная среда.

ДЛЯ синтеза пуринов. Клетки селезенки не обладают таким генетическим дефектом и поэтому миеломные клетки, не синтезирующие нуклеотиды, через определенноезремя исчезают из культуры. Гибридомы остаются единственными делящимися клетками. Тогда через сутки инкубации 50% объема среды заменяют на среду, содержащую Ю М гщюксантина, 10 М аминоптерина и 4 10 М тимидина (среда ГА1 ). Среду сменяют каждые сутки в течение двух дней, а затем — один раз через 48 часов. Примерно через 2 недели гибридомы начинают активно расти. Необходимо следить, чтобы не было слишком густого роста — признак развития поликлональной популяции негустая суспензия клеток обеспечивает рост моноклональных гибридом (выживаемость клеток при этом невысокая). [c.575]

Рост бактерий и дрожжей в культуре приводит в основном к образованию более или менее равномерно мутной суспензии клеток, имеющей вид тонкой эмульсии типа сливок в курином бульоне. pH такого раствора в конце наиболее энергичного роста микробов (к этому времени большая часть питательной среды бывает израсходована) может быть выше (pH 8) или ниже (pH 3) в зависимости от буферной емкости и природы входящих в состав раствора компонентов. Так, кукурузный экстракт, содержащий сложные (белковые) источники азота, будет иметь более высокое значение pH, чем среда, полученная из аммиака, глюкозы и других простых составляющих. Запах ее может изменяться от приятного дрожжевого (некоторые дрожжи) или приятно землистого (некоторые виды Streptomy es) до различной степени неприятных (например, запаха тухлой капусты). [c.219]

Рис. 6.4. Зависимость относительного числа клеток в суспензии Е. oli от содержания в ней хитозана (/) и ПЭИ (2—4) для исходной суспензии культуральной жидкости 1, 2), суспензии клеток, отмытых 0,1 М раствором Na l 3), и суспензий клеток, отмытых 0,1 Ai Na l и адсорбировавших декстран (4).

Рис. 6.6. Изотермы адсорбции (а), -потенциал (б) и /пц суспензии клеток Е. oli (в), обработанных

Справочник химика 21

Химия и химическая технология