Суспензии клеток приготовление

В плазменный сгусток заключают клетки крови или суспензии клеток, приготовленных из кроветворных органов. Культивирование проводится по приведенным выше методикам. [c.11]

Следует подчеркнуть, что такие модуляции дифференцированного состояния имеют ограниченное значение сохранение свойств эпидермиса не полностью зависит от сигналов окружения. Например, эпидермис языка, совмещенный при пересадке с дермой уха, сохраняет свойства эпидермиса языка. Кроме того, хотя с переменой места эпидермальные клетки могут изменять свою специализацию, они остаются эпидермальными даже в совершенно чужеродном окружении. Когда суспензию эпидермальных клеток, приготовленную из хвоста крысы, инъецируют под капсулу почки той же крысы, клетки растут там и образуют эпидермальные пузырьки с волосяными фолликулами и сальными железами, так же как на поверхности тела. [c.135]

Клетки легко теряют жгутики в момент приготовления мазка, поэтому необходимо обращать внимание на чистоту стекла и способ нанесения на него суспензии. Предметные стекла должны быть тщательно обезжирены. Непосредственно перед приготовлением мазка стекло 3—4 раза проводят через наиболее горячую часть пламени горелки. Дают стеклу остыть и пастеровской пипеткой или петлей наносят 3—4 маленькие капли на стекло. Капли должны хорощо расплываться по стеклу и быстро высыхать. Высушенный мазок заливают протравой. Необходимо следить, чтобы протрава не подсыхала. Через 15 мин протраву смывают дистиллированной водой и препарат окрашивают в течение 5 мин разбавленным фуксином Циля, погружая его мазком вниз в раствор красителя. Затем препарат промывают водой, высушивают на воздухе и исследуют с иммерсионной системой. Обращают внимание на расположение жгутиков, их количество и длину. [c.107]

Помещают обе панели в СОг-термостат на время, необходимое для приготовления последовательных разведений гибридных клеток. Очень важно приготовить разведения и поместить их в панели как можно скорее. Если клетки оставить на длительное время в суспензии (в которой число клеток невелико), то они потеряют свою жизнеспособность. Две панели с повторными разведениями готовят, используя клетки двух выбранных лунок первой панели. Серии разведений двух популяций клеток гибридомы готовят последовательно и отбирают клетки из лунок первой панели по мере необходимости. [c.142]

Общее количество клегок и их жизнеспособность определяют одновременно. Для этого пробу клеточной суспензии разбавляют равным объемом 0,5%-ного раствора эозина Y в ЗФР и подсчитывают живые и погибшие (окрашенные) клетки в фазово-контрастном микроскопе. Затем доводят концентрацию живых клеток в суспензии до 10 /мл. Выход лимфоцитов при приготовлении взвеси из лимфоузлов варьирует в широких пределах. Но ориентировочно можно принять, что в среднем от одной мыши получается не менее 3-4-10 живых лимфоцитов при жизнеспособности клеток в суспензии 75—90%. Еслн полученные клетки используются в СКЛ в качестве отвечающих , конечную концентрацию суспензии доводят до 5 -10 клеток в 1 мл. [c.245]

Беременных мышей незадолго до родов отсаживают в отдельные чистые клетки и наблюдают за ними ежедневно. Дату рождения мышат регистрируют и через 2—3 сут после рождения оставляют не более 10 новорожденных на одну мать. Для снижения риска поедания новорожденных матерями при работе с ними следует пользоваться перчатками. Если имеется несколько пометов одного и того же возраста, их объединяют и распределяют по 8—10 штук на клетку. Как правило, для выделения и наращивания вирусов используют мышат не старше 4 сут, если только по специфическим условиям эксперимента не требуются детеныши большего возраста. Для выделения вируса из образцов сыворотки последнюю вводят в мозг мышат без разведения. Из мозга и других тканей готовят 10%-ную суспензию в растворе, содержащем 25% инактивированной нагреванием ЭТС. Комаров или их личинок для приготовления суспензии тоже растирают в ступке, затем добавляют [c.68]

Клетки можно иммобилизовать путем включения в заранее подготовленную или образованную оболочку. Такой оболочкой может служить просто граница раздела фаз между двумя несмешивающимися жидкостями. В этом случае клеточная суспензия эмульгируется в органическом растворителе и затем ресуспендируется в виде капель в водной фазе. Примером заранее приготовленной оболочки является полз проницаемая мембрана, используемая для микро- и ультрафильтрации. При этом питательные вещества легко диффундируют к клеткам, находящимся за мембраной[141]. [c.163]

Приготовление суспензии миеломных клеток для гибридизации. Работа с клетками и культуральными средами должна проводиться в условиях, абсолютно стерильных 50 мл среды с культивируемыми миеломными клетками, находящимися в логарифмической стадии роста, центрифугируют в течение 8 мин при 800 об/мин, надосадок сливают в отдельную пробирку. Клетки суспендируют в 50 мл холодной ростовой среды без сыворотки (бессывороточная среда), отмывают центрифугированием при тех же условиях и суспендируют в 20 мл холодной бессывороточной среды. Клетки подсчитывают в камере Горяева. Их количество должно быть не менее 10 . [c.311]

Суспензию клеток ( 1—2 мл) хроматографируют при 4°С на приготовленной таким образом колонке в фосфатно-солевом буферном растворе (pH 7,2) при скорости потока буферного раствора 40—60 мл/мин. Клетки, не обладаюшие сродством к связанному гаптену, свободно проходят через колонку, в то время как клетки, имеющие сродство к связанному гаптену, количественно элюируются несколько позднее. По окончании разделения колонку промывают 100 мл раствора лактозы и снова уравновешивают фосфатно-солевым буферным раствором биогель со связанным гаптеном хранят при 4°С в 0,02%-ном растворе азида натрия. [c.39]

В процессе приготовления питательной среды для культивирования производственных штаммов ауксотрофных мутантов, обладающих способностью к сверхсинтезу аминокислоты лизина, в качестве источника углерода обычно используют смеси, включающие уксусную кислоту и свекловичную мелассу, в качестве источника азота — соли аммония, мочевину, кукурузный экстракт, гидролизаты дрожжей. Кроме дефицитных аминокислот, которые не синтезируются клетками мутантов, в питательную среду также добавляют необходимые для жизнедеятельности микроорганизмов макро- и микроэлементы (Р, Mg, Ре, Са, Мп и др.) и витамины (витамины группы В, биотин и др.). В процессе культивирования микроорганизмов обеспечивается подача стерильного воздуха с помощью специальных турбинных мешалок, для предотвращения вспенивания субстрата и клеточной суспензии в среду культивирования добавляется пе-ногаснтель. Схема технологической линии по производству лизина показана на рис. 7.4. [c.277]

Тень формируется в результате отложения под определенным углом электроноплотного материала на образце во время пребывания в вакуумном испарителе. Те области, которые расположены под углом к направлению напыления металла, остаются не покрытыми им и, будучи менее электроноплотными, пропускают электроны. В результате электроны как бы очерчивают эти области, которые на обработанном негативе видны в виде черных теней. Поскольку выглядит это, как позитивное изображение, обычно (хотя и не всегда) негативы обращают контактным способом и для воспроизведения позитивного изображения окончательные фотографические отпечатки получают с обращенных негативов. (Техника оттенения хорошо описана в гл. 5 [И] и в гл. 4 и 5 т. 2 многотомника [7].) Прямое отгенение испаряющимися металлами применяется по отношению к целым клеткам или их компонентам, бактериофагам или различным суспензиям этот метод используется также для анализа реплик, приготовленных из интактных препаратов или при замораживании—скалывании и замораживании—травлении (см. ниже). Помимо очерчивания поверхностных неровностей и периодически повторяющихся структур, техника оттенения может применяться для измерения высоты образца по вертикали посредством нахождения длины тени и геометрических расчетов, опирающихся на известный угол оттенения. Измерению [c.117]

Клетки выращивают в соответствующей среде. В случае жидких культур клетки отделяют в стерильных условиях центрифугированием и ресуспендируют осадок в стерильной свежей среде, содержащей или 10% (объем/ объем) глицерина (готовят добавлением 20%-ного глицерина к равному объему стерильной среды), или 5% (объем/объем) ДМС (приготовленного добавлением соответствующего количества 1007о-ного ДМС к стерильной среде). В случае роста культур на агаре клетки смывают с его поверхности стерильной жидкой средой, содержащей подходящий криопротектор, и разливают в стерильные маркированные ампулы по 0,4 мл суспензии, содержащей не менее 10 клеток/мл. [c.528]

Препараты клеток костного мозга получают из материала пункции грудины или подвздошной кости. Клетки культивируют только 2 ч с колцемидом. Процедура приготовления препаратов несколько отличается от процедуры, описанной выше. Культуру фибробластов получ р/ из материала биопсии кожи. Ее измельчают и выращивают в культуральной среде таким образом, чтобы кусочки были прикреплены к поверхности культурального сосуда. Через 10 дней клетки начинают расти по этой поверхности, через 21 день готовят суспензию и делают препараты. [c.43]

Наилучшая форма сохранения организмов, при которой не теряется антибиотическая активность, — их лиофилизация. Метод пригоден как для спорообразующих, так и для бесспоровых культур микроорганизмов. Сущность метода состоит в том, что суспензия клеток или спор микроорганизма, приготовленная на среде, богатой белками (часто используется кровяная сыворотка), быстро замораживается при температуре от -40 до -60 °С и высушивается под вакуумом до остаточной влажности (0,5-0,7%). После такой обработки ампулы со спорами или клетками лио-филизированного микроба запаивают. Лиофилизированные бактерии сохраняются 16-18 лет, споры грибов не теряют основных свойств при хранении их в лиофилизированном виде в течение Шлет. [c.155]

Для проведения экспериментов по хранению готовят 50%-ный раствор глицерола в дистиллированной воде и стерилизуют его при 1 ати в течение 30 мин. Клетки из выросших культур (обычно из середины экспоненциальной фазы роста), предназначенные для хранения, смешивают в пропорции 1 1 с 50%-ным глицеро-лом, перемешивают и ставят в морозильник. Хранить суспензии удобно в стерильных пробирках Эппендорф, а для их приготовления использовать автоматические пипетки со стерильными наконечниками и готовить смеси в ламинарном шкафу. Из сохраняемых клеток периодически (2—6 раз в год) отбирают пробы для проверки на выживаемость. В зависимости от результатов проверки рассчитывают схемы консервации той или иной культуры и периодичности их пересева. [c.69]

Спленоциты лучше получать, вымывая их из селезенки, чем измельчая или раздавливая орган в гомогенизаторе. В. первом случае получают /Чистые однородные суспензии с высо-кой жизнеспособностью. клеток. Клетки прекрасно сохраняют жизнеспособность в среде H-RPMI —2% СПК на холоду. Это обеспечивает. , h более удобное (Последовательное приготовление двух селезенок. Иногда можно столкнуться с патологически измененной селезенкой, содержащей избыточное количество (к леток гранулоцитарного или моноцитарнот ряда, что может быть причиной неудачной гибридизации. [c.132]

Удаление селезенок и приготовление клеточных суспензий проводят в стерильных условиях. Эритроциты лизируют в буфере трис-НС1-аммоний, а оставшиеся интактными клетки дважды промывают СР и ресуспендируют в среде RPMI 1640, содержащей 5% СПК. Клетки промывают два раза СР и жизнеспособные клетки (10 ) ресуспендируют в 5 мл среды RPMI 1640, содержащей 20% СПК. [c.306]

При сильной аэрации густота взвеси может достичь примерно 100 10 клеток/мл. Однако для приготовления мазков используют культуры в стадии логарифмического роста. Поэтому, когда концентрация достигнет 20-40-10 клеток/мл, культуру центрифугируют 10 мнн при 600Осадок два раза отмывают ЗФР, содержащим овальбумин (1 мг/мл), клетки суспендируют в растворе овальбумина (1 мг/мл) на дистиллированной воде, доводя их концентрацию примерно до 10-10 в 1 мл. В дистиллированной воде клеткн набухают, и при этом кинетопласты отделяются от ядер. Присутствие альбумина тоже делает морфологию клеток более ясной. Через 10 мии суспензию фильтруют через хлопковую вату, заполняющую пастеровскую пипетку, и каплями по 20 мкл наносят иа предметные стекла фирмы Сооке (№ L 800-21424) так, чтобы на каждом Стекле получилось по 8 капель. После высушивания с помощью фена мазки фиксируют 10 мнн в 96%-ном этаноле, затем сушат и хранят при —20X. Прнготовле1шые таким образом препараты можно хранить несколько месяцев. [c.94]

Клетки суспендируют в растворе, обогащенном белком, например в ЗФР с 3% БСА или 50% СПК- Концентрация клеток в суспензии может быть различной в зависимости от их типа. При изучении иммуноглобулинов в плазматических клетках, которые составляют лишь малую долю клеточной популяции селезенки, лимфатических узлов или других лимфоидных органов, обычно готовят густую суспензию с плотностью 4-10 клеток в 1 мл. Напротив, если ожидаемая доля клеток, несущих иммуноглобулины, значительно выше (как, например, в суспензии клеток солидной плазмоцитомы или костного мозга при множественном миеломатозе, а также в случае перевиваемых лимфобластов и стимулированных культур лимфоцитов), концентрация клеток не должна превышать 10 в 1 мл. Для приготовления мазков очень удобно пользоваться цитоцентрифугой. Центрифуги этого типа (например, фирмы ЗЬап(1ап, Лондон) позволяют собрать клетки в монослой на участке диаметром 5—7 мм и окрасить их небольшим объемом (10—20 мкл) меченой антисыворотки. [c.177]

Для образования розеток с бараньими эритроцитами, обработанными нейрамииидазой, использовались клетки из селезенки мышей ВВА/2. Розетки были разделены по скорости оседания. Число клеток с ядрами на 1 фракцию выражено в процентах к общему числу таких клеток, взятых для разделения. Число розеток на 1 фракцию определяли после окрашивания клеток метиловым фиолетовым в суспензии без отмывания, Б. Для приготовления фиксированных и окрашенных препаратов из каждой фракции брали пробу 0,5 мл препараты готовили как описаио в разд. IV, Е. Определяли число эритроцитов иа каждую РОК каждая точка представляет среднюю величину ие меиее чем для 15 розеток. [c.263]

В качестве индикаторных клеток лучше использовать эритроциты, выдержанные в течение недели в растворе Олсвера, поскольку свежие эритроциты менее чувствительны к иммунному гемолизу. Перед приготовлением суспензии эритроциты трижды отмывают, центрифугируя по 10 мин при 2500 g при комнатной температуре. Затем клетки ресуспендируют в. ЗФР или СР до концентрации 20о/о (по объему) для работы в агаровом геле и 8—10% —для методики Каннингема. [c.290]

Если не указано иное, то на всех этапах клетки центрифугируют 15 мин при 150g и 4°С. Паховые, подмышечные, шейные и брыжеечные лимфатические узлы и (или) селезенки извлекают асептически, помещают в холодную среду и измельчают ножницами. Для освобождения лимфоцитов измельченную ткань осторожно раздавливают в пластиковой пробирке при помощи свободно входящего в нее тефлонового гомогенизатора. Для удаления агрегатов и детрита клеточные суспензии фильтруют через 10-миллилитровый шприц, наполовину заполненный неплотно упакованной найлоновой или хлопковой ватой. Фильтрацию производят при помощи поршня, оставшиеся на вате клетки вымывают 5—8 миллилитрами среды. (Этот метод отличается от приготовления клеточной взвеси, освобожденной от В-лимфоцитов, из ткани лимфатических узлов, описанного в разд. III, А, 3.) Затем собранные клетки осаждают центрифугированием, надосадочную жидкость, содержащую жир, тщательно удаляют, а клетки ресуспендируют в 10 мл свежей среды. Эту операцию повто- [c.301]

Антисыворотку удаляют, тщательно промывая клетки PBS. К клеткам добавляют суспензию S. aureus, штамм owan, приготовленную по методу Прингла и Парри [23], или коммерческий препарат стафилококков и инкубируют 5 мин при 37 °С (время инкубации на данном этапе имеет решающее значение и должно быть подобрано экспериментально). [c.149]

В работе необходимо использовать клеточные линии, приспособленные к росту в суспензии, например HeLa S3 (АТСС No. L 2.2) или КВ (АТСС No. L 17). Как правило, клетки вначале культивируют в монослое по стандартной методике в подходяш,ей среде с 7,5% СНТ. Через определенное время готовят 200 мл суспензии (в среде для суспензионных культур, содержаш,ей 7,5% СНТ) с концентрацией клеток З-Ю /мл. Надо отметить, что используемые клетки, как правило, плохо образуют плотный монослой. Приготовленную суспензию переносят в 500-мл флакон, который помеш,ают в описанный выше аппарат и культивируют два дня при 37 °С. Затем подсчитывают число клеток. При достижении плотности 6-10 кл/мл суспензию клеток вдвое разводят свежей средой, содержащей ТС. [c.258]

Приготовленная для анализа суспензия не должна содержать 5ольших комков и других частиц, которые могут засорить проточную <амеру. Слипшиеся клетки и осколки клеток ухудшают качество истограммы и затрудняют анализ. Поэтому часто требуется очистка успензии фильтрацией через металлическую сеточку с ячейками 10 100X100 мкм или через несколько слоев нейлоновой ткани, [c.143]

Метод учета численности бактерий в почве при помощи люминесцентной микроскопии по Звягинцеву и Кожевину дает еще более достоверный результат по сравнению с методом Виноградского. Суть его в том, что приготовленные из почвенной суспензии препараты окрашивают специальным красителем акридином оранжевым (флуорохро-мом). Окрасившиеся в ярко-зеленый цвет клетки хорошо заметны на темном или красном фоне почвенных частиц и препарата, причем микроскопия в отраженном свете позволяет учитывать и адсорбированные клетки, которые, как правило, не видны в проходящем свете. [c.114]

В настоящее время использование плазмированных культур для изучения большинства вирусов оставлено в связи с внедрением в практику однослойных культур. Тем не менее этот метод еще не утратил своего значения для культивирования и титрования Tie-которых вирусов. Г. Д. Засухиной и Е. Н. Левкович в 1957 г. бы-ло обнаружено цитопатогенное действие вируса весенне-летнего клещевого энцефалита (штамма Фатеев и Софьин ) на фибробласты человека. Для приготовления культур использовали кусочки кожно-мышечной ткани 8—12-недельных эмбрионов человека. Клетки выращивали в среде 27. Культуры заражали на 2-е сутки. В качестве инфекционного материала использовали 10% суспензию мозга белых мышей, зараженных вирусом весенне-лет-н его клещевого энцефалита, или культуральную жидкость предыдущего пассажа. После 15-минутного контакта ткани с 0,2 мл инфекционного материала в пробирки вносили по 1,3 мл питательной смеси, состоящей из 70% коровьей амниотической жидкости, 10% инактивированной лошадиной сыворотки и 20% раствора Хэнкса. В некоторых опытах использовали среду 199 с 2% лошадиной сыворотки. [c.132]

Первым этапом постановки опыта по методу Купера является приготовление агарового покрытия, С этой целью смешивают равные объемы питательной среды (25% экстракта куриного эмбриона или 1% гидролизата лактальбумина, 0,1 /о кристаллического бычьего альбумина и 0,1% дрожжевого экстракта, 0,6% органического буфера оксиметиламинометан) и расплавленного, а потом охлажденного до 44 " 1,8% агара. 6 мл такой смеси вносят в чашку Петри диаметром 100 мм, 2 мл агарового покрытия добавляют в пробирку, в которую уже были внесены клетки в 0,5 мл растворе Эрла и 0,1 мл вирусного материала. Полученную суспензию сразу же выливают в чашки на основной слой агарового покрытия. После формирования второго слоя чашки переносят в термостат. [c.176]

Смотреть страницы где упоминается термин Суспензии клеток приготовление: [c.312] [c.187] [c.166] [c.48] [c.23] [c.29] [c.306] [c.107] [c.234] [c.245] [c.413] [c.414] [c.245] [c.309] [c.65] [c.111] [c.183] [c.227] [c.259] [c.259] [c.59] [c.57]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология