Крыса иммунизация

У белых крыс, получавших в течение почти 15 мес. водные вытяжки, настаиваемые при 60° С, в конце хронического опыта наблюдалась по сравнению с контрольными животными пониженная способность к выработке специфических антител (агглютининов) после иммунизации, а также отмечалось увеличение среднего весового коэффициента печени. Различий у пих по сравнению с контрольными крысами в других изучавшихся показателях не было найдено. [c.62]

Иммунизация крыс проводится в тех случаях, когда требуется получить антитела к антигенам мыши, для которых отсутствует полиморфизм у разных линий мышей. Полученные гибридом-ные клетки можно выращивать в организме крыс, если применять миеломные клетки крыс, или в организме мышей после подавления их иммунологической реактивности (см. ниже). [c.100]

Моноклональные антитела находят очень широкое применение, в том числе для диагностики и терапии различных заболеваний человека. Например, антитела против опухолевых антигенов, сшитые с токсинами (иммунотоксины), могут быть применены для селективного убивания опухолевых клеток в организме человека. Такие антитела несложно получить, используя для иммунизации мышей или крыс и последующее конструирование гибридом. Однако употребление этих антител очень ограничено, так как при их введении в организм человека (особенно повторном) возникают реакции на гетерологичный белок. Поэтому крайне желательно получать моноклональные антитела человека. [c.119]

IV. Антисыворотки к иммуноглобулинам мыши и крысы. Для общих целей анти-IgG, получают путем иммунизации животных фракцией IgG, полученной в результате аффинной очистки на колонке с протеинА-сефарозой (разд. 10.6.1). Для удаления антител к другим классам иммуноглобулинов сыворотки сорбируют моноклональными антителами или сывороткой, лишенной IgG. [c.104]

Сначала все слияния клеток проводят с предельно допустимыми разведениями популяции клеток — продуцентов МА против антигенов клеточных поверхностей. Последующий анализ обычно дает достаточно определенные результаты для того, чтобы можно было отобрать гибридные клоны, представляющие интерес. Этот этап не прост, если учесть, что первичная иммунизация крыс клетками мышиных лимфом требует 200—300 лунок с растущими клонами. Такое количество образцов нетрудно проверить с помощью ИФМ, однако приблизительно 5—20% лунок содержат клоны, продуцирующие МА против неизвестных мембранных компонентов. Поэтому следует проводить и негативный отбор, чтобы отбраковать клоны, которые секретируют МА к общим для всех клеток поверхностным антигенам. После того как с помощью ИМФ отбирают клоны, позитивные [c.179]

У крыс каждой группы следили за общим состоянием и весом, ставили гексеналовую пробу (у 14—15 крыс) в конце опыта изучали морфологический состав периферической крови (у 9—10 крыс), исследовали способность к выработке специфических антител (агглютининов) после иммунизации (у 8—10 крыс). [c.58]

Иммунизацию крыс проводили двукратно с интервалом в 4 суток (подконшо) полныхм брюшнотифозным антигеном. При первой иммунизации (на 399-е сутки) каждой крысе ввели ио 20 мг/кг антигена, при второй 40 мг/кг. Реакции макроагглютинации ставили с моно-диагностикумом брюшнотифозным О (IX) через 7, 14, 21 и 28 суток после начала иммунизации. За титр агглютининов принимали то предельное разведение сыворотки крови, при котором получалась четкая агглютинация (50%, или ++) (М. Н. Лебедева, 1955 ). [c.58]

У животных, получивших водные вытяжки, настаиваелше при 60° С, были, таким образом, обнаружены изменения, аналогичные изменениям у животных 1-й подопытной группы — у белых мышей в динамике веса тела и условнорефлекторпой деятельности, а у крыс в средних весовых коэффициентах печени помимо этого, у последних было отмечено понижение способности к выработке специфических антител после иммунизации. [c.62]

При длительном скармливании (примерно в течение 15 мес.) белым мышам и крысам водных вытяжек пз нестабилпзпрованпого полипропилена (температура настаивания 20 и 60° С) отмечались очень незначительные по сравнению с животными контрольной группы изменения в отдельных показателях (вес и условнорефлекторная деятельность у мышей весовые коэффициенты печени у крыс). У крыс, получавших водные вытяжки, настаиваемые прп 60° С, наблюдалось также снижение продукции специфических антител после иммунизации. [c.63]

На 127-е сутки хронического опыта (после 110 введений красителя) на фоне продолжающегося отравления часть крыс была иммунизирована брюшнотифозным антигеном. Иммунизацию проводили однократно подкожно в область правой паховой складкп полным брюшнотифозным антигеном производства Ленинградского научно-исследовательского института вакцин и сывороток (серия 385, получен из штамма S. typhi № 4446) в дозе 20 мг/кг. [c.295]

Через 4 7 13 суток после иммунизации у крыс из хвоста брали кровь и с сыворотками крови ставили реакции агглютинации. При постановке реакции использовали монодиагпостикум брюшнотифозный О (IX), производства Ленинградского научио-псследователь-ского института вакцин и сывороток (серия № 71, контрольный № 824). Реакция макроагглютннации ставилась по общепринятому методу (В. Е. Предтеченский и др., 1950). [c.295]

Выбор экспериментального животного. Он определяется наличием родительских миеломных линий, возможностью получения гибридов клеток этих линий и иммунных лимфоцитов, а также способностью к размножению полученных гибридом в организме животного. Обычно для иммунизации используют мышей и крыс. Это связано с тем, что подходящие миеломные клетки мышей и крыс щироко распространены и, кроме этого, не представляет сложностей выращивание полученных гибридом в организме этих животных. При иммунизации мышей берут линию Ва1Ь/С это связана с тем, что все имеющиеся миеломные линии, образую- [c.99]

Антигены, Антигены, используемые для иммунизации, должны быть очень хорошо очищены, для чего можно использовать метод иммуноаффинной хроматографии или классические методы . Чистая GGT из почек быка может быть выделена солюбилизацией фермента в присутствии дезоксихолата натрия с последующей обработкой -бутанолом, фракционированием сульфатом аммония и хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [27]. Полученный после разделения на сефарозе 6В препарат GGT подвергается протеолитическому гидролизу бромелаином, и полученная GGT (легкая форма) очищается электрофорезом в полиакриламидном геле [28]. Чистая GGT из почек крысы (фермент П1) может быть получена [29] подобным методом. [c.153]

Поликлональные антитела против GGT почек быка или GGT почек крысы (легкие формы) могут быть получены иммунизацией кроликов (самки, возраст 6—8 нед) путем инъекций в подушечки задних лап эмульсии, состоящей из 50 мкг фермента в 0,5 мл Na l-натрийфосфатного буфера с 0,5 мл полного стимулятора Фрейнда на животное. Через 2 нед вводят то же количество антигена (50 мкг GGT в 0,5 мл того же буфера), хорошо эмульгированного неполным стимулятором Фрейнда, подкожно в несколько мест шеи. Целесообразно повторить последнее введение еще через 2 нед. Через 10—15 сут берут пробы крови кролика инкубируют взятые пробы при 37 Х в течение 2 ч, затем оставляют на ночь при 4 °С и отделяют антисыворотку центрифугированием при 3000 g в течение 30 мин. В анализах методом двойной иммунодиффузии антисыворотка при разбавлении 1 128 (Na l-фосфатным буфером) все еще дает дуги преципи тации с разбавленной GGT (0,025 мг/мл). [c.153]

В свете рассматриваемых положений можно объяснить ряд установленных ранее данных о регуляторной роли естественных антител. Впечатляющее по своим результатам исследование было выполнено J. Murray еще в 1967 г. Он проанализировал значение естественных антител против эритроцитов барана, содержащихся в сыворотке крыс, на продукцию этими животными антител против того же антигена (эритроцитов барана). Следует напомнить, что у человека и различных экспериментальных животных, не подвергавшихся иммунизации, в сыворотке крови содержатся в низких концентрациях естественные антитела как против эритроцитов барана, так и против ряда других антигенов и гаптенов. Эти естественные антитела, в том числе естественные антитела против эритроцитов барана, представляют собой комплексы / -белков определенной специфичности с циркулирующими иммуноглобулинами, причем последние выполняют только функцию носителя (см. гл. 5) [c.92]

Изотип хотя у кроликов и овец при иммунизации с применением ПАФ образуются антитела определенного изотипа (I G )> У других видов животных (крыс, мышей, морских свинок) ответ также может быть рестриктирован по подклассам IgG. Если антитела выявляются с помощью меченого антиглобулина, то необходимо определить их изотип, чтобы использовать аитиглобулин требуемой специфичности. [c.113]

Необходимо хорошее оборудование для работы с культурами, в том числе СОг-термостат (содержание СОг в воздухе — 5%)- Желательно иметь ламинарный бокс для осуществления манипуляций в стерильных условиях. Следует отметить, что знание основ асептики и некоторый опыт в работе с клеточными культурами важны для успешного проведения работ. Для визуального наблк>дения за культурами необходим инвертированный микроскоп (например, Olympus СК модель снабжена широкой ровной подста вкой, объективом ХЮ и бинокулярной насадкой WF 15Х). Кроме контейнеров с жидким азотом для хранения плазмацитом и гибридом, для получения моноклональных антител необходимо не так уж много специального оборудования. Позднее будут рассмотрены возможные варианты процедур скрининга, которые, по-видимому, следует усовершенствовать и более широко внедрять в практику. Для иммунизации необходимо иметь инбредные линии мышей (обычно BALB/ ) или крыс (Lou). Если предполагается выращивать гибридомы в виде асцитных опухолей, то понадобится довольно большое количество животных. [c.117]

В исследованиях применяли ксеногенную иммунизацию, т.е. крыс иммунизировали клетками лимфом мышей, поскольку при внутривидовой иммунизации трудно ожидать образования антител, распознающих клетки этого же вида животных как чужеродные. Для описанных здесь методических подходов антигенным материалом служили пре-В-клеточные лимфомы, однако это не означает, что данные подходы применимы к анализу только таких клеток. И нам, и еще ряду исследователей удавалось успешно использовать другие В-клеточные трансформированные линии для индукции образования антител к детерминантам их плазматических мембран. Клонированные популяции клеток лимфом являются идеальным источником антигенного материала в силу целого ряда причин. 1) Если при ксеногенной иммунизации в качестве антигена используют живые клетки лимфом, то обычно получают сильные ответы, которые легко воспроизводятся. 2) Иммунизация клонированной клеточной популяцией, такой как пре-В- или плазматические клетки, дает возможность направить ответ против гомогенного клеточного источника антигена в нормальных тканях клетки такого типа могут присутствовать в очень малых количествах. 3) Иммунизируя животных и анализируя эффекты иммунизации в соответствии с описанными здесь методиками, можно практически гарантировать получение антител против детерминант клеточ- [c.176]

IgE-ответ регулируется как Т-хелперами (Тх), так и Т-супрессорами (Тс). Этот эксперимент проводили на трех группах крыс контрольной (А), не подвергавшейся какому-либо воздействию в течение недели перед введением антигена, и двух опытных (Б и В), в которых крысам перед иммунизацией удаляли тимус. После введения антигена у животных периодически определяли уровни IgE. В контроле иммунизация антигеном приводила к временному повышению содержания антигенспецифичного IgE. Тимэктомия (или облучение) обусловливала более длительный ответ (Б), который можно было сократить введением стимулированных антигеном клеток селезенки, содержащей Тс (В). У крыс, тимэктомированных в неонатальном возрасте, IgE-ответ вообще отсутствовал, что указывает на необходимость Тх-клеток для его развития. [c.422]

Существует ряд экспериментальных моделей синдрома Гудпасчера. Так, введение крысам или кроликам гетерологичных антител к базальной мембране почечных клубочков вызывает у животных нефротоксический нефрит [гломерулонефрит Масуги (Masugi)]. Введенные антитела откладываются на базальных мембранах, затем на этих антителах происходит отложение уже антител хозяина, что вызывает острый нефрит. Развитие нефрита и протеинурии обусловлено накоплением нейтрофилов, которые связываются по комплемент-зависимому и по комплемент-неза-висимому механизмам. Аналогичные повреждения можно вызвать иммунизацией животных гетерологичными базальными мембранами [модель Стебли (Steblay)]. [c.451]

В некоторых случаях выживаемость трансплантата удается продлить, иногда на неопределенно долгое время, предварительным введением антигенов донора (рис. 27.26). Это противоположно тому, чего можно было бы ожидать от иммунизации реципиента антигенами донора — ускоренного или сверхострого отторжения трансплантата. Данный феномен получил название активного усиления выживаемости трансплантата. Большое значение имеет путь введения антигена, что обусловлено, по-видимому, вовлечением в реакцию разных отделов лимфоидной ткани. Так, в опытах с трансплантацией почек у крыс было установлено, что внутривенное введение крови донора реципиенту за неделю до трансплантации обеспечивает долговременную выживаемость трансплантированного органа, тогда как при подкожной инъекции то же количество донорской крови вызывает ускоренное отторжение. Эффект иммунологически специфичен, поэтому донор крови и донор почки должны иметь по крайней мере некоторые общие антигены. [c.504]

В том же 1956 г. были обнаружены и внутривидовые различия в антигенных свойствах иммуноглобулинов кролика (Oudin, 1956). В этом случае аллотипы были обнаружены не с помощью аутоантител (агглютинаторов), а с помощью перекрестной внутривидовой иммунизации. Для этого иммуноглобулины, выделенные из сыворотки одного кролика, вводили другому кролику и, если между иммуноглобулинами этих двух животных существовали антигенные различия, то у кролика-реципиента вырабатывались антитела, специфически реагирующие с иммуноглобулинами кролика-донора. С помощью перекрестной внутривидовой иммунизации были обнаружены также и аллотипы иммуноглобулинов мыши и крысы, но здесь задача облегчалась наличием большого числа ин-бредных линий животных (Herzenberg, 1964 Рохлин и др., 1970). [c.42]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология