Химеры животные

В аналогичных экспериментах у гибридов хирургическим путем удаляли тимус. После операции животных подвергали действию радиации в дозах, убивающих оставшиеся в организме лимфоциты. Затем им пересаживали тимус от нормальных мышей линии Ь и в качестве источника клеток-предшественников вводили в кровь клетки костного мозга, взятые от мышей линии Ь. У таких химер через некоторое время образовывались функционально полноценные Т-клетки. Эти клетки могли узнавать вирусный антиген только в сочетании с белком МИС , но не МИС . При этом следует подчеркнуть, что на всех собственных клетках организма мышей-химер были представлены как МНС , так и МНС. Только в тимусе вновь образующиеся Т-клетки встречались с МНС , но не с МНС . Важно и то, что потенции клеток костного мозга генотипа Ь не были ограничены. Пересадка костно-мозговых клеток линии Ь совместно с двумя тимусами генотипов а и Ь приводила к формированию зрелых Т-клеток, ориентированных на узнавание вирусного антигена в сочетании с белками МНС или МНС . [c.123]

Облученным мышам-реципиентам двух типов (А и Б) вводили для восстановления кроветворения лимфоциты доноров А X Б (клетки костного мозга или селезенки). Таким способом получали мышей-химер, у которых лимфоциты имели тип донора (А х Б), а все другие ткани - тип реципиента. После этого животных иммунизировали вирусом осповакцины, получали от них Т-клетки селезенки и определяли их цитотоксическую активность по отношению к В-клеткам типа А или Б, инфицированным вирусом. Клетки мышей, получивших после облучения клетки костного мозга, могли лизировать только клетки-мишени, относящиеся к тому же типу, что и реципиент (1 и 2). В отличие от этого зрелые лимфоциты животных, получивших клетки селезенки (А х Б), были способны лизировать клетки-мишени обоих типов - А и Б, независимо от типа реципиента (3 и 4). Полученные данные можно объяснить следующим образом. Незрелые стволовые клетки костного мозга после введения облученным мышам проходили обучение в тимусе реципиента и после этого могли распознавать антиген лишь в ассоциации с молекулами МНС гаплотипа реципиента. Однако зрелые клетки селезенки донора уже были обученными . В большинстве случаев для успешного обучения клеток донора в тимусе реципиента необходимо, чтобы донор и реципиент имели по крайней мере один общий МНС-гаплотип с идентичными генами класса II. [c.249]

Животные химеры. К серьезным достижениям эмбриологов следует отнести успехи в создании животных химер, т. е. организмов, у которых клетки разных тканей имеют разный генотип. [c.149]

Рис 5 7 Способы получения животных химер путем смешения бластомеров, имеющих разный генотип (а), или введения бластомеров или стволовых клеток (Е8) в бластоцисты, отличающиеся от них [c.150]

Первым примером создания межвидовых аллофенных химер животных является гибрид овца (2п = 54) х коза (2п = 60). Для их получения объединяли в разных соотношениях 8-клеточные эмбрионы овцы и козы и мозаичные эмбрионы вводили какому-либо из этих животных (РеЬШу а1., 1984) В наиболее удачных случаях, когда в опытах были получены жизнеспособные химеры, мозаичные эмбрионы содержали один 8-клеточный эмбрион овцы и три 8-клеточных эмбриона козы, а животным-реципиентом была коза. Химеры оказались бесплодными В их крови были обнаружены эритроциты и овцы, и козы. Внешний покров имел мозаичную структуру — отмечалось чередование участков, покрытых волосом или шерстью Двойственность свойств наблюдалась и в других фенотипических признаках. [c.150]

Проблемы гистогенеза могут решаться только на основании современных точных (объективных) методов -гистологического анализа использовании Н-тимидиновой метки, хромосомной, цитохимической и иммунной меток, экспериментальных моделей радиационных химер, животных-парабионтов, способов -клонирования клеток в селезенке, в культуре тканей, гетеротопной имплантации клеток и др. На основании этих методов было развито учение о стволовых, субстволовых (коммитированных), [c.25]

Никаких специфичных для птиц ES-клеток не обнаружено, поэтому подход, основанный на их использовании, для птиц неприменим. Более перспективным представляется метод с использованием рекомбинантных эмбриональных клеток. Он состоит в следующем. Выделяют клетки бластодермы из куриного эмбриона, трансфицируют их с помощью катионных липидов (липосом), связанных с трансгенной ДНК (липосомная трансфекция), и повторно вводят в подзародыше-вую область свежеотложенных яиц (рис. 19.14). Часть потомков будет нести в каком-то небольшом количестве клетки донора таких животных называют химерами. У некоторых химер клетки, произошедшие от трансфицированных клеток, могут образовывать линии зародышевых клеток, и после нескольких раундов скрещиваний таких химер можно получить линии трансгенных животных. Чтобы увеличить вероятность создания химер, несущих чужеродные гены в клетках зародышевой линии, число донорских клеток в химерах можно увеличить облучением эмбрионов реципиента перед введением в них трансфицированных клеток (540-660 рад в течение 1 ч). Под действием облучения некоторые (но не все) клетки бластодермы погибнут, и соотношение между трансфицированными клетками и клетками реципиента увеличится в пользу первых. По-видимому, таким образом можно получать трансгенных цыплят, хотя и с малой эффективностью. [c.438]

Возможна и обратная перестройка если взять двух эмбрионов на 8-клеточ-ной стадии и объединить их в одну гигантскую морулу, то из нее может развиться мышь нормальной величины (рис. 15-21). Это животное примечательно тем, что у него четверо родителей, и их родительские права можно доказать с помощью генетических маркеров. Например, если одна пара родителей принадлежит к линии с белой окраской шерсти, а другая,пара-к ли1шн е черной окраской, то потомство будет пегим в окраске мышат будут чередоваться белый и черный цвета в соответствии с распределением двух групп клеток различного генотипа (рис. 15-21). Таких животных, образованных агрегатами генетически различных клеток, называют химерами. Химер можно также получать, инъецируя клетки ранних эмбрионов в бластоцисты с иным генотипом. Введенные чужеродные клетки включаются в состав внутренней клеточной массы эмбриона-реципиента, и в результате образуется химерное животное. Химеру можно получить даже после инъекции одной клетки это позволяет выяснить, насколько та или иная клетка сохраняет потенции к развитию. Из результатов подобных экспериментов следует важный вывод клетки очень ранних зародышей млекопитающих (вплоть до 8-клеточной стадии) идентичны и обладают неограниченными потенциями, т.е. тотипо-тентны. [c.70]

Успещно трансформированные клетки возвращают обратно в нормальный зародыщ, и они становятся его частью. Развившееся животное представляет собой смесь двух генетически различающихся типов клеток, часть которых произопша от нормальных стволовых кпеток, а часть — от трансформированных. Таких животных называют химерами (по названию мифологического животного с головой льва, телом козла и хвостом змеи). Половые клетки химер также будут смещанными, и некоторые из гамет будут нести новый ген. Они дадут начало полностью трансгенным животным в следующем поколении. [c.235]

Уже в течение двенадцати лет известно, что мышей, подвергшихся общему облучению ib большой дозе, можно спасти от смерти соответствующим лечением [1]. Вначале такое лечение состояло во внутрибрюшинной имплантации кусочков селезенки молодых мышей, но со временем разработали более удобные методики внутривенной инъекции костного мозга, селезенки или печени эмбрионов животных. Тот факт, что гемопоэтическая ткань животных иных, чем облученные, видов является эффективной, вначале расценивали как доказательство гуморального механизма ее дейспвия. Однако вскоре различными методами доказали приживляемость трансплантатов гемопоэтической ткани 2—4]. Такое сосуществование тканей различных особей в одном организме назвали химерой, мифологическим прообразом которой было существо, объединяющее в себе черты козы, льва и змеи. [c.403]

В нормальных условиях слипание и слияние клеток происходит сравнительно редко (в зависимости от функционального состояния клеток). В связи с практическими проблемами соматической гибридизации клеток, реконструкции клеток (слияние кариопласта с цитопластом), получения гибридом из лимфоцитов и клеток миеломы для выработки моноклональных антител необходимо создание универсальных методов слияния клеток и органелл in vitro. Используемые индукторы слияния на фоне Са + (1—10 мМ) клеток животных — вирус Сендай (в оболочке которого присутствует нейраминидаза), клеток растительных протопластов — полиэтиленгликоль — приводят к низкому выходу гибридных клеток. В 1979 г. был разработан универсальный метод слияния любых клеток (в суспензии) —метод электрического пробоя. Этот метод основан на резко.м увеличении проводимости и проницаемости мембран в сильном электрическом поле (40 мкс, 4—6 кВ/см). При этом среди способов приведения клеток в контакт перед электростимуляцией используют диэлектрофорез — перемещение клеток в неоднородном переменном электрическом поле в растворе диэлектрика в сторону увеличения напряженности (в этом случае формируется большое число контактирующих друг с другом параллельных цепочек клеток). Увеличение образования гибридных клеток (химер) или гигантских клеток описанным способом достигается ферментативной обработкой клеток до слипания и слияния, главным образом направленной на удаление гликокаликса. [c.90]

Для иммунологических исследований на клеточном уровне важно уметь четко идентифицировать популяции Т- и В-лимфоцитов. Анатомическая и функциональная разобщенность тимуса и фабрициевой сумки у кур позволяет проводить уникальные экспериментальные манипуляции, которые могут быть использованы для получения Т/В-клеточных химер. Цель этих экспериментов состоит в том, чтобы получить животное, у которого иммунная система функционирует нормально, но Т- и В-клетки несут различные маркерные половые хромосомы, легко распознаваемые в препаратах делящихся клеток. Использование некоторых инбредных линий позволяет ввести в эту систему дополнительные маркеры, так как В-клетки донора можно отличить от клеток хозяина по аллоантигенам клеточной поверхности лимфоцитов либо с помощью аллоантисывороток, либо с помощью моноклональных антител. Совершенно очевидно, что использование недавно полученных моноклональных антител к субпопуляциям Т-клеток (Traill et al., 1984) и к клеткам гемопоэтической системы ( hen et al., 1984) в сочетании с упомянутыми химерами может еще более расширить возможности этой и без того весьма ценной модели для изучения онтогенеза и функционирования лимфоидной и гемопоэтической систем птиц. [c.411]

Полученные химеры очень быстро развиваются в здоровых, полностью нормальных животных и не нуждаются в специальном внимании. Однако популяции В-клеток селезенки и периферической крови, возникшие из клеток донора, быстрее увеличиваются в размерах после 1—2 инъекций антигена (0,75 мл 1%-ной суспензии ЭБ и 1 50 суспензии Bru ella abortus) при- близительно на 4-й и 7-й неделе жизни (неопубликованные наблюдения). [c.414]

Успех создания Т/В-клеточных химер, полностью лишенных В-клеточной популяции хозяина и не загрязненных Т-клетками донора, зависит главным образом от эффективности уничтожения популяции В-клеток хозяина, которая определяется правильной дозировкой циклофосфамида, вводимого по жесткому расписанию. Не менее важно, чтобы адекватное число жизнеспособных клеток фабрициевой сумки донора было трансплантировано реципиенту без значительной примеси периферической крови, которая является потенциальным источником Т-клеток. Лучше всего получать клетки фабрициевой сумки от донорОБ-цыплят 1—3-суточного возраста или даже от зародышей поздних стадий (20—21-е сутки). Клетки фабрициевой сумки, взятые в этот период, гораздо эффективнее заселяют строму соответствующего органа реципиента, и среди таких клеток не содержится Т-лимфоцитов или содержится лишь небольшое их число. Ценность описанных химер состоит в том, что они являются иммунологически полноценными животными, у которых В- и Т-клетки имеют хромосомные маркеры. Следовательно, химеры являются гораздо лучшими источниками В- и Т-лимфоцитов для функциональных исследований, чем те животные, у которых популяции В- или Т-клеток избирательно истощены общепринятыми химическими или хирургическими методами. В последнем случае всегда возникает вопрос, в какой степени отсутствие клеток данной линии дифференцировки влияет на функционирование оставшейся популяции лимфоцитов. Т/В-клеточные химеры птиц оказались чрезвычайно полезными при [c.420]

У Xenopus эмбриональное и личиночное развитие происходит без контакта с материнским организмом, что позволяет с относительной легкостью проводить хирургические операции на зародышах достаточно ранних стадий (создание химер, трансплантация зачатков органов, тимэктомия и т. д.). Метаморфоз делит жизнь животных на два четких периода, позволяющих различать те ситуации, которые были бы трудноразли- [c.472]

Несколько лет назад был проведен эксперимент, доказывающий справедливость этого утверждения. В результате сращения зародышей овцы и козы была получена химера, достигшая стадии взрослого животного (рис. 3.17). У этого животного были козлиные рога, изогнутые наподобие бараньих, его шкура представляла собой мозаику из участков с длинной и короткой шерстью, а кровь содержала козьи и овечьи эритроциты. Химера выглядела вполне нормально и гармонично (Fehil-1у, 1984). [c.61]

Клонирование животных. Серьезные успехи, достигнутые в разработке методов манипулирования in vitro с ранними эмбрионами животных, позволили довести ряд экспериментов с уровня клеток до организма (большинство работ сделано на мышах). Конечно, наиболее впечатляющими являются достижения по получению трансгенных животных с использованием клонированных генов (см. гл. 13). Однако и результаты опытов по перекомбинации зародышевых клеток и замене ядер, позволившие получить клоны животных или животные химеры (см. стр. 149), дали многое для понимания механизмов дифференцировки клеток в процессе онтогенеза. [c.148]

Основой успехов стала возможность кратковременного манипулирования in vitro с зародышевыми клетками животных. Это позволяет инъецировать в них ДНК, инфицировать их ретровирусами, замешать ядра, а для получения химер смешивать с клетками других эмбрионов или с плюрипотентными стволовыми клетками (рис. 13.8). Затем их имплантируют в яйцеводы или матки псевдобеременных приемных матерей, которые и производят потомство. [c.410]

После инъекции ЭС клеток в бластоцисты они способны участвовать в образовании всех тканей, включая и линии зародышевых клеток химерного организма. Способность ЭС клеток дифференцироваться in vivo оценивается по частоте химер и степени колонизации тканей химерного потомства, а также по частоте генеративных химер. Это свойство клеток в сочетании с методом гомологичной рекомбинации, которая позволяет направленно изменять геном ЭС клеток, дает возможность создавать трансгенных животных с заданным (измененным) генотипом (см. рис. 102). [c.293]

Этот вывод следует и из интересных экспериментов (Роге е. а., 1975), осуществленных на тетрародительских (аллофенных) мышах. У таких химерных животных все ткани построены клетками — потомками от обеих пар родителей. Если бы стволовая кроветворная клетка была единственной для кроветворной ткани, то при этом надо было бы ожидать равномерного мозаицизма во всех кроветворных тканях каждой данной химеры. Между тем мозаицизм костного мозга, тимуса, пейеровых бляшек отличался от такового в селезенке и лимфатических узлах. Из всех этих данных может следовать, что наряду с исходной полипотентной стволовой кроветворной клеткой могут существовать и обладающие стволовыми свойствами коммитированные предшественники двух типов миелопоэза и лимфопоэза. [c.111]

Галактозидазу можно выделить из клеток Е. соИ в гомогенном виде в один этап с помощью аффинной хроматографии на л-амино-фенил- - -тиогалактозид-аггфозе. Поэтому при создании векторных систем, предназначенных для синтеза чужеродных белков в составе химер с /З-галактозидазой, важно было сохранить большую часть /3-галактозидазы в неповрежденном виде, что обеспечило бы специфичность хроматографической очистки химерных белков. Вьщеленные таким образом химерные белки при иммунизации кроликов вызывают наработку в организме животных антител как на /З-га-лактозидазу, так и на целевой белок. [c.123]

Б. Юхарк с соавторами сконструировали гибридный ген, в котором к последовательности, кодирующей HB Ag, подстроили в правильной рамке трансляции ген-эквивалент протективной антигенной детерминанты вируса ящура, представляющей собой последовательность 142-160 АК вирусного белка VP1. Детерминируемый гибридным геном химерный белок оказался токсичным для Е. соИ, поэтому он был синтезирован в культуре клеток животных V-1. Химерный белок формировал вирусоподобные частицы, которые после очистки от других белков проверяли на иммуногенность. Показано, что по иммуногенным свойствам полученные надмолекулярные структуры, в которых многократно представлены встроенные эпитопы, приближаются к частицам вируса ящура (табл. 17.1). В то же время химерный белок /3-галактозидаза — протективный эпитоп белка VP1 вируса ящ)фа /3-Gal/(137-162 АК)г, а тем более синтетические пептиды обладали значительно меньшей иммуногенной активностью по сравнению с частицами, формируемыми химерой HB Ag/142-160 АК. [c.436]

Вместе с тем можно обьединить два восьмиклеточных эмбриона мыши в одну гигантскую морулу, которая в результате развития образует мышь нормального размера (рис. 16-25). Животных, возникающих вследствие развития агрегатов генетически различных клеток, называют химерами. Химер можно получать также в результате иньекции клеток ранних эмбрионов в бластоцисты иного генотипа. Введенные чужеродные клетки включаются в состав внутренней клеточной массы эмбриона-реципиента и в результате образуется химерное животное. Химер можно получить даже после иньекции одной клетки это позволяет выяснить, насколько та или иная клетка сохраняет потенции к развитию. Из результатов подобных экспериментов следует важный вывод клетки очень ранних эмбрионов млекопитающих (вплоть до 8-клеточной стадии) идентичны и обладают неограниченными потенциями, т. е. они тотипотентны [c.78]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология