Градиент плотности колонки

МЕТОД, ОСНОВАННЫЙ НА ИСПОЛЬЗОВАНИИ КОЛОНКИ с ГРАДИЕНТОМ ПЛОТНОСТИ [c.144]

Плотность измеряют по уровню, на котором останавливается об-)азец полимера, помещенный в колонку с градиентом плотности. "1а рис. 31.2 показана схема устройства колонки с линейным градиентом плотности, достигаемым смешением в различных пропорциях тяжелой и легкой жидкостей. [c.144]

Рис. 31.2. Устройство для создания в колонке линейного градиента плотности.

Рис. 31.3. Калибровочная кривая для колонки с линейным градиентом плотности.

Типичная калибровочная кривая для колонки с линейным градиентом плотности приведена на рис. 31.3. После того как градиент уже установился, такую колонку можно использовать в течение нескольких месяцев. Уровень флотации можно измерять с точностью 0,5 мм. Ошибка этого метода составляет 0,0002 г/см [c.144]

Три изоэлектрическом фокусировании в вертикальной колонке между анодом и катодом электрохимически создается градиент pH. Градиент pH стабилизируется градиентом плотности, чаще всего сахарозным вся система тщательно термостатируется. Белки в колонке движутся в направлении, соответствующем их изоэлектрической точке, где фокусируются в виде очень узкой полосы. Две соседние полосы могут быть разделены интервалом всего лишь в 0,01 единицы pH. Считается, что изоэлектрические точки белков в обычных экспериментальных условиях близки к их изоионным точкам, т. е. к тем значениям pH, при которых белки остаются изоэлектрическими в условиях полного отсутствия добавленного электролита [129]. [c.164]

Электрофорез в градиенте плотности. В качестве среды используют жидкость, стабилизированную добавлением глицерина, гликолей или сахарозы, создающих градиент плотности. Этой жидкостью, более тяжелой, чем фракционируемый раствор, заполняют внутреннюю трубку стеклянной охлаждаемой колонки. Дно трубки закрыто пористой стеклянной пластинкой. К обоим концам колонки присоединяют два электродных сосуда и проводят электрофорез. [c.145]

Параметры решеток можно легко измерить с указанной в таблице точностью. Если параметры решетки и плотность измерены при разных температурах, следует вводить поправки. Плотность лучше определять флотацией порошкообразного вещества в жидкостной колонке с определенным градиентом плотности. Этот метод применим к небольшим количествам вещества. Его преимущество состоит в том, что резкая очерченность слоя указывает на однородный состав вещества. Два различных кристаллических вещества, присутствующих в пробе, будут разделяться на два различных слоя, и можно определить плотности каждого из них. Относительная ошибка обычно не превышает 0,1%, как показано в табл. 86 и 87. Этого достаточно для установления мольного отношения с требуемой точностью. [c.432]

Швеция) в двух модификациях, имеющих одинаковую высоту, но раз-, личный объем (ПО и 440 мл). Рабочей частью колонки, в которой помещаются амфолиты-носители и создается градиент плотности, является камера, имеющая в поперечном разрезе вид кольца. Нижний электродный раствор обеспечивает контакт с нижним электродом, расположенным в -центральной трубке таким путем достигается отвод газов из электродного пространства без нарушения градиента плотности. Эффективное термостатирование, препятствующее конвекции вследствие возможного нагрева, достигается с помощью внутреннего и наружного холодильников [2 и 3). Внутренний холодильник фиксируется с помощью конического шлифа, расположенного непосредственно под верхним электродом. По окончании фокусирования нижний электродный буфер (в центральной трубке) изолируют от рабочей камеры с помощью крана 6, после чего содержимое камеры сливают через капилляр 7. [c.303]

Затем через второй патрубок медленно (4 мл/мин) по стенке подают в колонку рабочий раствор, формируя при этом ступенчатый или плавный градиент плотности. При создании ступенчатого градиента в 33 нумерованные пробирки помещают по О, 0,1, 0,2... 3,2 мл разбавленного раствора сахарозы с амфолитами и по 3,2, 3,1, 3,0, 2,9... О мл концентрированного раствора сахарозы. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и поочередно, вручную или с помощью перистальтического насоса, вносят в рабочую камеру. [c.307]

По завершении опыта отключают напряжение и осторожно закрывают кран рабочей камеры. Вводят пластиковый шланг (диаметром 1—2 мм) через верхний патрубок и удаляют нижний электролит. Эта операция позволяет избежать загрязнения рабочего раствора в случае подтекания крана. Целесообразно также удалить верхний электролит (в количестве, примерно соответствующем исходному объему), поскольку кислота или основание быстро диффундируют в верхний слой рабочего раствора. Сливают содержимое колонки через короткий отрезок шланга (диаметр 1 мм), через кювету проточного денситометра и перистальтический насос (1 мл/мин) в коллектор. Для сохранения градиента плотности раствор подают в ячейку денситометра снизу вверх при этом следует избегать задержки пузырьков воздуха в ячейке. Элюат удобно собирать фракциями объемом 3—4 мл. [c.308]

Рис. 4. Контрольное электрофокусирование в градиенте плотности на колонке объемом 110 мл в отсутствие образца.

Более правильно предположение, что гранулированный носитель стремится осесть, вызывая в горизонтальной колонке вертикальные градиенты плотности и линейной скорости [c.65]

Первоначальная стабильность зоны. Если концентрация исследуемого вещества настолько велика, что оно заметно изменяет плотность раствора, необходимо, очевидно, соответственно уменьшить концентрацию сахарозы в исходной зоне (рис. 12, а). Для определения плотности можно воспользоваться пикнометром, ареометром или, как предложил Свенсон, определять плотность но глубине погружения капли раствора во вспомогательной колонке с градиентом плотности, образованным неполярными жидкостями. [c.77]

Конструкция колонки. Простейшая конструкция колонки сходна с конструкцией прибора для работы в градиенте плотности, изображенного на рис. 10. Необходимо только установить в нижней части рабочего участка ячейки фильтр, удерживающий набивку , а также предусмотреть возможность отсоединения нижней части колонки от остального прибора и присоединения к ней насадки с капилляром для сбора фракций. Как уже говорилось, первоначальная зона вводится сверху, поэтому боковой и нижний капилляры не нужны. [c.88]

Седиментация под влиянием центрифугирования происходит при скорости, зависящей от размера капель эмульсии. Пинтер и Зильвесмит (1962) фракционировали эмульсии М/В по размерам частиц седиментацией в колонке с сахарозой. Они получали слои с различными плотностями. Градиент плотности создавали при смешивании 50 и 30% растворов сахарозы. Смесь помещали в пробирку емкостью 100 и далее вводили 1 мл эмульсии М/В в 50% растворе сахарозы. В нижнюю часть пробирки вводили 5 мл 60% раствора сахарозы. Центрифугирование проводили при скорости до 2800 об1мин. [c.153]

ИЗОЭЛЕКТРОФОКУСИРОВАНИЕ, метод разделения и анализа амфотерных в-в, гл. обр. белков, в электрич. поле в среде с изменяющимся в определ. направлении pH. В-ва при зтом смещаются к катоду или аноду до тех пор, пока каждое из них не достигнет зоны, pH к-рой совпадает с его изоэлектрич. точкой, и не сконцентрируется в ней ( фокусирование ). Градиент pH создают, помещая в электрич. поле смесь амфолитов с широким набором изоэлектрич. точек, напр, смесь полиаминов, замещенных в разл. степени карбоксиалкильными группами (т. н. амфолинов). Для стабилизации градиента разделение проводят в вертикальных колонках с градиентом плотности, наполненных сахарозой или глицерином, либо в слоях гелей (полиакриламида, се-фадексов). Метод обладает высоким разрешением и примен. для выделения и очистки от десятков миллиграммов до неск. граммов белков, идентификации (неск. мкг) и анализа их сложных смесей и т. д. [c.216]

Наиболее распространенными методами оценки абсолютной плотности высокомолекулярных веществ являются пикнометриче-ский метод, метод, основанный на использовании колонки с градиентом плотности, и дилатометрический метод. [c.143]

Изоэлектрическое фокусирование [42 — 45] в линейном градиенте pH позволяет разделить белки, характеризующиеся различными изоэлектрическими точками. Для создания градиента используют носители с цвнттер-ионными свойствами — алифатические полиаминополикарбоновые кислоты, имеющие М 200 — 700. При движении в градиенте pH суммарный заряд белка постоянно меняется, и в области pH, близких к изоэлектрической точке, становится равным нулю. Соответствующий белок фокусируется , образуя узкую зону. При препаративном фокусировании в колонке стабилизация градиента pH осуществляется с помощью градиента плотности используемого буферного раствора, однако чаще работают с плоскими слоями полиакриламидного или гранулированного геля. Опубликовано краткое сообщение о непрерьтном электрофокусировании без носителя [46]. Эффективность электрофокусирования высока. Так, возможно, например, разделить белки, различающиеся по ИЭТ лишь на 0,01 единицы pH. При разделении сыворотки образуется более 40 белковых полос. [c.351]

Изоэлектрическое фокусирование. В качестве среды используют жидкость, в которой создают объединенный градиент плотности и pH. Градиент pH достигают прибавлением ам.-фолитов, представляющих собой готовую смесь алифатических полиаминополикарбоновых кислот, или экспериментально подобранных смесей, которые при приложении электрического напряжения концентрируются в узких зонах своих изоэлект-рических точек (р1). В результате в колонке создается градиент pH от 1 до 11. При электрофоретическом разделении, например смеси белков, каждый из них перемещается, пока дойдет до зоны, соответствующей его р1. [c.145]

Плотность полимерных материалов легко поддается измерению, что полезно при наблюдениях за изменениями физических свойств, а также при контроле единообразия образцов. Стандарт ASTM D1505 [32] задает метод определения плотности по наблюдению за уровнем, на который образец погружается в жидкостной колонке с градиентом плотности по сравнению со стандартными объектами известной плотности. [c.319]

Рис. 2. Схема колонки конструкции Вестерберга и Свенссона для электрофокусирования в градиенте плотности.

Гис. 5. Электрофокусирование гемоглобина человека в градиенте плотности на колонке Вестерберга и Свенссона (время опыта 65 ч) [1]. [c.315]

Из других тканей ядра иногда выделяют следующим образом хорошо размельченную ткань обрабатывают слабой кислотой, например лимонной, затем подвергают дифференциальному центрифугированию и осадок промывают очень разбавленной кис.по-той (фото 2). Напомним, что Мишер изолировал ядра из клеток гноя, пользуясь для этого разбавленной уксусной кислотой. Существует еще и метод с использованием лимонно кислоты, развитый и улучшенный Даунсом [142, 143], а также Мирским и Поллистером ]144], в чьих работах и можно найти его подробное описание. Изолировав при помощи лимонной кислоты ядра при различных значениях pH, Даунс [142] установил, что ядра, полученные при pH значительно ниже 3,0, несомненно, теряют большую часть содержащегося в них гистона. Поэтому при анализе всей такой ядерной массы данные о содержании нуклеиновых кислот и липидов бывают завышенными. Ядра же, изолированные при pH 6,0—6,2, оказываются лишенными некоторого количества нуклеиновой кислоты и, но-видимому, белков. В большинстве случаев для получения изолированных ядер, свободных от цитоплазматических остатков, применяют повторное промывание ядерной фракции разбавленным раствором хлористого натрия или лимонной кислоты. Не удивительно поэтому, что, как показали Мирский и его сотрудники [224], химическое определение белка всей массы изолированных таким путем ядер дает значительно более низкие величины, чем анализ ядер, выделенных в безводной среде. Впервые выделение ядер в безводной среде было осуществлено Беренсом [145]. Измельченную и лиофили-зированную ткань подвергали седиментации в колонках с градиентом плотности органических растворителей. В дальнейшем этот метод был модифицирован и улучшен [144—147]. Преимуще- [c.136]

У бактериофагов а и SP8 две цепи ДНК настолько различаются но плотности, что в градиенте плотности хлористого цезия или на колонке с метилированным сывороточным альбумином их можно разделить на тяжелую и легкую цепи ДНК. В опытах in vitro обе цепи могут служить затравкой для РНК-нолимеразной реакции. Однако если из зараженной фагом бактериальной клетки выделить РНК, синтезированную in vivo, то такая РНК образует [c.237]

Изучение радиоактивности нуклеотидов, входящих в состав быстрометящейся РНК, показало, что по своему нуклеотидному составу эта РНК соответствует ДНК (табл. 22) пг-РНК может образовать гибриды с ДНК тех клеток, в которых она возникает [79, 95]. Ее можно выделить на колонках, содержащих соответствующую ДНК [27, 28], или путем центрифугирования в градиенте плотности. [c.243]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология