Обнаружение с помощью нингидрина

Рис. 50. Обнаружение аминокислот с помощью нингидрина.

При обнаружении тиофена как примеси в бензоле или толуоле выпаривают досуха несколько капель растворителя с небольшим количеством серной кислоты. При этом тиофен пре вращается в сульфокислоту, которая остается в серной кислоте Ее обнаруживают с помощью нингидрина (используют приготовленный 1%-ный раствор в концентрированной серп [c.270]

Для разделения веществ с помощью бумажной хроматографии нарезают полоски бумаги длиной 15— 30 см и шириной несколько сантиметров. На расстоянии 2—3 см одного из концов полоски бумаги наносят каплю исследуемого раствора и место старта отмечают простым карандашом. После испарения растворителя конец бумаги, на который нанесена проба, приводят в соприкосновение с растворителем (ПФ). Затем бумагу и растворитель помещают в закрытый сосуд (обычно цилиндр или стеклянный колпак), чтобы предотвратить потери при испарении. После прохождения растворителя через полоски бумаги ее вынимают, сушат и определяют положение различных компонентов, С этой целью опрыскивают бумагу соответствующими реагентами, которые с компонентами разделенной смеси образуют окрашенные соединения. Для обнаружения аминов или аминокислот, например, действуют раствором нингидрина, который с этими веществами образует соединение голубого или пурпурного цвета. [c.616]

Если вещества, подвергаемые хроматографированию на бумаге, бесцветны, то для обнаружения образовавшихся зон следует, после высушивания хроматограммы, применить соответствующий реагент, раствором которого обрызгивают бумагу при помощи пульверизатора. В случае хроматографирования смеси аминокислот обычно применяют нингидрин, вещества кислотного или основного характера обнаруживают соответствующим индикатором, иногда пользуются разбавленным раствором перманганата и т. п. Нередко лучшие результаты можно получить при рассматривании хроматограммы в ультрафиолетовом свете. [c.303]

Нингидрин может быть использован для обнаружения катионных комплексов никеля, кобальта и хрома [110]. Комплексы никеля и кобальта с этилендиамином дают с нингидрином более интенсивное окрашивание, чем их аммиачные комплексы. При анализе с помощью хроматографии на бумаге они дают окрашенные пятна, устойчивые в течение нескольких месяцев. [c.24]

Для количественного определения аминокислот и пептидов по приведенным выше реакциям требуется колориметр или фотометр, с помощью которых обнаруживают изменения в свето-поглощении, связанные с протеканием реакций. Поскольку нингидрин наиболее широко используется для обнаружения аминокислот и белков, он послужит основой для дальнейшего обсуждения колориметра. [c.26]

Циклосерин на хроматограммах можно выявлять при помощи биоавтографических реакций [621, 787], но более удобны химические методы обнаружения. Этот антибиотик дает желто-коричневую окраску с нингидрином [1343, 1344] и темно-красную с хлорным железом [1343]. Можно также производить опрыскивание 4%-ным водным раствором нитропруссида натрия. В этом [c.216]

Тонкослойная хроматография [70]. Пантотеновую кислоту можно идентифицировать с помощью хроматографии на силикагеле О. Подвижным растворителем служит вода или смесь ледяная уксусная кислота — ацетон — метиловый спирт — беиз ол (5. 5 20. 70) Для обнаружения пятен хроматограмму нагревают в течение 30 мин до 160°С, опрыскивают раствором нингидрина (см. IX. 3. а) и снова нагревают в течение короткого времени. [c.489]

Фурлан и Бек [164а] сравнивают два реактива для детектирования— флуорескамин и нингидрин — на примере обнаружения пептидов на слоях целлюлозы. В приведенном примере при анализе фрагмента, ,d фибриногена с помощью флуорескамина можно обнаружить не менее 35 пятен, а с помощью нингидрина только 20. [c.511]

Так, при исследовании состава сложных смесей липидов на пластинах с силиказолевым связующим пластину последовательно опрыскивают нингидрином (липиды со свободной аминогруппой), молибдатным реактивом (главные фосфолипиды) с последующим нагреванием при 180°С (все присутствующие в смеси липиды), реактивом на основе малахитового зеленого (контроль результатов, полученных с помощью молибдатного реактива, и обнаружение фосфолипидов, присутствующих в очень малых количествах). Для опрыскивания пластин применяют пульверизаторы разной конструкции или продажные реагенты в аэрозольной упаковке. Точность количественных определений сильно зависит от качества и воспроизводимости детектирования, в особенности при опрыскивании хроматограмм. [c.364]

Хартел и Плеймикерс [112] использовали бумагу с четвертичными азотными группами для количественного определения цистеиновой кислоты в гидролизате белков. В восходящем методе хроматографии проявляли 0,34 М хлоруксусной кислотой. После проявления высушенную бумагу обрабатывали нингидрином для обнаружения красных пятен и с помощью денситометра определяли количество цистеиновой кислоты в пятне. По мнению авторов, ни одна из аминокислот, найденных в белке, не перекрывалась с цистеиновой кислотой. Точность метода была проверена авторами на шестнадцати определениях этой кислоты в гидролизате 1 г шерсти. Средние значения составили 1,25% при относительной средней ошибке 3%. [c.323]

Как можно видеть из данных табл. 4 и рис. 26 и 28, смесь фосфолипидов семян сои на пластинках с закрепленным слоем силикагеля делится на 13 пятен. Эти липиды были идентифицированы нами при помощи метчиков (фосфатидная кислота, фосфатидилэтаноламип, фосфатидилхолин, фосфатидилинозит, сфингомиелин) и при проведении специфических реакций (опрыскивание нингидрином для обнаружения азотсодержащих фосфолипидов, раствором Драгендорфа — для обнаружения фосфолипидов, содержащих холип, и т. д. см. стр. 30). Определение содержания фосфора в пятнах хроматограммы показало, что главными фосфолипидами семян сои являются фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламип. [c.39]

Качественные реакции изучаемого вещества можно определить, обрабатывая хроматограммы различными реагентами. При совпадении значений Кг окрашенного пятна и зоны подавления тест-микроба в нескольких системах растворителей можно считать, что вещество дает качественную реакцию. При изучении антибиотиков следующие качественные реакции определяли непосредственно на хроматограммах диазотирования и сочетания с резорцином (для обнаружения ароматических аминогрупп) [313], с диазотированной сульфаниловой кислотой (для выявления фенольных групп) [313], перманганатом калия, нингидрином, о-толидином (после обработки хлором) [25], 2,4-динитрофенил-гидразином [627], азотнокислым серебром, хлорным железом, парами брома [117] и т. д. При изучении пенициллинов и близких веществ неразомкнутое 3-лактамное кольцо определяли на хроматограммах при помощи реакции со щелочью (или пенициллиназой) и иод-крахмальным реагентом [263, 628—633]. [c.67]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

Цветная реакция Фолина—Лоури очень удобна для обнаружения пептидов. Она наиболее чувствительна в случае длинноцеиочечных пептидов, содержащих фенольные группы, однако с ее помощью можно определять и простые пептиды неароматического характера. В отличие от нингидринной реакции реакция Фолина — Лоури не требует нагревания и ее проведению не мешает присутствие аммиака. Пиридин и коллидин затрудняют проведение реакции, поэтому указанные соединения должны быть удалены из образца путем его высушивания. Значение pH образца должно быть близко к нейтральному. Кривая зависимости интенсивности окраски от концентрации не линейна, поэтому для точного измерения концентрации необходимо строить стандартную калибровочную кривую (см. табл. 5). [c.131]

Постоянную скорость элюирования задают с помощью перистальтического насоса. Элюат, собираемый на фракционном коллекторе, анализируют в потоке или выборочно по фракциям на содержание белка, для чего обычно регистрируют изменение оптической плотности при 280 нм. Другие методы детектирования используют при отсутствии в белке хромофоров (остатков триптофана и тирозина), при работе иа микроуровне или при слишком высоком поглощении при 280 нм, например благодаря присутствию кофактора. В этих случаях можно определять оптическую плотность при 220 им, интенсивность флуоресценции или радиоактивность (при работе с мечеными белками) [14, 161] наконец, при анализе белковых фракций можно использовать химическую модификацию (разд. 1.4.5.1). Например, определенные объемы (аликвотные части) отдельных фракций можно подвергнуть щелочному гидролизу и последующему анализу по реакции с нингидрином. Для обнаружения белков можно использовать реакцию Лоури или реакцию связывания кра-снтеля. Последний метод вполне можно рекомендовать как наиболее простой и чувствительный, причем этому определению не мешает присутствие химических реагентов. Кроме того, состав фракций можно определять с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. [c.23]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология