Гликопротеины метилирование

У метода метилирования есть ряд недостатков, связанных с техникой его выполнения. Он не всегда применим для установления положения неуглеводных заместителей, в первую очередь ацильных групп, отщепляющихся частично или полностью под действием оснований при метилировании при этом, например в случае сульфированных полисахаридов, могут происходить глубокие изменения моносахаридов. Вообще накопление неуглеводных заместителей снижает ценность метода метилирования, так как увеличивается число возможностей при воссоздании структуры полисахарида. Ьто одна из причин незначительного применения метода метилирования при изучении мукополисахаридов и гликопротеинов. Даже довольно устойчивые к щелочам полисахариды при метилировании часто претерпевают деструкцию так что количество концевых мо- [c.497]

Последовательность мономеров в пептидных и олигосахаридных цепях. Для определения этой последовательности используются два пути— изучение последовательности мономеров в выделенных после глубокой деструкции фрагментах гликопротеинов и установление строения концевых групп гликопротеина. Нужно при этом иметь в виду, что общие методы, используемые при анализе структуры полисахаридов, — метилирование и периодатное окисление (см. гл. 19) в применении к самому гликопротеину могут дать пока крайне ограниченную информацию. Дело в том, что метилирование гликопротеинов, видимо из-за особенностей их вторичной структуры, с большим трудом проходит до конца и чаще всего [c.573]

Метилирование как метод структурного исследования гетеросахаридов в гликопротеинах, безусловно, имеет большое значение, хотя в этой области В настоящее время его применяют относительно редко. Главные ограничения этого метода состоят в том, что с его помощью нельзя получить сведений о последовательности расположения моносахаридных остатков в углеводных цепях гликопротеинов, а также о конфигурации гликозидных связей. Тем не менее при сочетании метилирования с другими методами структурного исследования, такими, как периодатное окисление и частичный гидролиз, этими ограничениями моншо пренебречь. [c.261]

Поскольку многие гликопротеины содержат лишь небольшое количество углеводов, для их анализа могут быть использованы протеолитические ферменты (например, проназы) при обработке этими ферментами образуются гликопептиды с небольшим числом аминокислотных остатков, к которым присоединены интактные углеводные звенья. Такие гликопептнды анализируют [188] классическими методами периодатного окисления [189] и метилирования, а также последовательным ферментативным гидролизом (см. разд. 26.3.2.11) для идентификации моносахаридных звеньев, в результате которого получают единственный аминокислотный остаток, связанный с моносахаридным звеном. Установлено, что осуществляются только два типа такой связи 0-гликозидная связь с серином, треонином, гидроксипролином и гидроксилизином, и Л -гликозидная связь с аспарагином. Показано, что в образовании таких связей могут участвовать только пять моносахаридов -арабиноза, D-ксилоза, D-галактоза, 2-ацетамидо-2-дезокси-0-глюкоза и 2-ацетамидо-2-дезокси-0-галактоза. [c.265]

Трансферрин — гликопротеин, который образует комплексы с железом и служит для перевода железа, содержащегося в тканях (особенно в печени) в резервной форме, в его метаболически активную форму в гемоглобине. Методами периодатного окисления, метилирования и расщепления гликозндазой [207] установлено, что олигосахаридные цепи трансферрина имеют структуру (53). [c.268]

Следует подчеркнуть, однако, что значительно больший удельный вес имеет посттрансляционная химическая модификация белков, затрагивающая радикалы отдельных аминокислот. Одной из таких существенных модификаций является ковалентное присоединение простетической группы к молекуле белка. Например, только после присоединения пиридоксальфосфата к -аминогруппе остатка лизина белковой части—апо-ферменту—образуется биологически активная трехмерная конфигурация аминотрансфераз, катализирующих реакции трансаминирования аминокислот. Некоторые белки подвергаются гликозилированию, присоединяя олигосахаридные остатки (образование гликопротеинов), и обеспечивают тем самым доставку белков к клеткам-мишеням. Широко представлены химические модификации белков в результате реакции гидроксилирования остатков пролина, лизина (при формировании молекул коллагена), реакции метилирования (остатки лизина, глутамата), ацети-лирования ряда N-концевых аминокислот, реакции карбоксилирования остатков глутамата и аспартата ряда белков (добавление экстра-карбоксильной группы). В частности, протромбин (белок свертывающей [c.532]

Вилкас и Лвхдерер [4г1 применили эту методику для О- и N-ме-тилиропания природных гликопротеинов и считают, что она эффективнее метилирования по Куну. Метилирование является удобным прие юм при установлении строения пептидов методом масс-спект-рометрии. [c.135]

ГЖХ ацетатов альдитов представляет собой эффективный и точный метод определения содержания альдоз в биологических материалах. Разделение ацетатов альдитов, начиная с триацетата глицерина и кончая октаацетатами октитов, методом ГЖХ было впервые описано в 1961 г. [1, 2]. Несмотря на то что пригодность метода для количественного анализа была доказана, он не находил широкого применения из-за сложности подготовки колонки кроме того, не удавалось разделить D-глюцит и галактит. В последующие четыре года существенного прогресса не наблюдалось. В 1965 г. была предложена новая жидкая фаза EGNSS-M— сополимер сукцината этиленгликоля и цианоэтил-кремния, — которая оказалась пригодной для разделения всех простых альдитов вплоть до гекситов [3]. С этого времени метод ГЖХ с успехом применяется для определения содержания нейтральных альдоз в гемицеллюлозах древесины [4], полисахаридах клеточных стенок растений [5], гликопротеинах [6—8] и почвенных гидролизатах [9], а также для определения альдоновых кислот в целлюлозе древесины 10], частично метилированных альдоз [11] и продуктов периодатного окисления олигосахаридов [12]. [c.22]

Посттрансляционная модификация белка включает следующие процессы химическую модификацию белка (часто отсутствует) — метилирование по аминогруппе лизина и аргинина, фосфорилирование по ОН-группе серина, окисление лизина, пролина и др. связывание простетической группы связывание между собой субъединиц олигомерного белка частичный протеолиз. Например, ттосттрансляционная модификация при биосинтезе гликопротеинов происходит следующим образом. Полисомы связаны с внешней поверхностью мембраны эндоплазматического ретикулума клеток через большую субъединицу рибосомы. Синтезированные полипеп- [c.317]

Есть основания полагать, что строение каратансульфата значительно сложнее, чем представлено на рис. 133. Так, небольшой выход кристаллических метилированных производных указывает на возможность разветвленной структуры. Более того, получены данные, свидетельствуюшие о некотором сходстве его с гликопротеинами — групповыми веществами крови. В препаратах кератансульфата обнаружены значительные количества фукозы, сиаловой кислоты и аминокислот. [c.232]

Для контроля за ходом метилирования наиболее широко применяется определение содержания метоксильных групп в продукте реакции [142]. Такие определения могут быть сделаны с высокой точностью и являются очень ценными. Однако в связи со сложностью углеводной части гликопротеинов необходимо привлекать дополнительные аналитические приемы. Для этой цели чрезвычайно широко используется инфракрасная спектроскопия [136, 139, 143, 144]. Метилирование проводят до постоянного поглощения света продуктом в области 3400—3600 см . Уолленфелс и сотр. [137] подчеркивали удобство применения этого метода. С его помощью можно обнаружить не полностью метилированные производные в количестве до 1 % спектр может быть снят для растворов вещества в сухом четыреххлористом углероде, для вещества в твердом состоянии — с хлористым натрием и непосредственно для сиропообразного продукта. [c.256]

Дополнительное доказательство присутствия 2-ацетамидо-2-дезокси-в-глюкозы в ai-кислом гликопротеине плазмы человека было получено Джин-лозом и сотрудниками с помощью мягкого кислотного гидролиза. Из гидролизата выделили кристаллическую 2-ацетамидо-2-дезокси-4-0-( 3-в-галакто-пиранозил)-а-о-глюкопиранозу, которую идентифицировали несколькими методами с помощью получения кристаллического октаацетата [31], путем выделения метил-2-ацетамидо-2-дезокси-3,6-ди-0-метил-а-п-гликопиранозида из метилированного -кислого гликоиротеина [90], а также по выделению 2-ацетамидо-2-дезокси-в-глюкозы после обработки очищенной P-N-ацетил-глюкозаминидазой (КФ 3.2.1.30) [91]. [c.79]

При изучении гликопротеинов метод метилирования применяется сравнительно редко. Было показано, что этот метод может дать ценную информацию о структуре гликопротеинов, устойчивых в щелочной среде, таких, как -кислый гликопротеин. Метод метилирования использовался для изучения нативного -кислого гликопротеипа, а также для гликопротеина, не содержащего сиаловой кислоты. После четырех обработок диметилсульфа-том в присутствии едкого натра при 5° содержание введенных метоксильных групп достигало постоянной величины 17—18%. В результате метанолиза обоих препаратов и последующей хроматографии на силикагеле был выделен кристаллический метил-2-ацетамидо-2-дезокси-3,6-ди-О-метил-а-п-глюко-пиранозид [90, 120]. После гидролиза метилированного производного гликопротеина, не содержащего сиаловой кислоты, и последующего разделения продуктов на колонке с ионообменной смолой была получена 2-амино- [c.89]