Белки по количеству аминокислот после кислотного гидролиза

Кислотный гидролиз, который происходит при нагревании белков с 25%-ной серной кислотой или 20%-ной соляной кислотой при 100—105° в течение 20—24 часов. Для этого часто используют также смесь концентрированной соляной и уксусной кислот (1 1). Обычно берут 10—20-кратное количество кислоты к весу белка, но чем шире это отношение, тем меньше потерь при гидролизе. После окончания гидролиза кислоту удаляют и образовавшуюся смесь аминокислот используют для анализов. Применение серной кислоты менее удобно, чем соляной, так как последнюю легче удалить из смеси. При кислотном гидролизе триптофан полностью разрушается, а глутамин и аспарагин дают соответствующие аминокислоты и аммиак. [c.203]

Организм человека и животного способен адаптироваться к изменению режима питания и его белковой части. Но иногда механизмы ферментативной адаптации оказываются недейственными и утилизация белка нарушаете. . Это может наблюдаться при наличии или при образовании особых свойств пищевых белков в результате жесткой или необычной обработки при приготовлении пищи. В подобных случаях возникает несоответствие между данными, полученными химическими методами, и фактическими результатами утилизации аминокислот в эксперименте на животных. Так, из общего количества аминокислот, находящихся в белке, определенного химическим анализом после кислотного гидролиза, организмом усваивается лишь определенная доля. Об остальных аминокислотах говорят как о недоступных . Это расхождение между общим количеством аминокислот и действительно утилизированным их количеством трудно предвидеть, что ведет к различным ошибкам в определении качества белка пищи. [c.7]

Первый вопрос, который возникает каков суммарный аминокислотный состав данного белка Техника определения этого состава со времени Э. Фишера ушла далеко вперед по точности (достигающей 99%) и по скорости операции. После кислотного или щелочного гидролиза (кислотный гидролиз разрушает триптофан и приходится комбинировать оба способа расщепления) раствор смеси аминокислот при pH 2 пропускают черев ионообменник (сульфированный полистирол в виде натриевой соли), который связывает все аминокислоты за счет их аммонийной функции, и аатем постепенно элюируют кислыми буферными растворами с pH, увеличивающимися от 3,5 до 5,5 и затем до И, т. е. все менее кислыми. Акинокислоты вымываются в порядке уменьшающейся кислотности под конец, при буфере pH 11, идет вымывание диаминокислот. В настоящее время все операции разделения производятся на автоматических аналива-торах, в которых смена буферных растворов совершается автоматически, а количество выделенных аминокислот определяется фотометрически по интенсивности сине-фиолетовой окраски, возникающей при реакции с нингидрином, который образует со всеми аминокислотами один и тот же краситель в результате следующих реакций [c.696]

Кислотный гидролиз. Для полного расщепления белков на аминокислоты чаще всего применяют концентрированные кислоты, в частности 6 н. соляную кислоту. Полный гидролиз происходит при кипячении белка с 20- или даже 200-кратным количеством кислоты. Для уменьшения разложения аминокислот нагревание проводят в запаянной эвакуированной ампуле при 105° С в течение 12—48 ч. После завершения гидролиза соляную кислоту удаляют в вакууме, а аминокислоты выделяют в виде гидрохлоридов. Для гидролитического расщепления в ряде случаев исполь- [c.66]

Как мы увидим в гл. 6, первым шагом на пути установления структуры данного белка является его гидролитическое расщепление на составляющие аминокислоты. После этого необходимо определить, какое количество аминокислот каждого типа содержится в этом белке. Казалось бы, должно потребоваться много труда и терпения для того, чтобы разделить образовавшуюся после гидролиза смесь аминокислот, идентифицировать их и количественно определить со-держЫие каждой из 20 аминокислот. Однако в настоящее время разработаны очень эффективные и чувствительные методы, позволяющие решать такие задачи достаточно быстро. К подобным методам относятся, в частности, электрофорез и ионообменная хроматография. Оба этих метода основаны на различиях в кислотно-оснбвных свойствах аминокислот, т. е. на различиях в знаке и величине суммарного электрического заряда при данном значении pH, которые можно легко предсказать исходя из величин рК й кривых титрования исследуемьк аминокислот. [c.123]

Метод микробиологического анализа, проводимого, как правило, с применением инф) зории Те1гаЬутеп5 руп1огт 5, связан с построением калибровочной кривой роста этого организма в синтетической среде с добавлением различных количеств исследуемой аминокислоты при всех прочих равных условиях. В исследуемом продукте после кислотного и щелочного гидролиза белков, в процЕссе которого разрушаются все без исключения химические связи, на автоматическом анализаторе определяют содержание данной аминокислоты и по калибровочной кривой находят ожидаемый рост инфузории. При добавлении продукта к среде выращивания регистрируют действительный рост организма и после сравнения с ожидаемой величиной рассчитывают степень доступности аминокислоты. Существует несколько модификаций этого метода. [c.10]

Бах И Феллиг [52] и Бах [53] не согласились с выводом о том, что неизвестные метаболиты 1 и 3 представляют собой белковые комплексы 2,4-Д. Так же как и Яворски и Баттс [47], они нашли, что через несколько дней после обработки основная часть 2,4-Д превращается в биологически неактивный комплекс, который хроматографируется на бумаге медленнее, чем 2,4-Д [52, 54]. При кислотном гидролизе этого комплекса образуется вещество с близким к R 2,4-Д. Дальнейшие исследования [53, 55] показали, что этот комплекс — главный меченый компонент фракции экстрактов фасоли, растворимых в воде и нерастворимых в эфире, — состоит из нескольких меченых метаболитов, которые были разделены на колонке с древесным углем [55]. Сложный состав подтверждают также результаты хроматографии на бумаге на хроматограммах проявилось по крайней мере шесть главных компонентов [53]. При гидролизе каждого из этих шести компонентов получался ряд аминокислот и два меченых соединения, растворимых в эфире и идентичных двум главным компонентам растворимой в эфире фракции экстрактов фасоли. Среди продуктов гидролиза определены 10 аминокислот. Бах [53] считает, что нерастворимые в эфире меченые продукты метаболизма 2,4-Д не являются полипептидами или белками, как это предположили Баттс и Фанг [51], так как их поведение при ионообменной хроматографии, хроматографии на бумаге и экстракции органическими растворителями противоречит этому предположению. По мнению Баха, истинные метаболиты были все еще загрязнены относительно большими количествами связанных аминокислот, например амидами, образованными аминокислотами с различными продуктами обмена веществ в растении. По этой причине могла отсутствовать прямая корреляция между аминокислотами, которые идентифицируются после гидролиза различных меченых фракций, и аминокислотами, которые, как полагают, связаны с мечеными кислотами, образующимися из [c.20]

Эти различия объясняются не только сортовыми, видовыми или технологическими различиями, а главным образом условием проведения гидролиза пищевого продукта. При стандартном кислотном гидролизе (6н. НС1, ПО—120°С, 22—24 ч) происходит частичное разрушение некоторых аминокислот, в том числе треонина, серина (на 5—10%) и особенно метионина (30—60%) и цистина 56—60% (см., например, работу [14]), а также практически полное разрушение триптофана [16]. Этот процесс усиливается в присутствии больших ( лее 50% на сухую массу) количеств углеводов в продукте. Несколько уменьшить это разложение можно за счет более сильного разбавления образца серной кислотой (например, вместо 100 мг белка берут 2—5 мг), но границы этого разбавления определяются чувствительностью прибора и в большинстве случаев они не могут быть очень большими. Для количественного определения метионина и цистина рекомендуется проводить предварительное окисление их надмуравьиной кислотой [14, 24]. При этом цистин превращается в цистеиновую кислоту (цветовой выход 1,75), а метионин — в метионин-сульфон (цветовой индекс — 0,8), которые весьма устойчивы при последующем кислотном гидролизе. Окисление проводится по методике, описанной в работах [12, 14], при температуре 4° С в темноте в течение 1 — 10 ч из расчета 1 мл надмуравьиной кислоты на 2—5 мг белка. Немедленное и тщательное удаление надмуравьиной кислоты после окончания гидролиза (например, в роторе или вакуум-эксикаторе над NaOH) предотвращает потери. [c.282]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология